ω-3长链多不饱和脂肪酸对培养的少突胶质前体细胞的影响

目的 探讨长链多不饱和脂肪酸(LPFA)对体外培养的成年海马少突胶质前体细胞(OPC)的存活及突起生长影响.方法 采用成组设计,使用从成年大鼠海马分离培养的两种神经祖细胞,分别经花生四烯酸(AA)、二十碳五烯酸(EPA)或二十二碳六烯酸(DHA)处理后,以乳酸脱氢酶(LDH)分析法测定细胞活性;再行免疫细胞荧光染色后做突起的定量测量.结果 EPA、DHA和AA在高浓度(50 μmol/L)时使海马硫酸软骨素蛋白聚糖(NG2)阳性OPC数虽显著增加(P<0.05),而EPA和DHA还可使OPC突起长度显著增长(P<0.05).结论 ω-3LPFA即EPA和DHA对OPC的增生和突起形成有促进作用.     

糖皮质激素对成体海马神经祖细胞的影响

背景：体内研究显示,高浓度糖皮质激素可抑制大鼠内源性神经前体细胞增殖。而神经胶质抗原2蛋白聚糖阳性神经祖细胞(NG2细胞)是成熟中枢神经系统中最大的增殖细胞群体,具有多分化潜能。 目的：观察糖皮质激素对体外培养的成熟大鼠海马由来的NG2细胞生存和增殖的影响。 方法：原代及传代培养成年大鼠海马NG2细胞,以0,0.1,1,10,100 μmol浓度糖皮质激素类药物地塞米松干预48 h后,采用乳酸脱氢酶分析法测定细胞活性,原位缺口末端标记技术(即TUNEL法)观察细胞凋亡情况,5’-溴脱氧尿嘧啶核苷掺入法鉴定细胞增殖状况。 结果与结论：1,10,100 μmol浓度地塞米松干预明显减少NG2细胞数,并显著增加TUNEL阳性细胞率,明显减少BrdU阳性细胞率。结果可见高浓度糖皮质激素能抑制NG2细胞分裂增殖,并诱导细胞凋亡,从而明显减少NG2细胞数。     

脑蛋白水解物注射液对培养神经胶质抗原2阳性神经祖细胞的影响

背景：脑蛋白水解物注射液能缓解多种神经系统疾病的症状,但其作用机制并不明确。研究显示,脑蛋白水解物注射液在体内和体外实验中有促进神经发生的潜能。目的：观察脑蛋白水解物注射液对培养的神经胶质抗原2阳性神经祖细胞增殖和分化的影响。方法：取成年大鼠海马原代及传代培养神经胶质抗原2细胞,以免疫荧光染色法鉴定细胞性质,以乳酸脱氢酶分析法测定细胞活性,以原位缺口末端标记技术（即TUNEL法）观察细胞凋亡,BrdU掺入法鉴定新生细胞。结果与结论：脑蛋白水解物注射液干预显著减少TUNEL阳性细胞数,并明显增加神经胶质抗原2细胞数和神经胶质抗原2细胞中微管相关蛋白2a＋2b、突触蛋白I、y-氨基丁酸和囊泡 y-氨基丁酸转运体表达水平。说明脑蛋白水解物注射液能抑制神经胶质抗原2细胞凋亡,促进神经胶质抗原2细胞增殖,并能促进神经胶质抗原2细胞向神经元（特别是y-氨基丁酸能抑制性中间神经元）分化。     

利美尼定促进突变SOD1蛋白质降解的作用研究

目的利美尼定对家族性肌萎缩侧索硬化症(ALS)相关突变蛋白质SOD1G93A的作用机制.方法用瞬时转染的方法在运动神经元样细胞系NSC-34中过表达WTSOD1,与家族型ALS相关的SOD1G93A突变蛋白,再给予自噬通路的特异性诱导剂和阻断剂,通过Western blot蛋白印迹法检测突变SOD1、自噬标记物的蛋白质表达水平.结果自噬诱导剂trehalose可以使SOD1G93A蛋白质表达水平明显减少.在自噬阻断剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)的干预下,SOD1G93A蛋白质表达水平明显升高.l0uM利美尼定能够明显降低G93A SOD1的表达,但对WT SOD1的表达水平无明显影响.结论SOD1G93A主要经由自噬途径降解,利美尼定能够明显促进G93A SOD1的降解,但对WT SOD1的蛋白质表达水平无明显促进作用.     

脑蛋白水解物注射液对培养神经胶质抗原2阳性神经祖细胞的影响

背景：脑蛋白水解物注射液能缓解多种神经系统疾病的症状,但其作用机制并不明确。研究显示,脑蛋白水解物注射液在体内和体外实验中有促进神经发生的潜能。 目的：观察脑蛋白水解物注射液对培养的神经胶质抗原2阳性神经祖细胞增殖和分化的影响。 方法：取成年大鼠海马原代及传代培养神经胶质抗原2细胞,以免疫荧光染色法鉴定细胞性质,以乳酸脱氢酶分析法测定细胞活性,以原位缺口末端标记技术(即TUNEL法)观察细胞凋亡,BrdU掺入法鉴定新生细胞。 结果与结论：脑蛋白水解物注射液干预显著减少TUNEL阳性细胞数,并明显增加神经胶质抗原2细胞数和神经胶质抗原2细胞中微管相关蛋白2a+2b、突触蛋白Ⅰ、γ-氨基丁酸和囊泡γ-氨基丁酸转运体表达水平。说明脑蛋白水解物注射液能抑制神经胶质抗原2细胞凋亡,促进神经胶质抗原2细胞增殖,并能促进神经胶质抗原2细胞向神经元(特别是γ-氨基丁酸能抑制性中间神经元)分化。     

