重组腺相关病毒rAAV—NT4-ADNF-9转染大鼠耳蜗组织的体外研究

目的：包装携载神经营养素（NT4）与活性依赖性神经营养因子-9（ADNF-9）融合基因的重组腺相关病毒rAAV-NT4-ADN-9，并观察该重组病毒对体外培养的耳蜗组织的转染。方法：使用pSSHG-CMV-NT4-ADN-9、pFG140和pAAV／Ad三种质粒共转染293包装细胞，制备ADN-9重组腺相关病毒（AAV），应用斑点杂交实验检测重组病毒滴度；体外分离培养新生SD大鼠的耳蜗毛细胞；将重组病毒感染体外培养的新生SD大鼠耳蜗毛细胞，于24h后提取组织行RT-PCR以检测rAAV—NT4-ADNF-9对耳蜗的转染。结果：应用斑点杂交实验检测重组病毒滴度为2×10^14cfu／L，表明成功构建了重组AAV载体。成功分离培养新生SD大鼠的耳蜗毛细胞后，经RT—PCR反应，琼脂糖凝胶电泳检测结果显示NT4-ADNF-9在耳蜗组织中得到表达。结论：构建的重组病毒rAAV-NT4ADNF-9在体外可成功转染耳蜗组织，用于基因治疗的研究。     

重组质粒pYTA/Aβ-HBcAg的构建及其在大肠杆菌中的表达

目的 :研究 β 淀粉样肽 (Aβ)与HBcAg的融合基因Aβ HBcAg的原核表达 ,并检测表达的融合蛋白Aβ HBcAg的免疫原性。方法 :从重组质粒 7Z/Aβ HBcAg中 ,切下含Aβ HBcAg的基因片段 ,将其融合于质粒pYTA1的lac启动子之后 ,构建重组表达质粒pYTA/Aβ HBcAg。以此重组质粒转化大肠杆菌DH5α,在IPTG诱导下表达。超声破碎表达的细菌 ,通过SDS PAGE及考马斯亮蓝染色 ,检测融合蛋白Aβ HBcAg的表达。采用ELISA法检测融合蛋白的反应原性。融合蛋白经饱和硫酸铵盐析法分离和纯化后免疫BALB/c小鼠 ,用ELISA法检测血清中抗 Aβ抗体的滴度。 结果 :融合蛋白以可溶性形式存在于细菌裂解液的上清中 ,其表达量为菌体总蛋白量的 7%。表达的融合蛋白既有Aβ的反应原性 ,又有与HBcAg的反应原性。经 3次免疫后 ,BALB/c小鼠血清中抗 Aβ抗体的滴度最高可达为 1∶16 0 0 0。结论 :融合基因Aβ HBcAg可在大肠杆菌DH5α中表达。表达产物为可溶性蛋白 ,存在于细菌裂解液的上清中 ,具有较强的免疫原性。本研究为正在进行的AD基因工程疫苗的动物实验打下了基础     

抗血管生成肽βpep-25重组原核表达质粒的构建及鉴定

目的： 合成抗血管生成肽βpep-25片断, 构建并鉴定含βpep-25肽的重组原核表达质粒.方法： 人工设计合成βpep-25肽序列片断, 经测序正确后, 利用基因克隆技术将其克隆到pGEM-T easy载体中, 构建重组质粒pGEM-T-βpep-25;用Nae I和BamH I双酶切pGEM-T-βpep-25后, 将T-βpep-25肽片断克隆到经Nae I和BamH I双酶切的重组载体pBV220-NT4中, 构建重组原核表达质粒pBV220-NT4-βpep-25, 并对其分别用BamH I酶切, EcoR I和BamH I双酶切分析.结果： 经酶切分析和DNA测序人工合成的肽βpep-25序列（113 bp）与文献报道结果一致;分别用BamH I酶切, EcoR I和BamH I双酶切重组原核表达质粒pBV220-NT4-βpep-25可以得到4 030 bp、 364 bp和3 666 bp的片段, 结果表明目的肽片段已经成功地克隆到了重组表达载体中, 说明重组原核表达质粒构建成功.结论： 抗血管生成肽βpep-25重组原核表达质粒的构建成功, 为进一步在细胞内外及动物模型研究其作用机制和抗肿瘤作用奠定了基础.     

