儿童哮喘运动方案的最佳证据总结

目的 整合儿童支气管哮喘运动方案相关证据,为医护人员指导哮喘患儿进行运动训练提供参考依据。方法 基于“6S”证据资源金字塔模型,系统检索国内外的指南网站、相关专业协会网站及数据库,英文数据库：PubMed、Embase、Web of Science、Cochrane Library;中文数据库：中国生物医学文献数据库、中国知网、万方、维普数据库,遴选出符合纳入标准的文献,由课题组2名研究者独立对文献进行质量评价、证据提取和证据整合。结果 共纳入15篇文献,包括2篇指南、9篇系统评价、4篇随机对照试验,从运动评估、运动禁忌证、运动方式、运动时间、运动强度、运动获益、健康教育7个方面整合了20条最佳证据。结论 哮喘患儿进行运动前,应排除有无运动禁忌证,同时由多学科团队对患儿进行评估,并从运动方式、运动时间、运动强度、健康教育方面进行指导,使患儿在药物规范治疗的基础上,结合运动改善哮喘控制水平,提升其生活质量。     

A型流感病毒核衣壳蛋白ELISA捕获法的建立和临床应用

[摘要] 目的 制备和鉴定A型流感病毒核衣壳蛋白单克隆抗体,建立A型流感病毒核衣壳蛋白ELISA捕获法,用于A型流感病毒感染的实验室早期诊断。方 法 利用杆状病毒系统表达A型流感病毒核衣壳蛋白,免疫BALB/c小鼠制备单克隆抗体,采用ELISA间接法、免疫荧光和免疫印迹进行筛选和鉴定,用双抗体夹心ELISA捕获法建立检测A型流感病毒核衣壳蛋白的方法。 结果 获得8株、共识别4个A型流感病毒核衣壳蛋白不同抗原位点的单克隆抗体,选择以单抗2B8A11作为捕获抗体,以C16A15作为检测抗体为最佳抗体对,建立双抗体夹心ELISA捕获法。检测流感患者的当日采集和冻存的呼吸道标本,与病毒分离培养方法的符合率分别为100%和42.9%;与B型流感病毒和其他呼吸道病毒无交叉反应。检测流感患者当日采集的呼吸道标本敏感性高于德国Serion试剂盒（P＜0.001）,与RT-PCR方法比较差异无显著性（P=0.5）。结论 成功建立了灵敏度高、特异性强的A型流感病毒核衣壳蛋白抗原的ELISA捕获法,为A型流感病毒感染的实验室早期诊断提供技术方法。     

COVID-19流行期间儿童家长认知、态度及防控行为的调查与分析

目的：调查并分析18岁以下儿童家长对新型冠状病毒肺炎（coronavirus disease 2019,COVID-19）的认知、态度及家庭防控行为,以便医疗卫生人员更好地了解儿童家长需求,制定科学、针对性的健康教育策略。方法：采用滚雪球抽样方法,利用自行设计的调查问卷,通过网络收集全国各省市18岁以下儿童家长填写的问卷,共1 020份。结果：73.2%的儿童家长对COVID-19及其相关知识知晓率较高、47.1%的儿童家长对COVID-19预防控制持有积极乐观态度、87.5%的儿童家长COVID-19防控行为很好。而与儿童相关的新型冠状病毒感染预防知识知晓率为50%左右,36%的儿童出现过情绪不稳定、孤独、焦虑等不良情绪,67.5%的儿童家长出现情绪不稳定、焦虑等不良情绪;Pearson相关分析结果显示,认知、态度、防控行为得分三者间呈正相关,单因素分析结果显示仅儿童家长职业影响知信行（P＜0.05）。结论：医疗卫生人员可通过多种途径普及与儿童相关的COVID-19预防知识,重点关注儿童及家长的心理问题,并针对性地给予指导。     

2665例急性上呼吸道感染患儿的病原学及临床特征

目的 分析急性上呼吸道感染儿童患者的病原学及临床特征。方法 以南方医科大学珠江医院2009年11月至2015年9月收治的2 665例急性上呼吸道感染儿童为研究对象,采用qRT-PCR方法检测临床上常见的8种呼吸道病毒(流感病毒、呼吸道合胞病毒、副流感病毒、腺病毒、人类博卡病毒、人类冠状病毒、人类偏肺病毒、鼻病毒)。结果 共检测患儿标本2 665份,其中阳性标本1 566份,总阳性率为58.8%。四个季节中8种呼吸道病毒检出率存在明显差异,并以春季最高,夏冬季次之,秋季最低。儿童呼吸道病毒感染率随着年龄增加而逐渐降低,并以0~1岁婴幼儿病毒检出率最高64.5%。男童呼吸道病毒感染率高于女童,住院患儿呼吸道病毒检出率高于门诊患儿。混合感染标本260份,占阳性标本数的16.6%,主要集中于0~3岁儿童患者标本中,并因季节而异,秋冬季节较少,而春夏季节较为普遍。咳嗽为呼吸道病毒感染的主要临床症状,咳痰和流涕次之,临床症状在8种呼吸道病毒感染患儿中存在差异。结论 本调查分析了急性上呼吸道感染患儿中8种常见呼吸道病毒的病原学及临床特征,为指导临床治疗及防控提供相关数据。     

