肿瘤血管抑制肽alphastatin基因克隆及序列分析

目的克隆获得编码具有生物学活性的肿瘤血管抑制肽alphastatin基因。方法采用非对称引物／模板法，依据基因库提供的alphastatin基因序列，设计合成alphastatin基因的引物／模板链，利用聚合酶链反应（PCR）法，从DNA中扩增出人肿瘤血管抑制肽alphastatin基因片段；将获得的基因片段插入质粒载体pGEM．TEasy中，转化到大肠杆菌DH5ct后挑选阳性克隆，利用限制性内切酶酶切鉴定重组质粒。结果经质粒DNA酶切分析及序列测定，获得了人肿瘤血管抑制肽alphastatin基因片段序列。结论首次体外克隆获得了人肿瘤血管抑制肽alphastatin基因，为肿瘤血管抑制肽alphastatin的基因治疗奠定了基础。     

股骨、胫腓骨多段骨折治疗体会

自1993年以来我们采用梅花钉、矩形钉和单侧多功能外固定支架(以下简称外支架)治疗股骨、胫腓骨多段骨折15例,现结合治疗经验报告如下。 1临床资料 1.1一般资料:本组15例,男11例,女4例。年龄21～57岁,平均年龄29岁。致伤原因:车     

中药贴敷合参苓白术散口服治疗小儿脾虚泄泻45例

近年来,笔者采用隔姜艾灸、中药贴敷结合参苓白术散口服治疗小儿脾虚泄泻45例,取得满意疗效,现总结如下.1临床资料本组45例均为门诊患者,其中男22例,女23例;年龄最小者6个月,最大者5岁;病程最短者7天,最长者3个月.诊断标准参照国家中医药管理局颁布的《中医病证诊断疗效标准》拟定.久泻不止,或反复发作,大便稀薄,或呈水样,带有奶瓣或不消化食物残渣,神疲纳呆,面色少华,舌质偏淡,苔薄腻,脉弱无力,指纹淡.     

丙型肝炎病毒核心区基因在大肠杆菌中的高效表达

丙型肝炎病毒(HCV)是输血后及散发性非甲非乙型肝炎的主要病原,丙型肝炎易转为慢性肝炎,与肝癌及肝硬变关系密切。HCV核心区编码蛋白是研究重点之一。在研究过程中,首先应获得大量高效表达的HCV核心蛋白抗原。HCV基因组结构与黄病毒或瘟病毒相似,为长约9.4kb的单股正链RNA,含一个开放读码框架(open reading frame,OFR),编码含3010～3011个氨基酸残基的多蛋白前体,经宿主和病毒蛋白酶作用加工成结构蛋白(C,E1和E2/NS1)和非结构蛋白(NS2,NS3,NS4和NS5)。核心蛋白约含191个氨基酸,大小约19000～22000,其氨基酸序列十分保守,比较已有的HCV各分离株氨基酸序列,同源性超过95％。其N端三个亲水区的优势抗原表位主要是线性抗原决定簇,在此免疫优势区内出现的变异对免疫识别并没有很大影响。由于人感染HCV后,血清中     

人转化生长因子β1抗原决定簇与乙型肝炎核心抗原融合肽苗的构建与表达

目的原核表达、纯化人转化生长因子β1(TGFβ1)抗原决定簇与乙型肝炎核心抗原(HBcAg)的基因工程融合肽苗,并测定其抗原性。方法利用聚合酶链反应(PCR)法获得人TGFβ1抗原决定簇成熟编码区编码79-108位氨基酸的32肽基因片断,将其嵌合于HBcAg主要免疫优势区,构建符合开放读码框要求的重组嵌合表达质粒pET28a/HBcAg1-71-TGFβ132-HBcAg89-144,在大肠杆菌BL-21(DE3) 中表达,利用镍-亚硝胺乙酸-组氨酸亲和层析法纯化蛋白。电镜观察,酶联免疫吸附法及western blot检测融合蛋白的TGF β1和HBcAg抗原性。结果原核表达融合蛋白相对分子量为2.46×104,与理论预测一致,能形成颗粒,较天然的HBcAg颗粒大;具有TGFβ1抗原性而无HBcAg抗原性。结论构建的pET28a/ CTC融合蛋白可诱导产生抗TGFβ1抗体,为进一步动物实验及阻断TGFβ1抗纤维化治疗奠定基础。     

股骨头无菌性坏死76例护理体会

近年来，我院共为76例股骨头无菌性坏死患者行介入治疗，取得较好疗效。现将护理体会报告如下。     

安徽省部分基层医疗机构清洗消毒状况调查

摘要 目的 了解安徽省基层医疗机构清洗消毒灭菌基本情况,进行清洗消毒灭菌质量评价。方法 对省内3种背景下的基层医疗机构的清洗消毒基本情况进行问卷调查,选取其中部分机构进行现场采样,评估其清洗消毒灭菌质量。结果 安徽省基层医疗机构的清洗消毒工作存在供应模式落后、专业人员紧缺、基础建设不完善、人员培训不到位等问题,清洗消毒效果合格率低。结论 需要加强基层医疗机构清洗消毒专业培训,完善相关设施,增加技术支持,提高监管力度。     

hTRX PR39融合基因cDNA克隆的构建及鉴定

目的研究人硫氧还蛋白（hTRX）和抗菌肽PR39基因在脑缺血疾病治疗中的作用,构建hTRX PR39cDNA融合基因。方法设计合成PR39、hTRX正向和反向引物,采用PCR方法,扩增获得两端具有BamHI和Ecor721、Eco721和EcoI酶切位点的PR39 cDNA和hTRX cDNA片段,并分别克隆到pGEM T easy中,转化细菌,筛选阳性克隆,酶切鉴定并测序。BamH I和EcoR721双酶切pGEM T hTRX和pGEM T PR39,将获取的PR39/BamHI,EcoR721片段克隆到pGEM T hTRX/BamHI,EcoR721载体中,构建pGEM T hTRX PR39载体。结果经DNA测序证实,修饰过的hTRX cDNA、PR39 cDNA片段的核酸序列和推导的氨基酸同数据库资料一致。重组质粒pGEM T hTRX PR39酶切图谱证实hTRX PR39融合肽cDNA已克隆到pGEM T表达载体中。结论成功克隆出具有EcoR721和EcoRI、BamH I和EcoR721酶切位点的hTRX cDNA和PR39 cDNA片段,并构建pGEM T hTRX PR39载体。     

中药内服外洗治疗小儿外感发热50例观察

目的:观察中药内服外洗治疗小儿外感发热的临床疗效。方法:100例随机分为治疗组和对照组各50例,对照组用利巴韦林加入5%葡萄糖注射液静滴,治疗组用中药内服结合熏洗,3天后观察疗效。结果:总有效率治疗组90%、对照组76%,退热时间1天内治疗组30%、对照组20%,两组比较均有显著性差异(P0.05)。结论:中药内服外洗治疗小儿外感发热起效快,效果好,无不良反应。