Livin异构体基因转染对肺腺癌A549细胞生长及放化疗敏感性的影响

目的研究转染Livin α、β两种异构体基因对肺腺癌A549细胞生长及放、化疗敏感性的影响。方法基因转染获得稳定表达Livinα和β的A549细胞克隆，逆转录一聚合酶链反应及免疫荧光化学法了解Livin α、β在转染细胞中基因水平和蛋白水平的表达情况；用平板克隆形成实验研究细胞生长情况；甲基偶氮唑蓝法研究细胞对放、化疗的敏感性；细胞周期分析法了解细胞凋亡情况。结果与转染前比较，基因转染后，阳性细胞尤其是表达Livin α的A549细胞克隆形成能力提高约20％、倍增时间缩短5～6h（P〈0．05），对多种化疗药物和放射线敏感性降低（P〈0．01），10Gy放射线照射下仅有0．2％细胞发生凋亡。结论Livin尤其是Livin α参与肺癌的发生发展，是肺癌细胞对放、化疗耐受的重要机制之一。     

脂多糖致肺血管内巨噬细胞分泌功能的改变

目的 探讨肺血管内巨噬细胞(PIM)在感染性急性肺损伤(ALI)发病中的作用.方法 采用改良Morton法分离、培养猪PIM;用贴壁法获得黏附的PIM,培养于RPMI 1640培养基,予10 mg/L脂多糖(LPS)刺激.用鼠胸腺细胞增殖法测定白细胞介素-1β(IL-1β)活性,酶联免疫吸附法(ELISA)测定IL-6、IL-8含量.结果 LPS刺激后,PIM释放IL-1β、IL-6和IL-8均增多,峰值分别出现在刺激后的2 h[IL-1β活性(10 400±2 389)次/min]、4 h[IL-6含量(0.80±0.36)μg/L]和6 h[IL-8含量(4.94±1.19)μg/L],与刺激前[IL-1β活性(213±85)次/min,IL-6含量(0.27±0.12)μg/L,IL-8含量(1.84±0.53)μg/L]比较差异均有统计学意义(均P＜0.01).结论 LPS刺激后,PIM分泌多种细胞因子,其中IL-1β升高最早,提示其在ALI发病早期起重要作用;而IL-6、IL-8升高较晚,且持续时间较长,可能对ALI的病情进展起重要作用.细胞因子间的相互作用在ALI的发病中似乎更为重要.

Abstract：

Objective To investigate the role of pulmonary intravascular macrophages(PIMs)in the pathogenesis of acute lung injury(ALI)due to infection. Methods Porcine pulmonary blood vessels were flushed by modified Morton method, and PIMs were isolated and cultured. The adhered PIMs were collected with adhesion method and incubated in RPMI 1640 medium. They were challenged with lipopolysaccharide (LPS, 10 mg/L). The activity of interleukin-1β(IL-1β), and contents of IL-6 and IL-8 in the culture supernatant were measured by method of thymocyte proliferation and enzyme linked immunoadsorbent assay (ELISA). Results The released contents of IL-1β, IL-6 and IL-8 from PIMs were increased significantly compared with those before LPS challenge, and they peaked at 2 hours[IL-1β activity:(10 400±2 389)scintillant count/min], 4 hours[IL-6 content:(0. 80± 0. 36)μg/L], and 6 hours[IL-8 content:(4. 94± 1.19)μg/L]after LPS challenge, and the differences were significant compared with those before LPS challenge[IL-1β activity:(213±85)scintillant count/min, IL-6 content:(0. 27 ± 0. 12)μg/L, IL-8 content:(1.84±0.53)μg/L, all P＜0. 01]. Conclusion Among the cytokines released from PIMs after LPS challenge, the increase in IL-1β occurred earlier in comparison with that of IL-6 and IL-8, suggesting that the former might play an important role at the early stage of ALI; on the other hand, though the increase in IL-6 and IL-8 contents occurred later than that of IL-1β but it lasted for a longer duration,suggesting that they might be associated with the advancement of ALI. The results also suggested that interaction of these cytokines played a more important role in the pathogenesis of ALI.     