通冠胶囊的急性毒理实验

通冠胶囊是由北黄芪、丹参等组成的口服制剂，具有益气活血、破瘀通络的功效，主治各种类型的冠心病及冠状动脉介入术后的再狭窄，已经应用临床多年。现为观察该制剂的毒性及安全性，进行急性毒性的实验研究，报道如下。     

分泌型凋亡素真核表达载体的构建及对肝癌细胞HepG2凋亡的影响

目的 构建含有NT4和HA2-TAT的分泌型VP3真核表达载体,并观察其表达对人肝癌细胞HepG2和小鼠成纤维细胞NIH3T3的影响.方法 构建了含鸡贫血病毒VP3基因和NT4、HA2-TAT基因的分泌型真核表达载体--NT4-Apoptin-HA2-TAT重组腺相关病毒载体.体外转染人肝癌细胞HepG2和小鼠成纤维细胞NIH3T3,用MTT法和流式细胞学,检测凋亡素融合基因诱导细胞凋亡的效果.结果 携带融合基因的重组腺相关病毒感染人肝癌HepG2细胞48 h后,显示了很强的诱导肿瘤细胞凋亡的能力.而对小鼠成纤维细胞NIH3T3细胞无明显凋亡作用.结论 分泌型NT4-Apoptin-HA2-TAT重组腺相关病毒载体转染细胞后能够被正常分泌、穿膜并特异性诱导肿瘤细胞凋亡,为肿瘤的基因治疗提供了新的思路.     

球结膜脂肪瘤一例

球结膜脂肪瘤一例济宁市第一人民医院杨广，徐美玲球结膜脂肪瘤罕见，我们遇到１例，报告如下。患者，男，５岁，自幼发现左眼长肿物，生长缓慢。查体：左眼球结膜颗则见一肿物，活动，边界不清。于１９９３年１２月２５日全麻下行肿物切除术。术中见：肿物位于球结膜下１...     

围肾移植术期凝血弹性图的变化

【目的】观察围肾移植术期凝血弹性图(TEG)的变化,探讨围肾移植术期的凝血状况。【方法】40例硬外麻下行肾移植术病人,均于术前、移植肾动静脉开放后10min及术毕采静脉血检测赛力特(10g／L)激活的全血TEG参数,包括反应时间(tr／min)、血凝块形成时间(tk／min)、α角(α／°)、最大振幅(hMA／mm)及凝血指数(CI)。其中随机选择20例患者,术前同时检测肝素酶修正的TEG。【结果】术前TEG参数均在正常范围内,且肝素酶修正的TEG与无肝素酶的TEG参数相比差异无显著性(P>0.05);动静脉开放10min后的TEG参数中tr值低于正常值,CI及hMA均高于正常值,与术前值相比,均表现为tr值、tk值缩短,hMA与CI增加(P<0.05);术毕TEG参数中tr、tk、α角及CI均正常,与术前比较,tr缩短,CI增加,但无显著差异(p>0.05)。而hMA显著增加(P<0.05)且超过正常范围。【结论】术前体内血液无肝素化效应,移植肾动静脉开放后,TEG提示血液呈高凝倾向,有潜在血栓形成的可能,且可能持续到术后。     

阿尔茨海默病患者α巨球蛋白与β淀粉样肽结合能力的实验研究

近来一些研究结果证实α2巨球蛋白(α2M)具有同β-淀粉样肽(Aβ)的结合，抑制Aβ积聚和纤维形成，参与Aβ体内运转，同时促进Aβ的胞饮清除等多种功能。为了研究老年人尤其是阿尔茨海默病(AD)患者体内的α2M在Aβ代谢清除中的作用改变，我们研究了AD患者及其健康老年人同健康青年人外周血的α2M同Aβ的结合能力差异。     

三拗汤合止嗽散治疗小儿过敏性咳嗽38例

过敏性咳嗽是哮喘的一种特殊表现形式,亦称咳嗽变异性哮喘,多见于儿童,是儿科常见疾病。笔者2002年3月~2006年5月,运用三拗汤合止嗽散治疗小儿过敏性咳嗽38例,并与西药对照组38例相比较,现将观察结果报道如下。1临床资料1.1一般资料本组76例,均为本院儿科门诊患者。其中治疗组3