用分子杂交方法研究鸭乙肝病毒感染和鸭肝病

嗜肝 DNA 病毒感染同肝炎、肝硬化和肝癌的相关关系是肝病学中的重大课题。除了 HBV 感染同人类肝病和肝癌的发生有关之外,一些动物嗜肝 DNA 病毒也有类似性。尽管 WHV、GSHV 和 DHBV 有类似于 HBV的形态、结构以及都能造成长期持续性感染,但 WHV 感染的土拔鼠和 GSHV 感染的金花鼠,两者的肝病病理学改变有显著差     

止嗽散加昧治疗小儿外感久咳90例

近年来笔者应用止嗽散加昧治疗小儿外感后久咳90例取得满意疗效，现总结如下。 1临床资料 90例患者均为门诊患儿，其中男性52例，女性38例；年龄最小6个月，最大11岁；病程最短13天，最长27天。临床表现为外感后咳嗽迁延，咳痰色白或黄白相间，以清晨咳嗽较为频繁。     

动物模型中人骨形态发生蛋白2重组腺病毒活性观测

目的:利用基因工程技术构建人骨形态发生蛋白2重组腺病毒,并进行体内表达,测定活性;为深入开展的基因治疗研究创造条件。方法:实验于2000-05/2002-06在西安交通大学第一附属医院骨科实验室完成。应用PCR技术扩增出人骨形态发生蛋白2全长基因,体外同源重组构建重组腺病毒后,随机将30只SD大鼠分为治疗组和对照组,每组15只,将纯化后的重组腺病毒50μL注入SD大鼠股部肌肉陷窝病损处,通过组织学染色、X射线片对动物模型的组织变化进行观测。结果:6周后治疗组可见明显骨诱导形成,2周时治疗组碱性磷酸酶活性明显高于对照组,重组腺病毒治疗组有明显的诱导成骨活性。结论:应用于动物实验中目的基因表达,并具有生物学活性。本研究是在骨缺损基因治疗的一次尝试,且人骨形态发生蛋白2重组腺病毒的构建成功,也为国内骨科疾病基因治疗的进一步研究提供了基础。     

PEI增强G250 DNA疫苗和重组肽疫苗的prime-boost免疫策略研究

目的 :探讨PEI作为免疫佐剂对G250抗原肽基因PVAX1/C-G250肽-C免疫保护效果的增强作用及联合应用CAIX蛋白疫苗进行PRIME—BOOST免疫程序免疫增强效果。方法:用Eco R I、Xho I和Eco R I、Sal I分别双酶切PVAX1及既往构建的p ET28a(+)/C-G250肽-C质粒。利用DNA重组技术构建重组质粒PVAX1/C-G250肽-C,酶切分析鉴定。大量提取质粒并分光光度计测质粒含量。将32只雌性昆明小鼠随机分为(A)裸DNA组,(B)DNA-PEI复合物组,(C)DNA-PEI+蛋白疫苗组,(D)空白对照组。按0,10,20,30天程序经股四头肌注射免疫。C组在第20天及第30天进行蛋白冲击。初次免疫前和第40天鼠尾取血,ELISA法检测抗体滴度。流式细胞术测淋巴细胞亚群CD4+和CD8+。结果:酶切及基因测序鉴定证实G250抗原肽c DNA正确插入PVAX1/C-G250肽-C真核表达的重组质粒中。昆明小鼠经4次免疫后,3个实验组都产生了特异性的体液和细胞免疫反应,B组的抗体滴度1:1.28×104及CD4+、CD8+达26.12%和12.60%,明显高于A组的1:3.2×103和CD4+,CD8+占到19.32%和10.74%。而蛋白冲击组的1:5.12×104和CD4+,CD8+占到41.96%和15.14%,明显高于B组(P0.05)。结论:成功构建重组质粒PVAX1/C-G250肽-C。该DNA疫苗与PEI和G250蛋白疫苗联合使用后产生极强的免疫原性,诱导产生了高滴度、高特异性抗体及细胞免疫反应。证实G250DNA疫苗联合PEI使用并进行蛋白疫苗冲击的免疫策略可产生强大的免疫保护作用。为恶性肿瘤的术后辅助治疗提供新的思路和方法。     