120例肺癌骨转移早期诊断分析并文献复习

目的:对肺癌患者骨转移早期症状及诊断情况进行分析,以提高肺癌患者骨转移的早期确诊率。方法:收集2002至2005年我院120例伴有骨转移相关症状的肺癌患者临床资料,分析骨转移早期症状和临床诊断情况。结果:肺癌患者易发生骨转移,骨转移部位主要有肋骨(51.7%)、胸椎(37.5%)、腰骶椎(32.5%)、骨盆(27.5%)等,早期主要症状表现为相应部位的疼痛、麻木、肌肉酸胀、骨关节功能障碍以及贫血临床上常误诊为腰椎间盘突出、椎体骨质增生、骨髓炎、骨折、风湿病、肩周炎、坐骨神经痛、颈椎病或肋骨炎等。结论:肺癌患者易发生骨转移,转移部位最常见的是肋骨、胸椎、腰骶椎和骨盆,骨转移早期症状常无特异性,容易误诊,腰椎转移误诊率最高,临床医师对肺癌骨转移应予以足够的重视,以减少误诊,提高确诊率,并制定准确的治疗方案,改善患者生存质量和临床治疗效果。     

乙肝病毒衣壳作为肝癌基因转移载体对肝癌是否有靶向性

背景与目的：乙型肝炎病毒（HBV）具有嗜肝性的主要原因在于病毒衣壳（HBVE）上镶嵌的外衣壳蛋白PreS1,利用此生物特性有可能将HBVE改造成肝癌靶向性基因转移载体.本研究探讨乙型肝炎病毒衣壳作为基因转移载体对肝癌是否有靶向性.方法：采用PEG 8000病毒浓缩法、β-丙内脂法从Hep G 2.2.15细胞上清液中制备乙型肝炎病毒衣壳（HBVE）,用它包裹绿色荧光蛋白质粒（pIRS2-EGFP）后得到基因转移载体复合物HBVE-GFP,用HBVE-GFP分别转染Hep G2、A549、HeLa、FB细胞,通过荧光显微镜观察绿色荧光蛋白表达情况,通过流式细胞仪检测细胞发光率.结果：荧光显微镜下观察可见,各组均可见绿色荧光蛋白的表达,Hep G2组较之其他3组具有更高的荧光强度;流式细胞仪检测结果显示,Hep G2组的转染效率为（71.35±0.03）%,显著高于其他3组（P＜0.001）,且其荧光强度是其他3组的3～4倍（P＜0.001）.结论：乙型肝炎病毒衣壳作为载体对肝癌具有较好的靶向性.     

RNAi抑制Layilin表达对肺腺癌A549细胞体外侵袭和荷瘤鼠体内淋巴转移的影响

背景与目的：透明质酸参与了多种肿瘤细胞的侵袭行为，Layilin是一种新发现的特异性透明质酸受体。本研究在发现Layilin表达于人肺腺癌A549细胞株的前期工作基础上，观察用RNA干扰（RNA interference，RNAi）技术抑制Layilin表达后，对人肺腺癌A549细胞体外侵袭和体内淋巴道转移的影响。方法：构建能表达针对Layilin的小干扰RNA（small interfering RNA，siRNA）的RNAi质粒（Layilin siRNA plasmid）和表达不针对任何已知mRNA的siRNA的阴性对照RNAi质粒（control siRNA plasmid），分别转染A549细胞，新霉素抗性筛选得到Layilin表达受抑制的A549-siLayilin细胞和Layilin表达未受影响的A549-siControl细胞。针对非转染（A549-nontransfection）、A549-siLayilin、A549-siControl3组细胞，分别采用RT—Realtime PCR和Western blot技术检测Layilin表达，用Boyden小室实验检测细胞体外侵袭能力，用爪垫皮下种植淋巴结转移模型检测淋巴转移能力。结果：与A549-nontransfection组和A549-siControl组相比，A549-siLayilin组细胞Layilin表达减少，体外侵袭能力降低，体内淋巴转移率下降。结论：通过RNAi抑制Layilin表达后，能有效抑制透明质酸所诱导的A549细胞体外侵袭和裸鼠移植瘤淋巴转移。本研究为通过RNAi手段抑制Layilin表达，进而抑制肺腺癌淋巴转移提供了有益的思路．     

血管内皮前体细胞与肿瘤血管发生

实体肿瘤的生长和演进依赖于肿瘤血管生成。肿瘤血管生成包括血管新生(angiogenesis)和血管发生(vasculogenesis),内皮前体细胞(endothelial progenitor cells,EPC)参与的肿瘤血管发生在肿瘤血管生成中起主要作用。EPC来源主要包括骨髓来源的EPC、血管壁定留EPC和成体干细胞经血管内皮分化形成的EPC,不同来源EPC参与的血管发生过程在肿瘤血管生成中起重要作用。其中,肿瘤干细胞作为肿瘤血管内皮前体细胞新来源的认识为研究肿瘤血管发生提供了新的思路。     

