内毒素致伤大鼠肺组织促炎与抗炎细胞因子mRNA表达的时相性研究

目的 研究不同剂量内毒素致伤大鼠肺组织促炎和抗炎细胞因子mRNA表达的时相性,并探讨这些细胞因子在全身炎症反应失控和急性肺损伤中的可能作用。方法 采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测不同剂量脂多糖(LPS)致伤大鼠肺组织肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-1β、IL-6、IL-4、IL-10和IL-13的mRNA表达。结果 随着LPS剂量增加,TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-4、IL-10和IL-13的mRNA表达均增强(与生理盐水对照组比较,P均<0.01);LPS≥6 mg/kg组上述细胞因子表达显著高于此剂量以下组(P均<0.01)。表达峰值时间:TNF-α为1 h,IL-6为4 h,其他均在2 h。结论 内毒素致急性肺损伤中,TNF-α是早期表达的促炎细胞因子,而IL-6在炎症进一步发展中发挥作用;抗炎细胞因子IL-4、IL-10、IL-13高表达亦可能促进炎症的放大而不是起保护作用。     

mmu-miR-294调控MMP3靶基因对LLC细胞侵袭迁移的影响

目的 预测并验证小鼠mmu-miR-294调控的靶基因,探讨其在肺癌发生发展中的生物学功能.方法 生物信息学预测mmu-miR-294可能调控的靶基因金属蛋白酶(MMP3),双荧光素酶检测验证mmu-miR-294调控MMP3的真实性；脂质体2000介导转染mmu-miR-294模拟物进入Lewis(LLC)细胞株,通过Transwell实验检测细胞侵袭、迁移能力的改变.结果 重组质粒经XbaⅠ单酶切能获得约5000 bp和100 bp的酶切片段,阳性克隆测序,双荧光素酶报告基因检测证明合成寡核苷酸链序列插入正确；脂质体2000介导转染mmu-miR-294模拟物,过表达实验组MMP3蛋白水平较对照组明显降低.转染mmu-miR-294模拟物后LLC细胞的侵袭迁移能力显著降低(P＜0.01).结论 低表达mmu-miR-294有助于维持LLC的侵袭转移特性,增加其表达水平可以有效抑制LLC的侵袭迁移能力.mmu-miR-294可能通过调控其靶基因MMP3表达而发挥功能.     

IDO基因转染小鼠树突状细胞体外诱导Treg细胞增殖的研究

目的调节性T细胞(Treg)在肿瘤局部免疫耐受中发挥了重要作用,但其产生机制尚不清楚。本实验通过将吲哚胺-2,3-双加氧酶(IDO)基因转染小鼠树突状细胞(DC),体外研究对Treg细胞的诱导增殖作用,为肺癌免疫耐受产生机制研究提供新的依据。方法采用慢病毒转染技术,将含人全长IDO基因转染到小鼠DC细胞,G418筛选获得IDO-DC细胞,同时设置空白对照组(DC细胞)及空质粒转染组(EGFP-DC细胞),将3种细胞分别与小鼠T淋巴细胞混合培养,利用流式细胞技术分析3种细胞对Treg细胞的诱导增殖作用。结果 IDO基因成功转染到小鼠DC细胞,与小鼠T淋巴细胞共培养后,Treg细胞增殖明显,和EGFP-DC细胞(7.5%vs 3.6%,P<0.05)及DC细胞(7.5%vs 3.1%,P<0.05)相比差异显著。结论 IDO基因转染小鼠DC细胞在体外能明显增强Treg细胞的增殖,为肺癌局部免疫耐受机制研究提供了新的实验依据。     

缺氧及辐射双敏感性启动子增强抑瘤素M表达治疗肺癌的实验研究

目的　构建缺氧及辐射双敏感性启动子 ,增强缺氧条件下放射诱导的抑瘤素M (OSM)表达水平 ,提高肺癌放射 基因治疗效果。方法　利用基因重组构建缺氧及辐射双敏感性缺氧反应元件早期生长反应基因 (HRE Egr)启动子及其调控的OSM表达载体 ;以脂质体转染肺癌A5 4 9细胞 ,给予照射 ( 6Gy)和 (或 )缺氧 ( 1%氧浓度 )处理 ,观察其OSM表达水平及细胞存活率的变化。利用肺癌移植瘤观察不同处理后的抑瘤效应。结果　HRE Egr启动子具有辐射及缺氧双重敏感性 ,它可使照射后的肺癌细胞OSM表达水平在缺氧条件下显著提高 ,为常氧条件下的 3倍。在缺氧条件下 ,重组质粒 pHEO转染合并照射处理后细胞存活率 [( 9 5± 2 8) % ]显著低于常氧组 [( 34 8± 3 6 ) % ;χ2 =11 375 ,P =0 0 0 3]。HRE Egr启动子转染合并照射可明显抑制肺癌移植瘤 ,并可使 6 0 %的移植瘤完全消退。结论　用HRE Egr启动子提高OSM表达水平 ,可增强肺癌移植瘤放射 基因治疗疗效     

噬菌体展示EpCAM单链抗体及免疫原性初步研究

目的利用噬菌体展示技术进行鼠抗人EpCAM单链抗体表达并鉴定其免疫活性,构建特异靶向上皮来源肿瘤细胞及癌干细胞的单链抗体。方法采用全基因合成的方法合成VL+Linker+VH的EpCAM的单链抗体(ScFv)基因,克隆到pMD19-T简易载体中,将ScFv基因酶切并纯化后克隆到噬菌体载体pCANTAB-5E,热休克法转化至感受态的大肠杆菌TG1,随机挑取5个克隆,经辅助噬菌体超感染,形成鼠抗人EpCAM噬菌体单链抗体,用ELISA(以P/N>2判定为阳性)和免疫细胞化学法测定其抗原结合活性。结果成功获得pCANTAB-5E/EpCAM ScFv重组克隆,经ELISA和免疫细胞化学测定,噬菌体展示阳性率为20%,展示的单链抗体能与EpCAM抗原和A549细胞特异性结合。结论噬菌体展示技术制备EpCAM单链抗体方法简便、省时、高效。     

