重组质粒pYTA/Aβ-HBcAg的构建及其在大肠杆菌中的表达

目的 :研究 β 淀粉样肽 (Aβ)与HBcAg的融合基因Aβ HBcAg的原核表达 ,并检测表达的融合蛋白Aβ HBcAg的免疫原性。方法 :从重组质粒 7Z/Aβ HBcAg中 ,切下含Aβ HBcAg的基因片段 ,将其融合于质粒pYTA1的lac启动子之后 ,构建重组表达质粒pYTA/Aβ HBcAg。以此重组质粒转化大肠杆菌DH5α,在IPTG诱导下表达。超声破碎表达的细菌 ,通过SDS PAGE及考马斯亮蓝染色 ,检测融合蛋白Aβ HBcAg的表达。采用ELISA法检测融合蛋白的反应原性。融合蛋白经饱和硫酸铵盐析法分离和纯化后免疫BALB/c小鼠 ,用ELISA法检测血清中抗 Aβ抗体的滴度。 结果 :融合蛋白以可溶性形式存在于细菌裂解液的上清中 ,其表达量为菌体总蛋白量的 7%。表达的融合蛋白既有Aβ的反应原性 ,又有与HBcAg的反应原性。经 3次免疫后 ,BALB/c小鼠血清中抗 Aβ抗体的滴度最高可达为 1∶16 0 0 0。结论 :融合基因Aβ HBcAg可在大肠杆菌DH5α中表达。表达产物为可溶性蛋白 ,存在于细菌裂解液的上清中 ,具有较强的免疫原性。本研究为正在进行的AD基因工程疫苗的动物实验打下了基础     

分泌型凋亡素真核表达载体的构建及对肝癌细胞HepG2凋亡的影响

目的 构建含有NT4和HA2-TAT的分泌型VP3真核表达载体,并观察其表达对人肝癌细胞HepG2和小鼠成纤维细胞NIH3T3的影响.方法 构建了含鸡贫血病毒VP3基因和NT4、HA2-TAT基因的分泌型真核表达载体--NT4-Apoptin-HA2-TAT重组腺相关病毒载体.体外转染人肝癌细胞HepG2和小鼠成纤维细胞NIH3T3,用MTT法和流式细胞学,检测凋亡素融合基因诱导细胞凋亡的效果.结果 携带融合基因的重组腺相关病毒感染人肝癌HepG2细胞48 h后,显示了很强的诱导肿瘤细胞凋亡的能力.而对小鼠成纤维细胞NIH3T3细胞无明显凋亡作用.结论 分泌型NT4-Apoptin-HA2-TAT重组腺相关病毒载体转染细胞后能够被正常分泌、穿膜并特异性诱导肿瘤细胞凋亡,为肿瘤的基因治疗提供了新的思路.     

重组腺相关病毒rAAV—NT4-ADNF-9转染大鼠耳蜗组织的体外研究

目的：包装携载神经营养素（NT4）与活性依赖性神经营养因子-9（ADNF-9）融合基因的重组腺相关病毒rAAV-NT4-ADN-9，并观察该重组病毒对体外培养的耳蜗组织的转染。方法：使用pSSHG-CMV-NT4-ADN-9、pFG140和pAAV／Ad三种质粒共转染293包装细胞，制备ADN-9重组腺相关病毒（AAV），应用斑点杂交实验检测重组病毒滴度；体外分离培养新生SD大鼠的耳蜗毛细胞；将重组病毒感染体外培养的新生SD大鼠耳蜗毛细胞，于24h后提取组织行RT-PCR以检测rAAV—NT4-ADNF-9对耳蜗的转染。结果：应用斑点杂交实验检测重组病毒滴度为2×10^14cfu／L，表明成功构建了重组AAV载体。成功分离培养新生SD大鼠的耳蜗毛细胞后，经RT—PCR反应，琼脂糖凝胶电泳检测结果显示NT4-ADNF-9在耳蜗组织中得到表达。结论：构建的重组病毒rAAV-NT4ADNF-9在体外可成功转染耳蜗组织，用于基因治疗的研究。     

QTd及QTcd评价冠心病心肌缺血的临床研究

目的通过观察凹间期离散度（QTd）及校正QT间期离散度（QTcd）与冠心病心肌缺血的关系，分析QTd及QTcd评价心肌缺血的临床意义。方法选择60例冠心病的患者，于冠脉造影术前行常规12导联同步心电图检查，比较不同的冠心病类型、病变冠脉支数及病变血管部位的QTd及QTcd的差异性。结果急性心梗患者的QTd及QTcd高于不稳定型心绞痛及稳定型心绞痛的QTd及QTcd，三者之间差异有统计学意义（P〈0．01）。双支病变患者的QTd及QTcd高于单支病变的患者（P〈0.05），三支或多支病变的患者高于双支病变的患者（P〈0．01）。LAD病变的QTd及QTcd高于RCA及LCX病变，LAD与RCA及LCX之间差异有统计学意义（P〈0．05），但RCA与LCX之间差异无统计学意义。前壁心梗患者的QTd及QTcd高于下后壁与侧壁，但各组间比较差异无统计学意义（P〉0．05）。结论QTd及QTcd是评价冠心病心肌缺血的敏感指标，并与心肌缺血的程度及范围成正比。     

起搏模式对病态窦房结综合征患者中医证候及血流动力学的影响

目的 探讨起搏器不同起搏模式对病态窦房结综合征患者中医证候的影响及其血流动力学机制.方法 75例病态窦房结综合征患者在起搏器植入术前及术后1个月进行证候症状积分及血流动力学指标检查,比较不同起搏模式间证候症状积分及血流动力学指标的差异性.结果 起搏器植入术后中医证候症状积分均低于手术前(P<0.05).AAI起搏及DDD起搏对左室射血分数(LVEF)、每搏射血量(SV)、心排血量(CO)、心排血指数(CI)、左室舒张末容积(LVEDV)的改善与VVI起搏比较差异有统计学意义(P<0.05),AAI起搏对CO、CI及LVEDV的改善与DDD起搏相比差异有统计学意义(P<0.05).结论 起搏器植入可改善病态窦房结综合征患者血流动力学及中医证候,而不同的起搏模式中,AAI起搏优于DDD起搏优于,VVI起搏,提示起搏治疗可通过血流动力学因素中CO、CI、LVEDV从而影响病态窦房结综合征的中医证候.     

