MicroRNA-141靶向Keap1调控Nrf2/ARE信号通路对乳腺癌T47D细胞活力的影响

目的:探讨微小RNA-141(miRNA-141)靶向Keap1调控Nrf2/ARE信号通路对乳腺癌T47D细胞活力的影响。方法:乳腺癌T47D细胞分别转染miRNA-141模拟物(mimic)和阴性对照序列(NC),作为miRNA-141组和NC组,并设立未转染空白对照组,采用real-time PCR法检测细胞中miRNA-141的含量;MTT法与荧光探针2’,7’-二氢二氯荧光素二乙酸酯(DCFH-DA)法分别检测细胞活力和活性氧簇(ROS)水平;Western blot法检测胞质接头蛋白Keap1、核因子E2相关因子2(Nrf2)、超氧化物歧化酶2(SOD2)和谷胱甘肽过氧化酶1(GPx1)的表达;双萤光素酶实验检测miRNA-141与Keap1的关系。结果:转染miRNA-141 mimic后,miRNA-141组的miRNA-141表达量明显增高,细胞活力、ROS水平和Keap1蛋白表达均下降,而细胞核Nrf2蛋白SOD2和GPx1表达升高(P0.05);双萤光素酶实验结果显示Keap1为miRNA-141的靶基因。结论:miRNA-141可能通过靶向负调控Keap1激活Nrf2/ARE信号通路,诱导抗氧化酶的表达,以降低细胞氧化应激水平,从而抑制乳腺癌细胞的活力。     

大鼠心肌缺血再灌注损伤与红花黄素的保护作用

目的：观察大鼠心肌缺血再灌注损伤模型心肌组织中超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶、诱导型一氧化氮合酶、总一氧化氮合酶活性及一氧化氮，丙二醛含量的变化，探讨红花黄素对离体大鼠缺血再灌注心肌的保护作用。 方法：①实验于2004—06／2005—02在南阳医学高等专科学校药理学教研室完成。选用健康Wistar大鼠32只，随机分为4组，每组8只：正常对照组、模型组、红花黄素组、地奥心血康组。②采用Langendofff创建的离体心脏灌流法建立离体大鼠心肌缺血缺氧再灌注损伤模型。以持续平衡的充有体积分数0．95O2＋0．05CO2混合气体的KH液进行非循环逆行灌流。灌注数秒后心脏恢复跳动。稳定15min后停灌30min，再灌40min，给药组在停灌前10min以红花黄素（0．33g生药／mL）或地奥心血康灌注，直至再灌后40min。正常对照组离体心脏持续灌注K—H液90min。模型组离体心脏灌注．K—H液35min，全心缺血25min，再灌注30min。③心肌中超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶、一氧化氮合酶活性变化、一氧化氮、丙二醛含量测定按南京建成生物工程研究所提供的相应试剂盒说明完成。④分别进行成组t检验和配对t检验。 结果：进入结果分析大鼠32只。①超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶活力：模型组明显低于其他3组（P〈0．05～0.01）；丙二醛含量：模型组明显高于其他3组（P〈0．05～0．01）。②一氧化氮含量：模型组明显低于其他3组（P〈0．05～0．01）。③诱导型一氧化氮合酶活力：地奥心血康组明显高于模型组（P〈0．01）；总一氧化氮合酶活力：模型组明显高于对照组和红花黄素组（P〈0．01），明显低于地奥心血康组（P〈0．05）。 结论：红花黄素对离体大鼠缺血再灌损伤的心肌具有保护作用，此作用可能与抑制心肌脂质过氧化、增强抗氧化能力有关。     

神经生长因子对新生大鼠缺氧缺血性脑病的保护作用

目的探讨神经生长因子(NGF)对新生大鼠缺氧缺血性脑病(H IE)的保护作用。方法建立H IE新生大鼠模型,给予腹腔注射NGF后,通过组织学观察、分光光度法及原位末端标记法对比观察NGF对H IE模型鼠脑组织结构、超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)及一氧化氮(NO)的含量和凋亡细胞数的影响。结果NGF组MDA、NO含量及凋亡细胞数明显低于模型组的测定值;SOD活性显著高于模型组的测定值。结论NGF能提高抗氧化酶活性,抑制氧自由基生成,阻断NO的异常代谢,降低细胞凋亡数,对H IE具有保护作用。     

