腺伴随病毒介导的NT4-ADNF-9对Corti器损伤保护的体外研究

目的 将携载神经营养素(NT4)与活性依赖性神经营养因子-9(activity-dependent neurotrophic factor-9,ADNF-9)融合基因的重组腺伴随病毒rAAV-NT4-ADNF-9转染体外培养的耳蜗Corti器,并观察该重组病毒对Corti器损伤的保护作用.方法 体外分离培养新生SD大鼠的耳蜗基底膜,应用氨基糖苷类毒性蛋白G-418建立体外Corti器损伤模型,将rAAV-NT4-ADNF-9转染体外培养的新生SD大鼠耳蜗细胞(Corti器),RT-PCR检测NT4-ADNF-9在Corti器的表达,并观察其对体外毛细胞的保护作用.结果 成功分离培养了新生SD大鼠的耳蜗基底膜后,经重组腺伴随病毒转染,琼脂糖凝胶电泳检测结果显示NT4-ADNF-9在Corti器得到了表达;rAAV-NT4-ADNF-9保护组毛细胞损伤程度较G-418损伤组明显为轻,而G-418损伤组可见毛细胞大量缺失,差异具有统计学意义(P<0.05).结论 构建的重组病毒rAAV-NT4-ADNF-9在体外可成功转染Corti器,并对Corti器具有保护作用,可用于基因治疗的研究.     

破伤风完全胃肠外营养支持治疗护理体会

1997年9月～2003年10月,我们对39例破伤风患者在伤口处理、控制痉挛、抗毒血清、抗菌素、水电平衡等综合治疗的基础上,应用完全胃肠外营养(TPN)支持治疗,效果满意.现报告如下.     

双源CTA在主动脉夹层术后复查中的应用价值

目的:探讨双源CTA在主动脉夹层术后复查中影像表现的价值.方法:选取我院2020年1月至2020年12月行主动脉夹层手术治疗的病例共计87例,年龄19-88岁,平均年龄52.35岁,其中男性76例,女性11例;A型主动脉夹层60例,B型主动脉夹层27例.检查使用Siemens公司双源CT机(Definiton FLAS...     

膀胱憩室为疝内容物的腹股沟斜疝一例

小儿腹股沟斜疝发病率为0．8％～4．4％,男女比例为15：1,左侧占25％。女童的腹股沟斜疝内容物可有膀胱、子宫、附件,并能形成疝囊壁的一部分,但膀胱憩室为疝内容物的罕见。我们收治一例此患者现报告如下。     

麻杏石甘汤加味治疗小儿支气管肺炎40例

目的:观察麻杏石甘汤加味治疗小儿支气管肺炎的临床疗效。方法:将肺炎患儿80例随机分为治疗组和对照组,在抗感染、祛痰等常规治疗完全相同的基础上,治疗组加用麻杏石甘汤加味治疗。结果:治疗组发热消退和治愈率均优于对照组(P<0.01)。结论:麻杏石甘汤加味治疗小儿支气管肺炎疗效显著,无不良反应。     

SAC重组腺相关病毒载体的构建及其对前列腺癌CAM移植瘤的抑制作用

目的 构建携带NT4-SAC-HA2-TAT融合基因的重组腺相关病毒载体,并感染前列腺癌鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)移植瘤,观察目的基因前列腺凋亡反应基因 4(par-4)选择性癌细胞凋亡结构域(SAC)的表达及其对CAM移植瘤的生长抑制作用。方法 利用磷酸钙共沉淀法将包装质粒pAAV/Ad、腺病毒辅助质粒pFG140及重组穿梭质粒pSSCMV/NT4-SAC-HA2-TAT共转染293细胞,制备重组腺相关病毒(rAAV), 斑点杂交法检测病毒滴度。取孵育9d龄健康鸡胚,CAM接种前列腺癌细胞系PC 3细胞,建立前列腺癌的CAM移植瘤模型,接种3d后挑选成瘤鸡胚随机分为3组：空白对照组(PBS),空病毒组(AAV)和重组病毒组(rAAV),观察瘤体生长情况,上述处理4d后测量比较不同组移植瘤体积,并切片染色病理检查。免疫荧光法检测移植瘤中SAC融合肽的表达。结果 酶切鉴定结果证实成功构建pSSCMV/NT4-SAC-HA2-TAT, 斑点杂交法检测重组病毒滴度约为3.34×1010～3.34×1011cfu/mL。免疫荧光法证实SAC融合肽表达。移植瘤能在CAM上生长,可见瘤周围丰富毛细血管汇集,rAAV组瘤体显著缩小,病理HE染色可见瘤细胞局限及侵袭抑制。结论 成功构建SAC重组腺相关病毒载体并感染前列腺癌CAM移植瘤,重组病毒表达分泌的SAC融合肽对前列腺癌CAM移植瘤具有诱导细胞凋亡、抑制肿瘤细胞侵袭性增殖等作用。     

