鼠抗人肥大细胞类糜蛋白酶N端片段抗体的制备与鉴定

目的:在大肠杆菌中表达人肥大细胞类糜蛋白酶(hMCC)N端片段(hMCC-N),并制备其鼠源性多克隆抗体。方法:通过PCR法扩增hMCC-N端基因片段,将其克隆至pMAL-c2x原核表达载体,转化大肠杆菌BL21(DE3),用IPTG诱导重组蛋白的表达,通过Amylose树脂亲和层析纯化目的蛋白,以纯化的重组蛋白免疫小鼠,制备鼠抗hMCC-N端片段多克隆抗体,并以间接ELISA测定抗体效价,以Westernblot鉴定抗体的特异性。结果:PCR扩增得到360bp的hMCC-N端基因片段,克隆入表达载体pMAL-c2x,构建了与标签蛋白麦芽糖结合蛋白基因融合表达载体pMAL-c2x/hMCC-N,融合蛋白在大肠杆菌中得到了稳定表达,并经亲和层析,纯化出可溶性的重组蛋白,用其免疫小鼠,获取了鼠抗hMCC-N端片段的多克隆抗体,ELISA结果显示效价达1∶12800,Westernblot分析表明该抗体能特异结合hMCC。结论:成功地制备了效价高、特异性较强鼠抗hMCC-N端片段抗体,为进一步建立hMCC的ELISA检测方法打下了良好的基础。     

幽门螺杆菌ssDNA适配子的筛选及其应用

目的通过富集的配基系统进化技术(SELEX)筛选出与幽门螺杆菌(HP)菌体具有高亲和性适配子,并且利用其检测组织和活体内HP的感染。方法培养HP细菌,利用SELEX筛选获得HP菌体的适配子。在HP感染患者活检组织验证其结合。结果从第6轮筛选所得ssDNA中筛选出一条高结合力的适配子命名为HP1,将适配子HP1区别于其他筛选出的适配子,并检测其与幽门螺旋杆菌的亲和力。结论初步获得了针对HP菌体筛选出高亲和性适配子,为开发HP诊断试剂奠定了基础。     

恶性胃肠道间质瘤的CT特点

目的：总结恶性胃肠道间质瘤（GIST）的CT表现要点。方法：回顾性分析29例经手术病理或内窥镜证实的恶性GIST患者的CT表现及临床资料。29例术前均进行CT平扫和增强扫描。结果：肿瘤位于胃部15例．小肠9例，直肠4例，小网膜1例；18例病灶呈圆形或类圆形，11例呈不规则或分叶状；增强扫描后病灶中度或明显强化，21例密度不均，8例密度均匀，其中22例以门静脉期强化明显；肿块直径大于6cm者25例。结论：CT检查所见结合临床资料对恶性GIST有一定的诊断价值。     

甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌对喹红霉素敏感性分析及其分子分型特点

目的了解酮内酯类抗生素喹红霉素对临床分离甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌(MSSA)的体外药物敏感性,以及MSSA不同分子分型型别与喹红霉素最低抑菌浓度(MIC)值的关系。方法收集深圳市南山医院2011—2015年不同临床标本分离的MSSA118株,用微量肉汤稀释法及K-B纸片法测定MSSA菌株对喹红霉素及其他9种临床常用抗金黄色葡萄球菌药物的MIC值。采用多位点序列分型(MLST)技术将其分为不同基因型,观察MSSA型别与喹红霉素对MSSA MIC值的关系。结果 MSSA对常用抗革兰阳性菌药物利奈唑胺、万古霉素、呋喃妥因、替考拉宁及阿莫西林/克拉维酸均敏感;对喹红霉素中介2株,耐药21株,耐药率19.5%,对红霉素耐药率则高达60.2%。该院MSSA分为32个ST型,20株属于新的ST型,前三的ST型分别为:ST7型15株(12.7%),ST188型12株(10.2%),ST59型12株(10.2%)。结论 MSSA对大环内酯类抗生素耐药形势严峻,喹红霉素较红霉素对MSSA更为强效。ST7、ST188、ST59和ST398是该院临床分离MSSA的主要MLST型别。     

