人胶质瘤干细胞内在自我更新能力

目的 了解胶质瘤干细胞内在的自我更新和增殖能力。方法 观察原代胶质瘤细胞在单纯改良Eagle/F12培养液（DMEM/F12）中胶质瘤干细胞球的形成,并检测其CD133、胶质纤维酸性蛋白（GFAP）、微管相关蛋白（MAP2）、髓磷脂碱性蛋白（MBP）的表达。通过二代球体形成、细胞增殖测定、分化实验分析其自我更新、增殖、多能分化能力。通过裸鼠移植瘤实验观察所分离细胞球细胞与原代培养胶质瘤细胞成瘤能力的差异。结果 在单纯DMEM/F12培养液中形成的胶质瘤细胞球细胞表达神经干细胞标记CD133,不表达分化标志GFAP、MAP2,少数细胞表达MBP。分离出的胶质瘤细胞球细胞可在单纯DMEM/F12培养基中增殖,并能形成CD133阳性的二代细胞球,可分化为GFAP、MAP2、MBP阳性表达的肿瘤细胞。裸鼠成瘤实验显示其成瘤能力显著高于原代胶质瘤细胞。结论 胶质瘤干细胞能在无血清、无外源性细胞因子培养基中形成肿瘤干细胞球,胶质瘤干细胞的自我更新和增殖不依赖于外源性生长因子,它可能拥有自我更新的自身活化机制。     

非小细胞肺癌VEGF-C表达与淋巴管生成和淋巴转移关系的研究

背景与目的近年来的研究表明,血管内皮生长因子C(VEGFC)通过与其配体(VEGFR3)的结合介导肿瘤淋巴管生成,是形成肿瘤淋巴道转移的最重要因素。淋巴道转移是非小细胞肺癌(NSCLC)常见的主要扩散途径。基于此,本研究用新的淋巴管内皮标志物podoplanin检测NSCLC组织中淋巴管,用淋巴管密度(LVD)表示淋巴管生成情况,探讨NSCLC内VEGFC表达与淋巴管生成和淋巴转移的关系。方法收集66例NSCLC和8例炎性假瘤组织标本,应用免疫组化检测VEGFC、podoplanin的表达,计算VEGFC阳性表达率及淋巴管密度值,分析两者的关系。结果NSCLC组织内VEGFC阳性表达率(75.8%)显著高于肺炎性假瘤(12.5%)(P<0.01),高中分化(76.3%)和低分化(75.0%)之间无显著性差异(P>0.05),淋巴结阳性组中VEGFC阳性率(86.5%)显著高于淋巴结阴性组(62.1%)(P<0.05)。NSCLC组织内LVD(20.4±5.9)显著高于肺炎性假瘤(10.9±4.9)(P<0.01);VEGFC阳性组LVD(21.3±6.0)显著高于VEGFC阴性组(17.7±5.1)(P<0.05),淋巴结阳性组LVD(21.9±5.9)显著高于淋巴结阴性组(18.5±5.5)(P<0.05)。结论淋巴管生成可能是NSCLC淋巴结转移的重要因素,VEGFC参与NSCLC淋巴管生成,从而促进淋巴结转移。     

CEA-HBD2重组基因在人结肠癌细胞中表达初步研究

目的构建高表达人源化HBD2人结肠癌表达体系.方法构建人pLNCX2-CEA信号肽-HBD2抗菌肽(成熟肽序列)逆转录表达载体,DOTAP转染逆转录包装细胞,产生的含融合基因的侵袭性逆转录病毒,转染人结肠癌HCT116细胞,用免疫印迹法法鉴定转化细胞中HBD2蛋白的表达.结果正确构建了表达HBD2成熟肽的重组信号肽HBD2的人结肠癌表达体系,并出现正确的目的基因表达.结论此HBD2表达体系表达的特异性多肽经纯化后,可进行下一步检测等实验.     

透明质酸黏素和肿瘤

透明质酸(hyaluronic acid,HA)是以β-D-N-乙酰氨基葡萄糖和β-D-葡萄糖磺酸为结构单元的、通过β-1,4-糖苷键重复排列构成的一类链状高分子酸性粘多糖.HA是细胞外基质的重要成分,对于维持组织结构、细胞黏附、活化、迁移、以及细胞信号的转导有重要作用[1].透明质酸黏素(hyaladherin),也即透明质酸连接蛋白(hyaluronan-binding proteins),指一类可结合HA糖链的、具有相似氨基酸序列和空间构象的分子.它们在体内有广泛的功能,涉及介导细胞-细胞及细胞-基质黏附、HA的摄取与降解、细胞内信号转导等方面.近年来发现,透明质酸黏素和某些肿瘤有一定联系,可能参与了这些肿瘤的侵袭和转移过程.本文拟就此作一综述.     

