缺氧缺血性脑病时大鼠兴奋性氨基酸含量以及某些药物的影响(论著摘要)

为了探讨药物干预对缺氧缺血性脑损伤（ＨＩＥ）脑内兴奋性氨基酸（ＥＡＡｓ）含量的影响,采用新生大鼠ＨＩＥ模型观察了脑活素、神经生长因子（ＮＧＦ）及丹参对脑组织ＥＡＡｓ的影响。１　材料和方法　７日龄Ｗｉｓｔａｒ大鼠随机分为对照组、ＨＩＥ组及药物干预组。药物干预组在造模型前３０ｍｉｎ腹腔注药１次,剂量分别为：按体重脑活素０．０５ｍＬ／２０ｇ,ＮＧＦ０．０２ｍｇ／２０ｇ,丹参０．２ｍＬ／２０ｇ。在ＨＩＥ后３０ｍｉｎ处死分离左右皮层及海马,用ＨＩＴＡＣＨＩ８３５－５０型氨基酸自动分析仪测定谷氨酸（Ｇｌｕ）…     

脑活素联合复方丹参治疗新生儿缺氧缺血性脑病的观察与护理

目的探讨脑活素联合复方丹参治疗新生儿缺氧缺血性脑病(HIE)的临床疗效。方法纳入我院儿科80例HIE患儿,随机分为观察组和对照组,每组各40例。对照组给予常规治疗方案,观察组在对照组基础上加用脑活素5 mL+5%葡萄糖注射液50 mL静滴,复方丹参2 mL+5%葡萄糖注射液50 mL静滴,1次/d,同时给予患儿精心的护理,10~14 d为一疗程,共1~2疗程。治疗结束后比较2组患儿临床疗效。结果观察组临床症状消失时间较对照组平均缩短1.9 d,比较差异有统计学意义(P<0.05),2组患儿智能发育指数(MDI)和运动发育指数(PDI)在2月时差异无统计学意义(P>0.05),1岁时观察组优于对照组(P<0.05)。结论联合使用脑活素和复方丹参治疗新生儿缺氧缺血性脑病,临床疗效明确,可明显改善患儿智能发育和运动发育指数。     

γ-羟基丁酸对大鼠局部脑缺血再灌流损伤的保护作用

目的观察γ-羟基丁酸(GHBA)对大鼠局部脑缺血再灌流兴奋性氨基酸(EAAs)含量的影响及对其缺血损伤的保护作用.方法建立大鼠局部脑缺血再灌流模型,观察并比较缺血再灌流对照组及GHBA组局部脑缺血再灌流后各时间点EAAs含量及神经计量病理损伤的差异.结果腹腔注射GHBA3.6ml@kg-1可明显减少局部脑缺血再灌流后各时间点EAAs的含量,缩小再灌流后各时间点脑梗死的体积.结论GHBA对局部脑缺血再灌流损伤有明显保护作用,这种保护作用与GHBA降低局部脑缺血再灌流区EAAs含量有关.     

FK506在颅脑损伤中作用的实验研究

目的 研究创伤性脑损伤(TBI)后，FK506对血浆一氧化氮合酶(NOS)、一氧化氮(NO)、脑组织炎症介质、自由基生成、兴奋性氨基酸(EAAs)水平的影响。方法 雄性SD大鼠采用液压损伤法制备脑损伤模型，随机分为损伤组、治疗组和对照组。治疗组于伤后5min开始，一次性腹腔注射FK506(3mg/kg)。伤后30min、6h、24h测量血浆NO、NOS和伤灶及周围脑组织的白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNFα)、超氧化物歧化酶(SOD)、髓过氧化物酶(MPO)、兴奋性氨基酸(EAAs)水平。结果 与损伤组相比，治疗组中NOS活性和NO水平显著降低，IL-6、TNFα完全被清除，SOD损耗减少，MPO活性减低，伤后30min组EAAs释放明显减少。结论 FK506能抑制伤后NO升高，减少EAAs释放，清除炎症介质，减少自由基生成，对减轻TBI后继发性脑损伤有较大应用价值。     