建立检测18种（型/亚型）呼吸道病毒的两种循环参数的实时荧光定量PCR

目的建立两种不同循环参数的实时荧光定量PCR,检测包括流感病毒、冠状病毒等18种(型/亚型)呼吸道病毒。方法引用文献报道的18种(型/亚型)呼吸道病毒引物和探针,建立两种不同循环参数的实时荧光定量PCR法,考核方法的敏感性、特异性和准确性,并用临床标本进行验证。结果成功建立了可检测18种(型/亚型)呼吸道病毒的两种不同循环参数的实时荧光定量PCR法;该法特异性较好,最低检测限为10拷贝数/μL,变异系数(CV)为1.26%~3.43%,重复性良好;408份临床标本中,用该法检测鼻拭子标本阳性率为63.2%(225/356),肺泡灌洗液标本阳性率为25.0%(13/52)。结论建立的实时荧光定量PCR法简便、特异、敏感、稳定,适用于临床常见呼吸道病毒感染的早期诊断。     

SARS-CoV 核衣壳蛋白表达方法的研究进展

2012年引起中东呼吸综合征的新型冠状病毒 hCoV-EMC,与2003年引起广东暴发性流行的严重急性呼吸综合征的 SARS-CoV 同属于β群冠状病毒,两种病毒存在许多相似之处。研究表明 SARS-CoV 核衣壳蛋白（SARS-CoV N 蛋白）可诱导产生强烈的体液和细胞免疫,是主要的抗原分子和临床诊断的最佳靶标。获得重组 SARS-CoV N 蛋白,是进一步研究 SARS-CoV、hCoV-EMC 以及其他可能出现的新型人冠状病毒 N 蛋白之间关系的前提。本文将目前研究SARS-CoV N 蛋白的重组表达体系、表达蛋白的特性及存在问题等进行了综述。     

禽流感病毒H5N1血凝素基因在昆虫细胞中的表达及鉴定

目的 应用杆状病毒-昆虫细胞表达体系克隆及表达禽流感病毒H5Nl血凝素H5抗原,鉴定其抗原性和生物活性.方法 PCR扩增禽流感病毒H5全长基因序列,克隆、转化制备重组杆状病毒Bacmid质粒,通过转染昆虫细胞制备重组杆状病毒进行蛋白表达.采用细胞免疫荧光、Western blotting和血凝试验分别对表达的蛋白进行抗原性和生物活性分析.结果 在昆虫细胞中成功表达禽流感病毒重组his-H5蛋白,其相对分子质量约为64 000,与豚鼠红细胞能够发生凝集反应,免疫荧光与Western blotting结果提示该重组蛋白能够与禽流感病毒H5标准血清中的抗体特异性结合.结论 经杆状病毒-昆虫细胞表达系统获得的重组his-H5抗原具备天然的生物活性和抗原性,该方法为进一步研究禽流感病毒血凝素抗原生物学特性以及制备亚单位疫苗、相关抗体奠定了基础.     

捕获ELISA法测定抗EV71-IgM抗体用于EV71感染早期诊断

目的探讨捕获ELISA法测定抗肠道病毒71型(EV71)IgM抗体在EV71感染所致手足口病(HFMD)早期诊断中的价值。方法以实时荧光RT-PCR检测89例临床初诊为HFMD患儿的粪便、疱疹液、咽拭子或肛拭子的肠道病毒RNA。用40例排除HFMD的5岁以下儿童血清为抗EV71-IgM抗体阴性对照,以捕获ELISA法检测患儿不同发病期血清中抗EV71-IgM抗体。结果经实时荧光RT-PCR检测,89例HFMD患儿粪便、疱疹液、咽拭子或肛拭子中EV71感染28例,柯萨奇病毒A16(CA16)感染43例,非EV71和CA16的肠道病毒感染14例,非肠道病毒感染4例。EV71感染者发病1～3 d、4～6 d及>6 d的血清抗EV71-IgM抗体阳性率分别为81.3%、100%和100%;CA16感染者分别为10.0%、26.4%和65.7%;非EV71和CA16的肠道病毒感染者及非肠道病毒感染者在发病1～3 d和4～6 d无1例阳性;阴性对照组无1例阳性。抗EV71-IgM抗体在EV71感染的早期(急性期)的诊断敏感性和特异性分别为81.3%和92.9%。结论 EV71感染者与CA16感染者血清抗EV71-IgM抗体在发病4 d后存在较明显的交叉反应。抗EV71-IgM抗体可用作EV71感染早期诊断的血清学标志物。     

登革病毒包膜蛋白的结构与功能研究进展

登革病毒(dengue virus,DENV)属于黄病毒科黄病毒属.分4个血清型(DENV1～DENV4),主要以白纹伊蚊和埃及伊蚊为传播媒介,可引起登革热、登革出血热(dengue hemorrhagic fever,DHF)和登革热休克综合征(dengue shock syndrome,DSS).     

免疫磁珠技术在病原微生物检测中的应用前景

免疫磁珠是磁性微球与免疫配体结合而成的一种免疫学技术.1979年挪威科学家John Ugelstad通过显微镜首次看到自己制备的尺度均一的聚苯乙烯微球时,可能不会料到这些微球经过磁化在此后30年间引发了一场生物分离技术革命[1].免疫磁珠不仅能分离和检测几乎所有骨髓及血细胞、肿瘤细胞,还可分离细菌等多种微生物,在免疫学检测、生物大分子纯化等方面应用甚广.