重组基因c-Aβ-c的构建及其表达蛋白的免疫原性分析

目的:构建原核表达质粒pHGhis/c-Aβ-c,并在大肠杆菌中表达,观察融合蛋白c-Aβ-c的免疫原性,为阿尔茨海默病(AD)基因工程疫苗的研究打下基础。方法:采用PCR法,分别扩增编码HBcAg的1~71、88~144氨基酸的基因片断(HBc1~71和HBc88~144),以及编码淀粉样肽Aβ1-42的基因。将后者连接于HBc1~71和HBc88~144之间,构建重组质粒pGEMEX/c-Aβ-c,并将重组基因亚克隆于原核表达载体pHGhis中,构建表达质粒pHGhis/c-Aβ-c,通过温度诱导表达。用SDS-PAGE(考马斯亮蓝染色)检测融合基因的表达。以融合蛋白经腹腔注射免疫BALB/c小鼠,用间接ELISA法检测小鼠血清中抗-Aβ抗体的滴度。结果:经酶切鉴定、DNA序列测定证实,融合基因重组于表达质粒之中,表达质粒与理论设计相符。诱导表达后,表达蛋白约占细菌沉淀的16%。BALB/c小鼠经3次免疫后,其血清中抗-Aβ抗体的滴度可达1∶16000,且检测不到抗-HBcAg抗体。结论:c-Aβ-c融合基因在大肠杆菌中可高效表达,表达的融合蛋白具有较强的免疫原性。     

上海市公共卫生临床中心新型冠状病毒肺炎疫情下脊柱外科临床诊疗规范

新型冠状病毒肺炎(COVID-19)传染性较强,虽此病以轻症为主,但仍有一定病死率。尽管世界各国都采取相应措施,但COVID-19患者数量仍持续增加,疫情形势依然严峻,截至2月26日全国累计确诊78 191例,死亡2 718例。今后需要手术治疗的患者中难免会有COVID-19患者,外科医护及相关人员在积极救治患者的同时,自身防护也非常重要,应避免发生因手术导致医护交叉感染。为规范脊柱外科患者合并这一新发传染病的诊治,特制定上海市公共卫生临床中心关于"脊柱外科患者合并COVID-19"的诊疗规范。     

par-4 SAC基因的克隆及序列测定

目的:利用基因工程技术对 par-4 SAC 进行基因克隆并测定其序列,为进一步诱导肿瘤细胞靶向性凋亡的基因治疗奠定基础.方法:采用非对称互补引物/模板法,制备两端含有酶切位点的 par-4 SAC 的 cDNA,PCR产物克隆入 pGEM-T Easy 载体并转化感受态大肠杆菌 E.coli DH5α菌株,随机挑取数个菌落,筛选鉴定并测序.结果:经酶切鉴定、测序分析,表明所插入的基因片断为 par-4 SAC 基因,与设计完全相同.结论:应用非对称互补引物/模板法克隆 par-4 SAC 基因是成功及可行的.     

卫校学生吸烟现状和态度调查分析

学生吸烟对身心危害较大,引起了全社会的关注.为了探索控制学生吸烟的有效措施,我们于2000年3月对中等卫校学生的吸烟状况和态度进行了调查,结果如下.     

par-4 SAC基因的克隆及序列测定

目的：利用基因工程技术对par-4 SAC进行基因克隆并测定其序列，为进一步诱导肿瘤细胞靶向性凋亡的基因治疗奠定基础。方法：采用非对称互补引物／模板法，制备两端含有酶切位点的par-4 SAC的cDNA，PCR产物克隆人pGEM—T Easy载体并转化感受态大肠杆菌E．coli DH5α菌株，随机挑取数个菌落，筛选鉴定并测序。结果：经酶切鉴定、测序分析，表明所插入的基因片断为par-4 SAC基因，与设计完全相同。结论：应用非对称互补引物／模板法克隆par-4 SAC基因是成功及可行的。     

肝性腹水的发生机制

腹水是肝硬化病人常见而突出的临床体征。顽固性腹水不但治疗困难,而且提示病人预后不佳。肝性腹水可以自发或由感染、手术、上消化道大出血等促发而成,但腹水的形成和发展都是由全身病理生理变化和门静脉、肝静脉、肝淋巴液回流障碍两种因素决定的。充分地认识肝性腹水形成的有关