神经节苷脂GM1对大鼠液压伤后脑保护及其相关机理的研究

目的研究大鼠液压脑损伤后神经节苷脂GM1对脑组织含水量、自由基和兴奋性氨基酸(EAAs)的影响。方法雄性SD大鼠采用液压损伤法制备创伤性脑损伤模型。伤后5分钟,三个治疗组以不同剂量单次腹腔注射GM1,测量伤后30分钟脑组织自由基和EAAs浓度以及伤后24小时脑组织含水量。结果3 mg/kg和30 mg/kg剂量组,脑组织自由基和EAAs浓度明显降低,脑组织含水量明显减少。结论伤后早期足量给予GM1能减少自由基生成和降低脑组织EAAs浓度,减轻脑水肿。     

丹参素预处理对脑梗死大鼠血浆纤溶激活系统的影响

目的 观察丹参素预处理对脑梗死大鼠血浆纤溶激活系统的影响.方法 40只雄性大鼠,随机分为假手术组、脑梗死对照组、低剂量[5 mg/(kg·d)]丹参素组和高剂量[10 mg/(kg·d)]丹参素组,每组10只.应用自体血栓注入,制成大鼠脑梗死模型;用ELISA方法 检测血浆中组织型纤溶酶原激活物(t-PA)及其抑制物(PAI-I)含量;RT-PCR测定大鼠脑组织中t-PA mRNA及其PAI-I mRNA表达的变化.结果 与脑梗死对照组[(2.65±0.43)ng/ml]比较,低剂量及高剂最丹参素组t-PA含量[(3.29±0.13)ng/ml、(6.37±0.19)ng/ml]明显升高(均P＜0.01),两丹参素组之间差异亦有统计学意义(P＜0.0I);与脑梗死对照组比较,低剂量丹参素组PAI-I含量[(2.65±0.40)ng/ml]降低(P＜0.05),高剂量丹参素组PAI-I含量[(1.98±0.32)ng/ml]明显降低(P＜0.01),两丹参素组之间差异亦有统计学意义(P＜0.01);与脑梗死对照组比较,低剂量及高剂量丹参素组t-PA mRNA表达[灰度值分别为(0.37±0.14)、(0.46±0.12)]均明显升高(均P＜0.01),两丹参素组之间差异亦有统计学意义(P＜0.01);与脑梗死对照组比较,低剂量及高剂量丹参素组PAI-I mRNA表达[灰度值分别为(0.54±0.12)、(0.36±0.07)]均明显降低(均P＜0.01),两丹参素组之间差异亦有统计学意义(P＜0.01).结论 丹参素可以改善脑梗死大鼠纤溶功能,并且有剂量依赖性.     

盐酸苯海索对帕金森病大鼠脑内突触素和α-突触核蛋白的影响

目的 观察盐酸苯海索干预后的帕金森病(Parkinson's disease,PD)模型大鼠脑内突触素和α-突触核蛋白的表达改变,探讨盐酸苯海索引起帕金森病认知功能障碍的病理改变.方法 雄性Wistar大鼠选取30只,随机分为空白组及假手术组,30只模犁大鼠随机分为帕金森病组、药物干预组.水迷宫试验检测大鼠学习和记忆功能.免疫组化检测突触素和α-突触核蛋白的表达.结果 药物干预组突触素在额叶免疫反应阳性细胞数少于对照组,差异有统计学意义(P<0.01),α-突触核蛋白在额叶免疫反应阳性细胞数多于对照组,差异有统计学意义(P<0.01).结论 服用盐酸苯海索可导致大鼠记忆力减退,额叶α-突触核蛋白表达增多及突触素表达减少与服盐酸苯海索有关.     