前列腺癌特异突变DNA聚合酶β真核表达载体构建及鉴定

目的 构建前列腺癌(PCa)特异突变DNA聚合酶β(polβ)真核表达载体.方法 提取有特异DNA polβ突变的PCa组织的总RNA,通用引物逆转录成cDNA;用设计带有接头的DNA polβ全基因引物,PCR扩增PCa组织中呈现的突变型DNA polβ全基因;构建T-A克隆并进行重组体的筛选鉴定;亚克隆入表达载体pcDNA3.1并进行重组体的筛选和鉴定.结果 PCa特异突变DNA polβ基因扩增选择出P4(MI-polβ)和P5(M2-polβ)两个标本,构建重组有特定突变位点的polβ目的 基因的pcDNA3.1真核表达载体,经PCR扩增获得2个阳性集落.结论 经鉴定成功构建2例PCa特异突变DNA polβ真核表达载体(pcDNA3.1-M1 and peDNA3.1-M2).     

哮喘患者痰液中ECP和TNF-α水平变化及意义

目的：探讨哮喘患者痰液中嗜酸细胞阳离子蛋白（ECP）和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）水平变化与哮喘病的关系。方法：采用放射免疫法检测36例急性发作期、33例缓解期哮喘患者及30例正常对照痰液中ECP、TNF-α浓度。结果：哮喘急性发作期患者痰中ECP、TNF-α水平明显高于缓解期患者和正常对照组（P〈0．01），缓解期组痰中ECP水平高于正常组（P〈0.05）、TNF-α水平与正常组差异无显著性（P〉0.05）。结论：ECP和TNF-α参与哮喘的急性发作。     

绞股蓝对衰老大鼠的抗氧化作用

目的：观察绞股蓝总苷对老龄大鼠的抗氧化作用,探讨其延缓衰老的作用机制.方法：实验于2004-03/2005-02在郑州大学医学院完成.选用健康老龄（18个月）SD雄性大鼠50只,随机分为5组,每组10只.空白对照组给予蒸馏水灌胃,1次/d;人参皂甙组给于人参皂甙20 mg/kg灌胃,1次/d;绞股蓝总苷40,20及10 mg/kg组,分别给于相应剂量绞股蓝总苷灌胃,1次/d.灌胃30 d,取大鼠血清和脑组织,用硫代巴比妥酸法测定脂质过氧化物含量;用羟胺法检测超氧化物歧化酶活性及免疫器官指数.结果：50只大鼠均进入结果分析.①绞股蓝对衰老大鼠胸腺指数和脾脏指数的影响：绞股蓝40 mg/kg组和20 mg/kg组胸腺指数和脾脏指数明显高于空白对照组[绞股蓝40mg/kg组（18.98&;#177;1.95）,（22.12&;#177;2.41）,20 mg/kg组（17.98&;#177;1.64）,（22.89&;#177;1.98）,空白对照组（16.02&;#177;2.03）,（18.79&;#177;2.37）,P＜0.05].②绞股蓝对衰老大鼠血清及脑组织中超氧化物歧化酶和丙二醛含量的影响：绞股蓝40 mg/kg组和20 mg/kg组血清超氧化物歧化酶活力显著提高;脑组织中超氧化物歧化酶活力亦显著高于空白对照组[（176.24&;#177;19.56）,（154.35&;#177;17.23）,（113.14&;#177;13.56）kNu/L,P＜0.01];绞股蓝40mg/kg组大鼠血清丙二醛含量显著降低;绞股蓝40 mg/kg组和20 mg/kg组脑组织中丙二醛含量显著低于空白对照组[（102.24&;#177;11.32）,（132.54&;#177;12.03）,（199.32&;#177;20.15）μmol/L,P＜0.01）.结论：绞股蓝总苷能增强老龄大鼠机体抗氧化能力,延缓机体衰老.     

DNA聚合酶β靶向siRNA对PC3细胞生物学行为的影响

目的:观察DNA聚合酶(pol)B靶向siRNA表达载体转染人前列腺癌PC3细胞对细胞生物学行为的影响.方法:采用已构建的DNA polβ靶向siRNA真核表达载体(pSUPERneoGFP-PS1、pSUPERneoGFP-PS2和pSU-PERneoGFP-CS),利用脂质体包裹转染PC3细胞,并设未转染组和转染空...     