糖皮质激素对成体海马神经祖细胞的影响

背景：体内研究显示,高浓度糖皮质激素可抑制大鼠内源性神经前体细胞增殖.而神经胶质抗原2蛋白聚糖阳性神经祖细胞（NG2细胞）是成熟中枢神经系统中最大的增殖细胞群体,具有多分化潜能.目的：观察糖皮质激素对体外培养的成熟大鼠海马由来的NG2细胞生存和增殖的影响.方法：原代及传代培养成年大鼠海马NG2细胞,以0,0.1,1,10,100μmol浓度糖皮质激素类药物地塞米松干预48 h后,采用乳酸脱氢酶分析法测定细胞活性,原位缺口末端标记技术（即TUNEL法）观察细胞凋亡情况,5’-溴脱氧尿嘧啶核苷掺入法鉴定细胞增殖状况.结果与结论：1,10,100μmol浓度地塞米松干预明显减少NG2细胞数,并显著增加TUNEL阳性细胞率,明显减少 BrdU 阳性细胞率.结果可见高浓度糖皮质激素能抑制 NG2细胞分裂增殖,并诱导细胞凋亡,从而明显减少NG2细胞数.     

血小板源生长因子和脑源性神经营养因子促进NG2蛋白聚糖阳性神经祖细胞向神经元分化

目的探讨血小板源生长因子(PDGF)和脑源性神经营养因子(BDNF)对NG2蛋白聚糖阳性神经祖细胞(NG2细胞)分化的作用。方法根据文献方法从成年大鼠海马原代培养NG2细胞,7d后添加10~40ng/m lPDGF和/或BDNF继续培养7d,以免疫荧光双重染色法鉴定细胞性质。结果10ng/m l PDGF和BDNF联合处置明显增加Map2a/b、GAD67和GABA表达水平。结论PDGF和BDNF联合处置促进NG2细胞向神经元(特别是GABA能抑制性中间神经元)分化。     

脑蛋白水解物注射液改善阿尔茨海默病认知功能的机理探究

目的通过研究脑蛋白水解物注射液(CL)对体外培养神经祖细胞(NPCs)增殖和分化的影响,探讨其改善阿尔茨海默病认知功能的机理。方法从成年大鼠脑不同区域原代及传代培养神经祖细胞,以乳酸脱氢酶(LDH)分析法测定细胞活性,以免疫荧光染色法鉴定细胞性质,以蛋白印迹转移(Western blot)法检测蛋白质表达变化。结果CL处置明显增加神经祖细胞数及MAP2a/b、SynapsinⅠ表达水平。结论CL促进神经祖细胞增殖和向神经元分化,可能是其改善阿尔茨海默病认知功能的机理之一。     

从成年大鼠中枢神经系统不同区域分离NG2蛋白聚糖阳性神经祖细胞

目的探索从成年大鼠中枢神经系统(CNS)不同区域是否能分离培养出NG2蛋白聚糖阳性神经祖细胞(NG2细胞)。方法从成年雌性大鼠解剖出CNS的9个不同区域,分别经木瓜蛋白酶消化和Optiprep不连续梯度离心,从离心产生的组织细胞密集带,用含B27添加剂和碱性成纤维细胞生长因子2(FGF2)的NeurobasalA培养液,分离培养出增殖性细胞,再以免疫荧光双重染色法鉴定细胞性质。结果应用上述方法,可从成年大鼠CNS的9个不同区域分离出具神经干细胞(NSCs)潜能的NG2细胞。结论成年大鼠CNS的非神经发生区域同样存在NSCs样细胞,且可通过适当方法体外培养。     

肌萎缩侧索硬化症相关TDP-43降解机制的研究

目的探索肌萎缩侧索硬化症(ALS)相关TDP-43的降解机制。方法用瞬时转染的方法在运动神经元样细胞系NSC-34中过表达野生型(role of wild-type,WT)WT TDP-43,与家族型ALS相关的Q331K TDP-43、M337V TDP-43突变蛋白、TDP-43的两种C末端片段TDP-25和TDP-35,再给予自噬、蛋白酶体通路的特异性诱导剂和阻断剂,通过蛋白印迹方法检测5种TDP-43以及自噬标记物LC3-Ⅱ的表达水平。结果在自噬诱导剂作用下,各组LC3-Ⅱ的表达升高,同时两种突变TDP-43及其C末端片段的表达明显减少,在自噬通路和蛋白酶体阻断剂作用下突变TDP-43及其C末端片段表达水平明显增多,而WT TDP-43的蛋白表达水平仅在蛋白酶体阻断剂作用时增多。结论 WT TDP-43主要经由蛋白酶体途径降解,Q331K TDP-43、M337V TDP-43及其C末端片段经由蛋白酶体途径和自噬两种途径降解。