17-β雌二醇对血管性痴呆大鼠认知功能和神经营养因子表达的影响

目的 研究17-β雌二醇对血管性痴呆(vascular dementia,VD)大鼠认知功能及脑组织神经生长因子(NGF)和脑源性神经营养因子(BDNF)表达的影响.方法 采用结扎双侧颈总动脉方法制备慢性前脑缺血动物模型,应用Y迷宫,免疫组化法和ELISA法检测腹腔注射17-β雌二醇60d后VD大鼠认知功能以及脑组织中NGF和BDNF含量变化.结果 与正常对照组对比,大鼠学习尝试次数,记忆测试10次的正确次数在造模60d后差异有显著性意义(P＜0.01),腹腔注射17-β雌二醇60d后,大鼠认知功显著改善;造模60d后的大鼠,其脑内NGF和BD-NF的含量较正常对照组显著增高,雌二醇组大鼠脑组织内NGF和BDNF的含量较模型组显著增高.结论腹腔注射17-β雌二醇可显著改善VD大鼠的认知功能,增加VD大鼠脑内NGF和BDNF含量.     

百日咳菌液致脑水肿时大鼠脑组织细胞因子的变化及机制

目的了解白细胞介素-1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)在感染性脑水肿(感脑)时的变化及其产生的可能机制.方法99只大鼠分成空白对照组(C组)、生理盐水组(NS组)、百日咳菌液组(PB组).NS组和PB组大鼠按注NS或PB后断头处死时间又分别分为30min、60min、120min、240min4个亚组.ELISA法测各组大鼠脑组织匀浆中的IL-1β和TNFα蛋白质水平,RT-PCR测定脑组织TNFαmRNA表达水平,电泳迁移率改变法(EMSA)检测核因子-κB(NF-κB)活性.结果注菌液后240min大鼠脑组织匀浆中的IL-1β(384.1±37.7pg/g)、TNFα(768.4±86.3pg/g)的含量明显增高,与C组、NS30min、NS60min、NS120min、NS240min及PB30min、PB60min和PB120min比较差异有非常显著性(P<0.01).RT-PCR发现TNFαmRNA表达信号在PB60min组开始增加,PB240min达高峰.NF-κB活性在PB60min组开始增加,PB120min和240min达高峰.结论脑组织中IL-1β、TNFα含量显著增加与感脑脑损害有关,其IL-1β、TNFα含量增多与NF-κB活性增加相关.     

脐血单个核细胞对血管性痴呆大鼠脑组织BDNF、NGF的影响

目的 观察颈内动脉输注脐血单个核细胞(HCMNCs)对血管性痴呆(VD)大鼠脑组织脑源性神经营养因子(BDNF)和神经生长因子(NGF)表达及大鼠学习记忆能力的影响. 方法 改良Pulsinellis四血管阻断法建立VD大鼠模型;大鼠受用随机数字表法分为对照组、模型组和治疗组;每组又分为2,4,8周三个时相点,每时相点12只.体外分离HCMNCs,术后24h颈内动脉输注3x106个BrdU标记细胞于治疗组;利用穿梭箱系统和ELISA法检测注射HCMNCs后2,4,8周VD大鼠学习记忆能力以及脑组织BDNF和NGF含量的变化. 结果 模型组大鼠主动回避反应比率显著低于对照组(P＜0.01),治疗组较模型组显著提高(P＜0.01).术后2周模型组大鼠脑BDNF、NGF含量较对照组显著增高(P＜0.01),4周时达到高峰(P＜0.01),8周时则明显下降,与2,4周时相比有显著性差异(P＜0.05);治疗组大鼠脑BDNF、NGF含量较模型组显著升高(P＜0.01),4周时最高(P＜0.05,P＜0.01),8周时略有下降,但仍维持在较高水平,与2,4周时相比无统计学意义(P＞0.05).结论 颈内动脉输注HCMNCs可显著改善VD大鼠学习记忆能力,推测原因为通过增加VD大鼠脑组织BDNF和NGF发挥作用.     