复方戒毒肽和激光对自愿戒毒者能量代谢的影响

目的：探讨复方戒毒肽和激光对自愿戒毒者能量代谢的影响。方法：30例自愿戒毒者被分成3组，分别是复方戒毒肽组、激光组、复方戒毒肽加激光组，每组10例。治疗前和治疗10d后分别抽血。血中乳酸，乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase，LDH)和Na^+-K^+-ATP酶的含量用生化方法分析。结果：复方戒毒肽加激光组血清中乳酸的浓度治疗前后分别是(2．75&;#177;0．28)，(3．04&;#177;0．36)mmol／g，差异有显著性意义(t=0．041．P&;lt;0．05)。3组血清中LDH的浓度治疗前分别是(1290．00&;#177;384．27)，(1410．00&;#177;443．35)，(980．00&;#177;285．97)U／L；治疗后分别为(2546．67&;#177;563．76)．(1960．00&;#177;514．67)，(1640．00&;#177;474．15)U／L,治疗前后比较，差异有显著性意义(t=0．00l，0．038，0．004，P&;lt;0．01～0．05)。3组全血中Na^+-K^+-ATP酶的浓度治疗后与治疗前比较，差异均无显著性意义(P&;gt;0．05)。结论：复方戒毒肽和激光治疗后均能增加志愿戒毒者血中LDH的含量。     

绞股蓝对衰老大鼠的抗氧化作用

目的：观察绞股蓝总苷对老龄大鼠的抗氧化作用，探讨其延缓衰老的作用机制。 方法：实验于2004-03／2005-02在郑州大学医学院完成。选用健康老龄(18个月)SD雄性大鼠50只，随机分为5组，每组10只。空白对照组给予蒸馏水灌胃，1次／d；人参皂甙组给于人参皂甙20mg／kg灌胃，1次／d；绞股蓝总苷40，20及10mg／kg组，分别给于相应剂量绞股蓝总苷灌胃，1次／d。灌胃30d，取大鼠血清和脑组织，用硫代巴比妥酸法测定脂质过氧化物含量；用羟胺法检测超氧化物歧化酶活性及免疫器官指数。 结果：50只大鼠均进入结果分析。①绞股蓝对衰老大鼠胸腺指数和脾脏指数的影响：绞股蓝40mg／kg组和20mg／kg组胸腺指数和脾脏指数明显高于空白对照组[绞股蓝40mg／kg组(18．98±1．95)，(22．12+2．41)，20mg／kg组(17．98±1．64)，(22．89±1．98)，空白对照组(16．02+2．03)，(18．79±2．37)，P<0．05]。②绞股蓝对衰老大鼠血清及脑组织中超氧化 物歧化酶和丙二醛含量的影响：绞股蓝40mg／kg组和20mg／kg组血清超氧化物歧化酶活力显著提高；脑组织中超氧化物歧化酶活力亦显著高于空白对照组[(176．24±19．56)，(154．35±17．23)，(113．14±13．56)kNu／L，P<0．01]；绞股蓝40mg／kg组大鼠血清丙二醛含量显著降低；绞股蓝40mg／kg组和20mg／kg组脑组织中丙二醛含量显著低于空白对照组[(102．24±11．32)，(132．54±12．03)。(199．32±20．15)μmol／L，P<0．01)。 结论：绞股蓝总苷能增强老龄大鼠机体抗氧化能力，延缓机体衰老。     

叶黄素对乳腺癌细胞活力的影响

目的:探究叶黄素对人乳腺癌T47D细胞活力的影响及其可能的作用机制。方法:将人乳腺癌T47D细胞随机分为对照组和叶黄素(浓度分别为6.25、12.5、25和50 mg/L)干预组,采用MTT法检测叶黄素对T47D细胞活力的影响;RT-qPCR检测核因子E2相关因子2(Nrf2),谷胱甘肽过氧化物酶1(GPx1)及超氧化物歧化酶2(SOD2)的mRNA水平;荧光探针DCFH-DA法检测细胞内活性氧簇(ROS)水平;Western blot检测Nrf2和p65的蛋白表达。结果:MTT结果显示叶黄素抑制人乳腺癌T47D细胞的活力,且呈时间和剂量依赖关系。RT-q PCR结果显示各浓度叶黄素干预组细胞中Nrf2,GPx1及SOD2的mRNA水平均较对照组升高(P0.05);且叶黄素干预组细胞内ROS水平显著下降(P0.01)。Western blot结果显示,叶黄素干预48 h后,Nrf2蛋白表达增加(P0.05),p65蛋白表达降低(P0.05),呈剂量依赖关系。结论 :叶黄素对乳腺癌细胞活力的抑制作用可能与上调Nrf2的表达、诱导抗氧化酶GPx1及SOD2 mRNA表达和降低氧化应激水平,进而阻断NF-κB信号通路有关。