4125例新生儿听力筛查假阳性的分析

目的:探讨和分析新生儿听力筛查中假阳性的发生率和原因。方法:应用瞬态诱发耳声发射(TEOAE)和自动判别听性脑干听觉诱发电位(AABR)对2003年3月～2005年12月在该院产科出生的4125例活产新生儿进行新生儿普遍听力筛查(UNHS)。初筛时间为出生后2～3天,用TEOAE进行;复筛应用TEOAE和AABR于出生后42天进行。复筛"未通过"者于3月龄时做诊断性检查评估听力水平,并跟踪随访1年以上。结果:初筛4125例,通过3886例,通过率94.2%,复筛239例,通过209例,复筛仍未通过20例,其中确诊听力损失16例。在4125例新生儿中听力损失的发病率为0.39%,初筛假阳性率为5.4%,整个筛查程序假阳性率为0.1%。结论:虽然听力筛查的假阳性率不高,但绝对数量不可忽视,应重视假阳性出现的原因,并以合理的处置减少其发生率。     

重组腺相关病毒rAAV-NT4-ADNF-9的构建及其对体外培养的大鼠耳蜗组织的转染

目的:包装携载神经营养素(NT4)与活性依赖性神经营养因子-9(ADNF-9)融合基因的重组腺相关病毒rAAV-NT4-ADNF-9,并观察该重组病毒对体外培养的耳蜗组织的转染。方法:使用pSSHG-CMV-NT4-ADNF-9,pGF140和pAAV/Ad 3种质粒共转染293包装细胞,制备ADNF-9重组腺相关病毒(recomb inate adeno-assoc iated virus,rAAV),应用斑点杂交实验检测重组病毒滴度;体外分离培养新生SD大鼠的耳蜗毛细胞;将重组病毒感染体外培养的新生SD大鼠耳蜗毛细胞,于24 h后提取组织行反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)以检测rAAV-NT4-ADNF-9对耳蜗的转染。结果:应用斑点杂交实验检测重组病毒滴度为2×1013cfu/m l,表明成功地构建了重组AAV载体。成功分离培养新生SD大鼠的耳蜗毛细胞后,经RT-PCR反应,琼脂糖凝胶电泳检测结果显示NT4-ADNF-9在耳蜗组织得到了表达。结论:构建的重组病毒rAAV-NT4-ADNF-9,在体外可成功转染耳蜗组织,用于基因治疗的研究。     

腺病毒介导的NT4p53(N15)Ant异源融合基因对肝癌细胞的杀伤作用

目的 构建包括神经营养因子4(NT4)信号肽,p53氨基端短活性肽(12～26位氨基酸)及蛋白质转导结构域-黑腹果蝇触足肽(Ant)序列在内的异源融合基因,并以腺病毒作为基因转移载体观察NT4p53(N15)Ant基因在体外对肝癌细胞系HepG2的杀伤效应.方法 应用互为模板的引物PCR技术及T载体克隆法获得p53(N15)Ant基因克隆,经酶切后连入pBV220/NT4质粒,再将融合基因NT4p53(N15)Ant亚克隆至腺病毒的穿梭质粒内,与辅助质粒pJM17共转染HEK293细胞,通过同源重组获得重组腺病毒,经PCR鉴定后,NT4p53(N15)Ant重组腺病毒感染HepG2细胞,用MTT比色法和PI染色流式细胞计数仪分析Ad.NT4p53(N15)Ant对肿瘤细胞和正常细胞的杀伤效应及凋亡率.结果 克隆出NT4p53(N15)Ant基因,得到高滴度的重组腺病毒,提取病毒DNA经PCR证实含目的基因.MTT测定结果显示,与平行对照病毒Ad.GFP相比,Ad.NT4p53(N15)Ant对HepG2细胞有强烈的杀伤效应,且以病毒感染后48 h作用最为明显,对肿瘤细胞抑制率达到63.3%,而对正常细胞NIH3T3的影响很小.Ad.NT4p53(N15)Ant感染HepG2细胞30 h后的流式细胞仪分析结果显示:Ad.NT4p53(N15)Ant可使HepG2细胞发生凋亡,凋亡率为18.16%.结论 通过分子克隆体外重组技术我们首次成功制备了NT4p53(N15)Ant复制缺陷型重组腺病毒;初步的研究发现Ad.NT4p53(N15)Ant对HepG2细胞有强烈的杀伤效应,这种效应部分是通过诱导HepG2细胞的凋亡而实现的.     

Ⅱ期乳腺癌两种改良根治手术疗效分析

目的：观察Ⅱ期乳腺癌两种改良根治手术远期疗效。方法：回顾分析Ⅱ期乳腺癌改良根治术Ⅰ式（MRMⅠ式）54例和改良根治术Ⅱ式（M RMⅡ式）50例。结果：MRMⅠ式和MRMⅡ式的5 a总生存率分别为66.7%和70.0%;MRMⅠ式和MRMⅡ式淋巴结阴性病例的5 a生存率高于淋巴结阳性病例,差别具有统计学意义。结论：改良根治术是Ⅱ期乳腺癌首选理想术式,淋巴结阴性病例的5 a生存率高于淋巴结阳性病例。