支气管哮喘大鼠肺内神经营养因子对气道高反应性影响的研究

目的 探讨支气管哮喘大鼠肺内神经营养因子水平的变化,及其与气道神经可塑性改变和气道高反应性间的关系. 方法 雄性SD大鼠40只按随机数字表法分为对照组、哮喘组、神经生长因子(NGF)+脑源性神经营养因子(BDNF)干预组和anti-NGF+anti-BDNF干预组(每组各10只),后三组通过鸡卵蛋白致敏激发建立哮喘模型并给予相应的干预.造模后第8周进行气道阻力测定,并留取左肺行HE染色及免疫组化染色检测肺组织中神经营养因子如NGF、BDNF的表达水平,RT-PCR法检测气道突触囊泡素(SYN)mRNA和神经丝(NF)mRNA的表达水平. 结果 哮喘组及NGF+BDNF干预组大鼠肺组织内可见大量炎症细胞浸润.哮喘组大鼠肺组织中NGF及BDNF的表达水平均明显高于对照组及anti-NGF+anti-BDNF干预组,差异有统计学意义(P＜0.05),而NGF+BDNF干预组肺组织中NGF及BDNF的表达水平明显高于哮喘组,差异亦有统计学意义 (P＜0.05).哮喘组及NGF+BDNF干预组较对照组的气道反应性增高,气道感觉神经元SYN mRNA及NF mRNA的表达水平也明显增高,差异均有统计学意义(P＜0.05).哮喘组大鼠肺组织中NGF及BDNF浓度与气道SYN表达呈正相关关系(r=0.889,P＜0.05;r=0.985,P＜0.05),与NF表达呈正相关关系(r=0.956,P＜0.05;r=0.927,P＜0.05),与气道反应性也呈正相关关系(r=0.938,P＜0.05;r=0.906,P＜0.05). 结论 NGF及BDNF可能参与了支气管哮喘大鼠气道神经可塑性改变的调节过程,从而导致气道高反应性的发生.     

轻度认知障碍和阿尔茨海默病患者血清中兴奋性氨基酸的含量

目的 研究遗忘型轻度认知障碍(amnestic mild cognitive impairment,aMCI)及阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)患者血清中兴奋性氨基酸(EAAs)含量的变化,探讨EAAs在二者发病中的作用.方法 使用高效液相法对30例aMCI、32例AD患者以及34名健康对照者血清中EAAs[谷氨酸、天门冬氨酸(Asp)]及EAAs N-甲基-D-Asp(N-methyl-D-aspartate,NMDA)受体的协同激动剂甘氨酸、丝氨酸、丙氨酸含量进行测定和比较.结果 aMCI组血清中的谷氨酸[(39.6±22.1)μmol/L]和丙氨酸[(282.5±71.3)μmol/L]含量高于健康对照组[(30.0±11.6)μmol/L,P=0.044;(240.7±46.3)μmol/L,P=0.007].而AD组血清中谷氨酸[(42.2±21.8)μmol/L]、甘氨酸[(464.2±142.6)μmol/L]明显高于健康对照组[P=0.010;(395.6±88.8)μmol/L,P=0.010];但aMCI组和AD组之间差异无统计学意义.AD组血清中Asp(P=0.011)和谷氨酸(P=0.017)的含量与MMSE得分呈正相关,轻度AD患者血清中这两种氨基酸含量[(42.1±21.3)、(55.0±29.0)μmol/L]要高于中重度AD患者[(25.4±9.2)μmol/L,P=0.023;(34.6±11.1)μmol/L,P=0.036].结论 EAAs可能参与AD的发病,并且与AD的严重程度存在一定的相关性;aMCI患者也存在着EAAs代谢的紊乱,提示其可能和AD有着类似的发病机制.     

酸性肽对AD大鼠学习记忆功能及NGF和NMDAR1表达的影响

目的 研究酸性肽对AD大鼠脑中NGF、NMDAR1表达的影响.方法 采用大鼠脑组织立体定位微量注射技术,建立AD动物摸型,用不同剂量的AP对AD大鼠进行治疗.通过测定与学习记忆有关的行为学指标及脑内与AD相关的NGF、AB水平的变化,并与正常组、模型组、生理盐水组结果 比较,对数据进行统计处理.结果 模型组与正常组比较,学习记忆成绩明显下降(P＜0.01);各治疗组与模型组比较,学习记忆成绩明显提高(P＜0.01);模型组与空白组比较,大鼠基底前脑中NGF水平显著降低,皮质中NMDAR1含量显著增加,各治疗组分别与模型组比较,大鼠基底前脑中NGF水平显著降低,皮质中NMDAR1含量显著增加(P＜0.01).结论 AP可能通过上调AD基底前脑中NGF的水平并降低NMDAR1水平来发挥对AD的治疗作用.     