放射诱导HSV-TK基因在肺癌细胞中靶向、高效性表达的研究

目的 构建放射诱导的同步放大基因电路,通过基因电路调控HSV-TK基因在肺癌细胞中靶向、高效性表达,以提高放射-基因治疗的有效性和靶向性.方法 利用分子克隆的方法将HSV-TK基因插入到同步放大基因电路载体的下游,并采用脂质体介导重组载体和对照载体转染肺癌细胞A549;G418筛选阳性克隆,转染细胞给予2Gy X线照射后,检测照射前后不同时相点细胞内TK表达情况,及不同浓度前药GCV对转染重组载体和对照载体的肺癌细胞的生长抑制率.结果 照射后转染同步放大重组载体的细胞内TK的表达明显强于对照组,且随时间的推移而逐渐增强,以照射后16h最为明显.同一浓度的GCV对转染同步放大载体的A549细胞的抑制率明显高于对照组和未转染组,IC50也明显低于对照组和未转染组.结论 同步放大基因电路明显增强了靶细胞内HSV-TK基因的表达,进一步完善了放射-基因治疗这一新的肿瘤治疗模式.     

113例前列腺癌AR与凋亡相关因子表达的研究

目的 探讨113例人前列腺癌AR与凋亡相关因子表达的相关性.方法 应用免疫组化标记AR及细胞凋亡相关因子bcl-2、Bax及Tunel标记等,结合光镜、电镜观察及图像分析等方法,研究不同AR表达与Pca凋亡的相互关系.结果 AR(-)组较AR( )组bcl-2阳性表达明显增强,Bax表达增强,bcl-2/Bax比值增高,前列腺癌AR(-)组细胞凋亡作用较AR( )组明显增强.结论 AR表达缺失促进了bcl-2和Bax的表达, Bax表达上调促进细胞凋亡的发生,而bcl-2有癌基因的作用,其表达上调则促进了的细胞增殖,导致前列腺癌凋亡及增殖作用均增强.     

小鼠淋巴管内皮细胞体外不同培养体系的比较

目的 探讨最适合小鼠淋巴管内皮细胞(mouse lymphatic endothelial cell,MLEC)生长的体系.方法 小鼠腹腔注射乳化的不完全弗式佐剂(15 d后再注射1次),诱导形成良性淋巴管瘤.消化法分离MLEC,分别置于明胶、鼠尾胶、基质胶或纤维蛋白凝胶包被的培养板中生长,流式细胞术对MLEC进行鉴定,倒置相差显微镜观察细胞生长状态和形成管样结构的差异,并计算细胞群体倍增时间.结果 从淋巴管瘤中分离得到MLEC.MLEC在明胶、鼠尾胶支持物上生长良好,其群体倍增时间均短于在基质胶和纤维蛋白凝胶上生长的MLEC.MLEC在4种支持物上均可以形成管样结构,在基质胶和纤维蛋白凝胶上形成的管分支数明显高于其他组(P＜0.01).结论 明胶和鼠尾胶是MLEC生长的较好支持物,而基质胶和纤维蛋白凝胶是体外淋巴管形成的较好模型.     

基于基因芯片的乳腺癌干细胞miRNAs检测分析

目的 利用流式细胞仪(FACS)细胞分选技术从乳腺癌细胞株MCF-7中分选乳腺癌干细胞,并利用基因芯片进行其miRNAs表达谱分析.方法 利用已知的乳腺癌干细胞的表面分子标志(CD44 ESA CD24-/low),以相应的荧光标记抗体对细胞加以标记,FACS细胞分选获得乳腺癌干细胞,NOD-SCID移植瘤实验进行干细胞功能鉴定;分别提取细胞总RNA以及小分子RNA,经荧光标记后与miRNAs基因芯片杂交,获得乳腺癌干细胞miRNAs表达谱.结果 从MCF-7中分选到约1%的CD44 ESA CD24-/low细胞,NOD-SCID移植瘤实验表明其具有干细胞特性,基因芯片杂交获得20个乳腺癌干细胞相关miRNAs,其中4个为低表达,16个为高表达.结论 乳腺癌干细胞具有自身特征性miRNAs,为进一步从干细胞层面研究乳腺癌发病机制及靶向治疗打下基础.