大鼠Atohl真核表达载体pAtoh1-IRES2-EGFP的构建及转染293T细胞的研究

目的:利用基因工程方法克隆SD大鼠Atohl基因编码区序列,构建Atohl的真核表达载体pA-tohl-IRES2-EGFP,并验证其在293T细胞中的表达.方法:通过RT-PCR从SD大鼠结肠组织内扩增出Atohl基因全长CDS序列,并TA克隆于PMD-19T载体中.纯化回收的目的片段测序后连接于真核细胞表达载体pIRES2-EGFP中,构建pAtohl-IRES2-EGFP真核表达载体.再次测序后脂质体介导重组质粒转染293T细胞,荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白的表达.结果:测序后将扩增得到的大鼠Atohl CDS序列与GeneBank公布的参考序列对比,有两处碱基发生突变,但克隆序列编码的氨基酸序列与参考序列完全一致,两处碱基应为单核苷酸多态性,突变为无义突变,不影响蛋白表达.双酶切和测序结果证明Atohl已正确地克隆到真核表达载体pIRES2-EGFP中,重组质粒转染293T细胞24 h后荧光显微镜下观察到绿色荧光蛋白表达.结论:获得正确Atohl编码序列,真核表达载体pAtohl-IRES2-EGFP构建成功并可以在293T细胞中表达,为进一步对感音神经性聋的基因治疗奠定了基础.     

大鼠核转录因子Atoh1的克隆表达及鉴定

目的利用基因工程方法克隆SD大鼠Atoh1基因CDS区序列,构建大鼠核转录因子Atoh1的真核表达载体并在真核细胞中表达。方法从两只SD大鼠结肠黏膜提取总RNA,采用逆转录PCR法扩增Atoh1基因CDS区序列并亚克隆于PMD-19T载体中。测序鉴定后将Atoh1基因连接于含有EGFP和内部核糖体转入位点(IRES)的真核细胞表达载体pIRES2-EGFP中,对重组质粒进行酶切鉴定和测序鉴定后,以脂质体介导法转染至293T细胞,荧光显微镜和Western blot检测其在293T细胞中的表达。结果扩增得到大鼠Atoh1 CDS区长1 056 bp,编码351个氨基酸,与GeneBank公布的参考序列对比,有两处碱基发生突变,但克隆序列编码的氨基酸序列与参考序列完全一致,两处碱基应为单核苷酸多态性(SNP),突变为无义突变,不影响蛋白表达。双酶切和测序结果证明Atoh1已正确地克隆到真核表达载体pIRES2-EGFP中,荧光显微镜和Western blot证实Atoh1目的蛋白能在293T细胞中稳定表达。结论基因工程方法可成功克隆出Atoh1编码序列,真核表达载体pAtoh1-IRES2-EGFP构建成功并可以在293T细胞中表达。     

护理科学发展呼唤创新型护理人才

从护理科学发展需要创新型护理人才、需要护理人员有理论创新意识、有科研兴护意识、能持续更新知识与能力方面,阐述了护理科学发展与创新型护理人才的紧密关系.提出护理创新需要营造鼓励创新、允许失败的探索氛围.创新是实现护理快速发展的重要因素,更是促进护理进步和发展的根本基础.     

培养护理人员创新能力的方法及效果

目的探讨提高护理人员创新能力的有效方法。方法采用创新理论讲座及护理实践中引导护理人员运用创新理论的方法对护理人员进行创新教育。分别对干预前、后护理人员的创新能力进行评估。结果创新教育干预后护理人员的创新能力提高。结论创新教育是提高护理人员创新能力的一种适用、可行的方法。     

呼吸道危险性异物及其处理(附720例临床分析)

对呼吸道危险性异物的危险性、并发症和手术的选择时机、手术的方法、麻醉方式以及抢救措施等进行了讨论,并对720例呼吸道危险性异物作了临床分析。     

感音神经性耳聋的基因治疗

感音神经性耳聋是耳鼻咽喉科的常见病、多发病之一,严重影响人类的健康和生活质量。本文从毛细胞的再生,内耳的解剖特点,神经营养因子作用及其借助于载体在内耳表达状况,基因导入途径等几方面探讨基因治疗的可行性及发展方向。     

浅谈医院信用伦理建设的现状与思路

分析了医院信用伦理的现状，认为医患信用缺失是当前医患关系紧张的主要原因，而医疗服务管理措施的相对滞后则成为影响医院信用建设的重要因素。据此提出了增进医患之间的理解与沟通；转换服务理念，提高服务质量；完善监督机制；提高医院对缺陷服务的认知能力以及健全随访信用制度等建议，以指导医院信用伦理建设实践。     

一腔热血献给医学事业——记全国“五一”劳动奖章获得者、西安医科大学第二附属医院院长陈君长

陈君长,河南濬县人。1960年毕业于西安医学院医疗系。长期从事临床骨病研治工作,1986年任西安医科大学第二附属医院党委代理书记、副院长,1987年底任该院院长。     

胎儿内耳外淋巴锌,铜,钙定量分析

采用阳极溶出法和化学发光法分别对胎儿内耳外淋巴锌,铜,钙含量及铜／锌比值进行定量分析,初步提出人体内耳外淋巴锌,铜,钙含量及比值的正常参考值,并建立了一种测定外淋巴的微量分析方法,此法用量少,灵敏度高,结果可靠,为耳聋的诊断治疗提供参考依据。     

大鼠背部毛乳头细胞的分离培养和鉴定

目的:建立一种高效分离成年SD大鼠背部毛乳头细胞(DPCs)的方法,考察DPCs在体外培养条件下的生长特性。方法:采用改良二步酶消化法分离大鼠背部DPCs,应用相差显微镜进行形态学观察,流式细胞技术检测细胞周期,细胞计数法绘制生长曲线,流式细胞技术和免疫细胞化学法检测细胞表面分子标志。结果:分离培养的DPCs多呈短梭形,融合前细胞呈现凝集性生长趋势;传代细胞呈多角形或短梭形,传代后第3天开始呈对数生长,第9天达增殖高峰。第1、3、5代的细胞增殖时间分别为68、52和36h。流式细胞仪检测第1、3、5代细胞周期,处于G0/G1期分别为(90.21±5.13)%、(81.23±1.85)%和(75.16±5.32)%,随着传代次数的增加,G0/G1期细胞比例逐渐下降,但仍大部分处于静止期;经免疫化学SABC法染色显示,α-SMA抗体表达阳性,CK抗体表达阴性,细胞表面分子表达CD44、CD90,但不表达CD34。结论:改良二步酶消化法能成功分离培养成年SD大鼠背部DPCs,体外培养的DPCs与干细胞的生物学特性相吻合,有望成为一种新的细胞替代疗法的种细胞来源。