骨髓基质细胞及血管内皮祖细胞共移植对局灶性脑缺血大鼠系列生长因子表达的影响

目的 观察经静脉移植骨髓基质细胞(BMSCs)及血管内皮祖细胞(EPCs)后血管内皮生长因子(VEGF)、基质细胞衍生因子-1(SDF-1)、碱性成纤维生长因子(bFGF)、胰岛素样生长因子-1(IGF-1)、转化生长因子β(TGF-β)、血小板源性生长因子(PDGF)、脑源性生长因子(BDNF)、胶质源性生长因子(GDNF)和神经生长因子(NGF)这9种细胞因子的表达. 方法 80只健康成年Wistar 大鼠按照随机数字表法分为模型对照组、BMSCs移植组、EPCs移植组及联合移植组,每组20只.线栓法建立大鼠大脑中动脉闭塞模型.造模24h后,分别取浓度为3x106个/mL的BMSCs、EPCs悬液及两者混合液1mL经鼠尾静脉移植入BMSCs移植组、EPCs移植组及联合移植组;模型对照组鼠尾静脉注射1 mL生理盐水.移植后7d,实时荧光PCR、Western boltting检测各组大鼠脑内生长因子的表达. 结果 联合移植组中bFGF、VEGF、BDNF mRNA表达水平最高,与其他3组比较差异均有统计学意义(P＜0.05).BMSCs移植组中NGF、GDNF、TGF-β mRNA表达水平最高,与其他3组比较差异均有统计学意义(P＜0.05),联合移植组次之.EPCs组中PDGF-BB、IGF-1、SDF-1 mRNA表达水平最高,与其他3组比较差异均有统计学意义(P＜0.05),联合移植组次之. 结论 BMSCs及EPCs联合静脉移植可上调脑内生长因子表达水平,为提高细胞移植效率提供了新的尝试途径.     

神经干细胞在脑损伤模型中的迁移、成活和神经生长因子表达

目的 探讨神经干细胞在脑损伤模型中的迁移、成活和神经生长因子(NGF)表达.方法 SD大鼠30只随机分为3组:正常对照组(n=5)、损伤组(n =10)和移植组(n=15).正常对照组不做任何处理,损伤组和移植组均制备脑损伤模型,且移植组大鼠从尾静脉注入外源性神经干细胞.并观察神经干细胞在大鼠脑内的迁移和存活情况,同时通过免疫组织化学染色检测各组大鼠脑内NGF阳性细胞数量.结果 神经干细胞移植2周后,其向脑损伤区域发生迁移,并在损伤区域聚集和存活;且移植组NGF阳性细胞数目较正常对照组和损伤组显著增多(p＜0.05).结论 外源性神经干细胞经尾静脉注射移植后能自动向脑损伤区域迁移、聚集并存活,并可促进受损脑内的NGF表达.     

抽动障碍大鼠模型的建立与选择

目的 观察阿扑吗啡(APO)和亚氨基二丙腈(IDPN)诱导的抽动障碍(TD)模型大鼠的刻板运动和头动次数,挑选可以全面体现TD特征性行为变化的造模方法. 方法 SD大鼠30只按随机数字表法分为正常组、APO组、IDPN组,每组10只.APO组大鼠给予APO 2 mg/kg腹腔注射,IDPN组大鼠给予IDPN 150 mg/kg腹腔注射,正常组给予生理盐水腹腔注射,给药体积均为1mL/100 g、每天1次、连用7d,注射结束5 min后记录各组大鼠5～10 min、15～20 min、25～30 min、35～40 min、45～50 min、55～60 min时间段的刻板行为评分和5 min内大鼠头部抽动次数. 结果 IDPN组和APO组的大鼠头动次数明显比正常组多,IDPN组大鼠的头动次数多于APO组,差异均有统计学意义(P＜0.05);APO组大鼠在5～10 min、15～20 min、25～30 min、35～40 min时间段刻板行为评分高于正常组,IDPN组大鼠各个时段的刻板行为学评分均高于正常组,IDPN组大鼠在45～50min和55～60 min时间段刻板行为评分高于APO组,差异均有统计学意义(P＜0.05). 结论 IDPN诱导的TD模型能比较全面的再现TD的特征性行为变化,是较理想的动物模型.     