三拗汤合止嗽散治疗小儿过敏性咳嗽38例

过敏性咳嗽是哮喘的一种特殊表现形式,亦称咳嗽变异性哮喘,多见于儿童,是儿科常见疾病。笔者2002年3月~2006年5月,运用三拗汤合止嗽散治疗小儿过敏性咳嗽38例,并与西药对照组38例相比较,现将观察结果报道如下。1临床资料1.1一般资料本组76例,均为本院儿科门诊患者。其中治疗组3     

美托洛尔对心衰大鼠肌浆网Ca2+-ATP酶及心功能的影响

目的 探讨美托洛尔对心衰大鼠肌浆网Ca2+-ATP酶及心功能的影响.方法 腹主动脉缩窄法建立心衰大鼠模型,同时设假手术组.对心衰大鼠随机分为心力衰竭组及美托洛尔组10 mg/(kg·d),观察6周,行心脏超声、血流动力学检查及SERCA2a蛋白及活性测定.结果 同假手术组比较,心衰大鼠左室舒张末压(LVEDP)显著升高,短轴缩短率(FS)、左室收缩压(LVSP)、压力最大上升及下降速率(±dp/dt max)显著降低(P＜0.05),左室收缩、舒张末直径(LVESD/LVEDD),左室后壁厚度(LVPWD)、室间隔厚度(VSD)及左室质量指数(LVWI)显著增加(P＜0.05);美托洛尔治疗后,LVSP、±dp/dt max较心衰组显著增加(P＜0.05),LVEDD、VSD、LVWI显著减小(P＜0.05),但未达到假手术组水平(P＜0.05);同心衰组比较,美托洛尔对SERCA2a蛋白量无明显影响,能显著升高其活性(P＜0.05),但未达到假手术组水平(P＜0.05).结论 美托洛尔对SERCA2a蛋白量无明显影响,但能显著升高其活性,这可能是其改善心衰大鼠的心脏功能,抑制心肌重塑的机制之一.     

携强绿色荧光蛋白重组慢病毒的构建及其在原代培养SD大鼠皮层神经细胞中的表达

目的：构建携带强绿色荧光蛋白的重组慢病毒（Lent/EGFP）,感染原代培养SD大鼠皮层神经细胞,观察其感染能力及报告基因的表达水平。方法：采用PCR方法克隆EGFP cDNA;将EGFP基因片段亚克隆到慢病毒穿梭质粒多克隆位点内;用4质粒共转染系统在293ET细胞中包装出携带EGFP基因的重组慢病毒Lent/EGFP;重组病毒感染NIH 3T3细胞,FACS检测重组病毒滴度;Lent/EGFP感染体外培养的原代SD大鼠皮层神经细胞,共聚焦荧光纤维镜观察原代神经细胞内绿色荧光蛋白的表达情况。结果：基因测序证明克隆的EGFP cDNA与GenBank提供的序列完全一致;琼脂糖凝胶电泳结果证实EGFP正确插入pLenti6/V5TOPO;FACS检测病毒滴度为2×10⁶;在体外分离培养的原代SD大鼠皮层神经细胞中,重组病毒感染72 h后可见较强的绿色荧光蛋白表达。结论：采用改良的4质粒共转染方法成功构建了携EGFP的重组慢病毒载体;Lent/EGFP对非分裂的神经细胞具有较强的感染能力,且携带的EGFP基因可以在神经细胞内有效表达。     

咪唑安定复合氯胺酮用于小儿基础麻醉的临床研究

目的　研究咪唑安定复合氯胺酮肌注或口服用于小儿基础麻醉的可能性。方法　 80例 1～ 8岁、ASAⅠ～Ⅱ级的患儿随机等分成四组 :A组 ,肌注氯胺酮 6mg/kg ;B组 ,肌注氯胺酮 4mg/kg +口服咪唑安定 0 2mg/kg ;C组 ,口服氯胺酮 5mg/kg +咪唑安定 0 5mg/kg ;D组 ,口服咪唑安定0 7mg/kg。观察各组麻醉诱导效果、循环呼吸变化及不良反应。 结果　 (1)B组与A组相比 ,起效更快 ,术中不良反应发生率更低 (P <0 0 5 ) ,而麻醉诱导效果无明显差异 (P >0 0 5 ) ;(2 )C组与A组相比 ,小儿更为合作 (P <0 0 1) ,HR增加不明显 (P >0 0 5 ) ,但起效更慢 (P <0 0 5 ) ,镇静程度不如后者 (P <0 0 5 ) ,但 80 %的患儿尚能与父母分离。结论　咪唑安定复合氯胺酮肌注用于小儿麻醉诱导要优于单纯肌注氯胺酮 ,而咪唑安定复合氯胺酮口服仍不失为一种可行的诱导方法。