宫颈上皮内瘤变细胞中Ki67的表达及与HPV感染相关性研究

目的研究Ki67在宫颈上皮内瘤变(CIN)细胞涂片中的表达情况及其与人乳头瘤病毒(HPV)感染的相关性,探讨Ki67作为宫颈病变筛查的一种新的有效指标的可行性。方法采用免疫组织化学检测Ki67在138例不同程度宫颈病变细胞涂片中的表达,同时取40例宫颈炎患者作对照,并与病理学及HPV分型检测结果进行比较。结果 Ki67在宫颈炎、CINⅠ、CINⅡ~Ⅲ组中的阳性率分别为7.5%(3/40)、60%(30/50)、87.5%(42/48),各组差异有统计学意义(P0.01)。HPV在宫颈炎、CINⅠ、CINⅡ~Ⅲ组中的阳性率分别为20%(8/40)、66%(33/50)、91.7%(44/48),各组差异有统计学意义(P0.01)。Ki67的表达与HPV感染在CINⅠ组、CINⅡ~Ⅲ组中呈正相关,相关系数在CINⅠ组、CINⅡ~Ⅲ组分别为0.63、0.66(P0.01)。结论 HPV的感染与宫颈鳞癌的发生密切相关,并与进展有关。检测Ki-67可作为筛查宫颈病变、判断预后的有效指标。     

BCL-2、Caspase-3、NF-KB在黄芪总苷诱导人白血病NB4细胞凋亡过程中作用

本研究探讨黄芪总苷（astragaloside,AST）对急性早幼粒细胞白血病（APL）NB4细胞株的凋亡诱导作用及其分子机制。采用AST处理人APL细胞株NB4,CCK-8比色法检测细胞增殖抑制率,FITC—Annexinv／PI双染流式细胞术检测细胞凋亡率;不同浓度AST作用NB4细胞后RT-PCR检测BCL-2mRNA表达,Westernblot检测NF-KB、BCL-2、caspase-3蛋白表达水平。结果表明,AST作用NB4细胞48h后,浓度依赖性地抑制NB4细胞的增殖,且随着AST的浓度增加,细胞凋亡率也由4．69％上升到40．85％。RT—PCR结果显示,BCL-2mRNA表达减弱;Westernblot结果显示,NF—KB及BCL-2蛋白表达减弱,caspase-3表达增强。结论：降低NF-KB、BCL-2表达并最终激活caspase-3的表达可能是AsT诱导NB4细胞株凋亡的机制之一。     

常规B超联合直肠超声检查在膀胱肿瘤中的应用研究

目的:探讨常规B超联合直肠超声检查在膀胱肿瘤中的应用。方法:对87例膀胱肿瘤患者应用常规B超及直肠超声检查,对单个和联合检查方法的显示率,准确率进行比较。结果:常规B超联合直肠超声检查与单个检查相比,显示率和准确率明显提高(P<0.05)。结论:常规B超联合直肠超声检查方法,在诊断膀胱肿瘤中具有重要的应用价值。     

胃腺癌组织EGFR基因表达及其临床意义的研究

目的:探讨胃腺癌EGFR基因表达及其与临床病理参数和术后5年生存率的关系。方法:显色原位杂交(CISH)检测55例胃腺癌组织EGFR基因表达。结果:55例胃腺癌组织EGFR基因扩增7例(阳性率12.7%);EGFR基因扩增患者5年生存率为14.3%,明显低于EGFR基因正常患者5年生存率(31.3%),χ2=11.935,P=0.001;阳性病例组织学类型均为肠型(Lauren分型);低分化(χ2=4.814,P=0.041)、浸及浆膜外(χ2=4.816,P=0.028)、临床分期为Ⅲ+Ⅳ期(χ2=4.786,P=0.029)以及有淋巴结转移(χ2=4.38,P=0.042)的胃腺癌EGFR基因扩增率明显增高。结论:EGFR基因扩增的胃腺癌分化程度低、易发生浆膜外浸润和淋巴结转移,临床分期为Ⅲ+Ⅳ期,术后5年生存率低。