丹参多酚酸盐预处理对大鼠缺血再灌注损伤心脏、大脑组织TNF-α、IL-1β的影响

目的 探讨丹参多酚酸盐预处理后大鼠缺血再灌注损伤心脏、大脑组织肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)的变化.方法 40只Wistar大鼠随机分为假手术组、模型组、丹参多酚酸盐 2个剂量组(30 mg/kg和15 mg/kg),每组10只.丹参多酚酸盐 2个剂量组大鼠均给予相应浓度的药物皮下注射,而假手术组和模型组大鼠均给予相应体积的生理盐水注射,共7 d.末次给药1 h后,各组大鼠均开胸,假手术组以外的其他3组结扎左冠状动脉前降支和左右颈总动脉40 min,再灌注100 min,然后检测各组大鼠心脏、大脑组织中的TNF-α、IL-1β水平.结果 与模型组相比,丹参多酚酸盐 2个剂量组大鼠心脏、大脑组织中TNF-α、IL-1β水平降低(P<0.05);丹参多酚酸盐大剂量组心脏、大脑组织中TNF-α、IL-1β水平与丹参多酚酸盐小剂量组比较差异有统计学意义(P<0.05).结论 丹参多酚酸盐能够保护缺血再灌注损伤心脏和大脑,可能与其下调TNF-α、IL-1β水平有关.     

脑活素对周围神经损伤修复的实验研究

目的 研究脑活素对周围神经损伤的修复作用.方法 选取50只成年雌性Wistar大鼠,采取钳夹坐骨神经的方法制造周围神经损伤模型,随机分为5组,每组10只,分别为生理盐水空白对照组(A组)、甲钴胺阳性药物对照组(B组)、脑活素低剂量组(C组)、脑活素中剂量组(D组)及脑活素高剂量组(E组).各组进行相应药物处理一个疗程(10d)后,对各组大鼠进行坐骨神经指数、斜坡实验及小腿三头肌湿重改变等指标评估.制备大鼠坐骨神经半薄切片,行甲苯胺蓝染色,利用显微镜对神经有髓纤维进行计数.结果 D、E组与A组的比较,坐骨神经指数差异具有显著性(分别为P＜0.05、P＜0.01).E组与B、C组用药各组间坐骨神经指数的比较差异具有显著性(P＜0.05),余未见显著性差异.斜坡实验A组与C、D、E组各组差异有显著性(P ＜0.05、P＜0.05、P＜0.01).在各用药组间对比中,E组较B组差异具有显著性(P＜0.05).大鼠小腿三头肌湿重改变除E组与A组具有差异改变(P＜0.05)外,余无统计学意义.镜下观察,B、C、D、E组均与A组有显著差异(P值均＜0.01),其中效果最好的E组,与B组对比结果均具有差异性,尤其在平均直径和面积具有显著差异(P＜0.01).结论 脑活素对周围神经损伤有修复作用,其中高剂量组具有较好的疗效.     

氨基酸对NG2蛋白聚糖阳性神经祖细胞增殖的影响

目的探讨不同种类氨基酸对神经胶质抗原2(NG2)蛋白聚糖阳性神经祖细胞(NG2细胞)增殖的作用。方法从成年大鼠脑不同区域分离培养NG2细胞,以0.1-0.5mmol/L浓度不同种类氨基酸干预细胞72小时,以乳酸脱氢酶(LDH)分析法测定细胞活性。结果 0.3mmol/L谷氨酸和天冬氨酸显著增加不同脑区来源NG2细胞数(p<0.001)。结论高浓度兴奋性氨基酸(EAAs)能促进NG2细胞的增殖。     

脑活素治疗新生儿缺氧缺血性脑病30例及近期随访

我院儿科自1992-06～1993-10用脑活素治疗新生儿缺氧缺血性脑病(HIE)30例,取得良好疗效。对部分病例进行了1～2.5a的随访,从随访结果看出,脑活素可减少HIE后遗症的发生。现总结报告如下。