Livin异构体基因转染对肺腺癌A549细胞生长及放化疗敏感性的影响

目的研究转染Livin α、β两种异构体基因对肺腺癌A549细胞生长及放、化疗敏感性的影响。方法基因转染获得稳定表达Livinα和β的A549细胞克隆，逆转录一聚合酶链反应及免疫荧光化学法了解Livin α、β在转染细胞中基因水平和蛋白水平的表达情况；用平板克隆形成实验研究细胞生长情况；甲基偶氮唑蓝法研究细胞对放、化疗的敏感性；细胞周期分析法了解细胞凋亡情况。结果与转染前比较，基因转染后，阳性细胞尤其是表达Livin α的A549细胞克隆形成能力提高约20％、倍增时间缩短5～6h（P〈0．05），对多种化疗药物和放射线敏感性降低（P〈0．01），10Gy放射线照射下仅有0．2％细胞发生凋亡。结论Livin尤其是Livin α参与肺癌的发生发展，是肺癌细胞对放、化疗耐受的重要机制之一。     

肿瘤学临床见习的教学体会

恶性肿瘤是导致人类死亡的主要疾病之一,肿瘤防治已是医务工作者面临的紧迫而艰巨的任务。在医学本科教学中,影像学、内科、外科等多个专科均涉及肿瘤学教学内容,但内容分散,学生无法领会肿瘤防治的整体性。为此,在本科教学中我们开设了肿瘤学专业课程,使医学生能完整、系统地掌握肿瘤     

30例四氧化二氮群体吸入中毒急救分析

临床资料 本组30例青年男性患者,年龄19-58岁,平均32.4岁,均因吸入泄漏的四氧化二氮（N2O4）气体30-50 min后急诊入院。临床表现：所有患者均有胸闷、心悸、气急,头晕、恶心,流涕、咽痛,刺激性咳嗽、呼吸困难;咳棕黄色痰14例;烦躁不安、意识障碍1例。查体：血压80-160/50-90 mmHg;体温〉37.2℃者21例,其中体温〉38℃者10例;呼吸浅快、     

脂多糖致肺血管内巨噬细胞分泌功能的改变

目的 探讨肺血管内巨噬细胞(PIM)在感染性急性肺损伤(ALI)发病中的作用.方法 采用改良Morton法分离、培养猪PIM;用贴壁法获得黏附的PIM,培养于RPMI 1640培养基,予10 mg/L脂多糖(LPS)刺激.用鼠胸腺细胞增殖法测定白细胞介素-1β(IL-1β)活性,酶联免疫吸附法(ELISA)测定IL-6、IL-8含量.结果 LPS刺激后,PIM释放IL-1β、IL-6和IL-8均增多,峰值分别出现在刺激后的2 h[IL-1β活性(10 400±2 389)次/min]、4 h[IL-6含量(0.80±0.36)μg/L]和6 h[IL-8含量(4.94±1.19)μg/L],与刺激前[IL-1β活性(213±85)次/min,IL-6含量(0.27±0.12)μg/L,IL-8含量(1.84±0.53)μg/L]比较差异均有统计学意义(均P＜0.01).结论 LPS刺激后,PIM分泌多种细胞因子,其中IL-1β升高最早,提示其在ALI发病早期起重要作用;而IL-6、IL-8升高较晚,且持续时间较长,可能对ALI的病情进展起重要作用.细胞因子间的相互作用在ALI的发病中似乎更为重要.

Abstract：

Objective To investigate the role of pulmonary intravascular macrophages(PIMs)in the pathogenesis of acute lung injury(ALI)due to infection. Methods Porcine pulmonary blood vessels were flushed by modified Morton method, and PIMs were isolated and cultured. The adhered PIMs were collected with adhesion method and incubated in RPMI 1640 medium. They were challenged with lipopolysaccharide (LPS, 10 mg/L). The activity of interleukin-1β(IL-1β), and contents of IL-6 and IL-8 in the culture supernatant were measured by method of thymocyte proliferation and enzyme linked immunoadsorbent assay (ELISA). Results The released contents of IL-1β, IL-6 and IL-8 from PIMs were increased significantly compared with those before LPS challenge, and they peaked at 2 hours[IL-1β activity:(10 400±2 389)scintillant count/min], 4 hours[IL-6 content:(0. 80± 0. 36)μg/L], and 6 hours[IL-8 content:(4. 94± 1.19)μg/L]after LPS challenge, and the differences were significant compared with those before LPS challenge[IL-1β activity:(213±85)scintillant count/min, IL-6 content:(0. 27 ± 0. 12)μg/L, IL-8 content:(1.84±0.53)μg/L, all P＜0. 01]. Conclusion Among the cytokines released from PIMs after LPS challenge, the increase in IL-1β occurred earlier in comparison with that of IL-6 and IL-8, suggesting that the former might play an important role at the early stage of ALI; on the other hand, though the increase in IL-6 and IL-8 contents occurred later than that of IL-1β but it lasted for a longer duration,suggesting that they might be associated with the advancement of ALI. The results also suggested that interaction of these cytokines played a more important role in the pathogenesis of ALI.