地塞米松和阿斯匹林对猪肺血管内巨噬细胞环氧合酶Ⅱ型的作用

目的：探讨地塞米松(DEX)和阿斯匹林(ASA)对脂多糖(LPS)致猪肺血管内巨噬细胞(PIM) 环氧合酶-Ⅱ(COX-Ⅱ)表达及活性的影响。方法：改良法分离、培养猪PIM。分为：①对照组;②LPS组：予 LPS(10μg/m1)刺激;③DEX组和④ASA组：分别以2 pmol/L DEX和500 μmol/L ASA预处理2 h,再以 LPS刺激。以反转录聚合酶链反应和免疫组化染色法检测COX-ⅡMrna及酶蛋白的改变;放射免疫分析 法测定细胞上清PGE2浓度,间接表示COX活性。结果：LPS组PIM COX-ⅡMrna和酶蛋白表达及PGE2 浓度较对照组升高,DEX组则降低(P＜0.01);ASA组COX-ⅡMrna和酶蛋白表达与LPS组相似,但 PGE2浓度却降低(P＜0.01)。结论：DEX能抑制LPS诱导的P1M COX-ⅡMrna及酶蛋白的表达;ASA 可通过抑制COX的活性而减少前列腺素的产生;二者对急性呼吸窘迫综合征等急性炎症性疾病的治疗可 能有一定作用。     

小型猪与恶性肿瘤模型

在肿瘤动物模型方面，小型猪的应用相对较少，国内尚未见报道。肿瘤动物模型的设计要求实验动物与人体肿瘤有尽可能多的相似性，并且重复性好、可靠性高，具有明确的适用性和可控性，及易行性和经济性，而小型猪正是最适合的品种之一近几十年来，小型猪的医学实验性肿瘤模型主要集中在皮肤黑色素瘤方面，现本文以该模型为重点加以阐述。     

肿瘤抗原TRAG-3 HLA-A2.1限制性CTL表位的鉴定

目的寻找并鉴定TRAG-3来源的HLA-A2．1限制性CTL表位，为临床开展基于TRAG-3表位的特异性免疫治疗奠定基础。方法应用超基序和量化基序方案，预测TRAG-3 HLA-A2．1限制性CTL表位。用计算机分子模拟的方法，对预测表位进行分子模拟。用流式细胞仪分析测定各肽与HLA-A2．1分子的结合力。最后，应用HLA-A2．1阳性健康志愿者外周血单个核细胞(PBMC)对其体外诱导的CTL效应进行鉴定。结果应用超基序和量化基序方案，预测出4个候选表位肽，用计算机分子模拟发现其中只有TRAG-3（37-45)不符合HLA-A2．1限制性CTL表位的特点。在上述4个九肽中，TRAG-3(58-66)与HLA-A2．1分子的结合力最高。在进一步的CTL诱导实验中，发现TRAG-3(58-66)能够诱导健康志愿者PBMC产生特异性CTL。结论表位预测、计算机分子模拟、结合力分析和体外CTL诱导实验的一致性较好。4种方法一致认为，TRAG-3（58-66）(ILLRDA-GLV)为HLA-A2．1限制性CTL表位。该表位肽可望用于基于TRAG-3抗原多肽疫苗的临床实验。     

TRAG-3 HLA-A2.1限制性CTL表位的预测及结合力分析

目的：寻找并鉴定TRAG-3来源的HLA-A2.1限制性CTL表位，为临床开展基于TRAG-3表位的特异性免疫治疗奠定基础。方法：应用超基序和量化基序方案预测TRAG-3HLA-A2.1限制性CTL表位；采用标准Fmoc方案合成侯选表位，RP-HPLC纯化、分析多肽，质谱鉴定各肽；最后，用T2细胞株测定各肽与HLA-A2.1分子的结合力。结果：超基序和量化基序方案预测出了4个侯选表位肽；标准Fmoc方案合成的各肽经纯化后纯度大于90％，各肽的相对分子质量与理论值一致；在4个侯选表位肽中，ILLRDAGLV(58-66)九肽与HLA-2.1的结合力最强。结论：表位预测的结果与结合力分析实验结果一致性较好，两者联合应用初步认为ILLRDAGLV(58-66)九肽为TRAG-3HLA-A2.1限制性CTL表位的可能性最大。     

NEDD4促进非小细胞肺癌继发厄洛替尼耐药

目的 探讨NEDD4(neural precursor cell expressed developmentally downregulated protein 4)在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)继发厄洛替尼耐药中的作用.方法 以HCC827细胞及耐厄洛替尼的HCC827 (HCC827/ER)细胞为工具,CCK-8法检测HCC827/ER细胞的耐药指数;实时荧光定量PCR(quantitative real-time,qPCR)及Western blot检测厄洛替尼处理48 h后,NEDD4mRNA和蛋白在两种细胞中的表达及PI3 K/AKT信号通路活化情况.NEDD4小干扰RNA(siNEDD4)转染HCC827/ER细胞,比较处理前后HCC827/ER细胞的厄洛替尼IC50变化以及PI3K/AKT信号通路活化情况.裸鼠成瘤实验在活体水平上进一步验证NEDD4在NSCLC继发厄洛替尼耐药中的作用.结果 HCC827/ER细胞的耐药指数为(118.23 ±23.77);HCC827/ER细胞NEDD4mRNA和蛋白以及PI3K/AKT信号通路活化水平均高于HCC827细胞;HCC827/ER细胞成功转染siNEDD4后,转染组的PI3K/AKT信号通路活化水平降低,且厄洛替尼IC50值明显低于对照组(P＜0.05).裸鼠成瘤实验中转染组肿瘤对厄洛替尼的敏感性明显增加,与阴性对照组比较,药物处理组肿瘤生长受到明显的抑制.结论 NEDD4通过激活PI3 K/AKT信号通路促进NSCLC继发厄洛替尼耐药.