输卵管积液对体外受精及胚胎移植的影响

目的 分析输卵管积液对体外受精及胚胎移植效果的影响.方法 比较接受体外受精-胚胎移植治疗的输卵管积液患者(45例)及输卵管阻塞但无输卵管积液患者(67例)的治疗结局.结果 输卵管积液组中妊娠率及种植率( 27.67% 及 13.22% )显著性低于无输卵管积液组( 37.31% 及 17.64% ),P<0.05 ;患者是否有输卵管积液对获卵数、受精卵、合子及胚胎质量并无影响.结论 输卵管积液显著性降低体外受精-胚胎移植的成功率.     

B超监视下输卵管通液术的观察

目的：探讨经B超监视下输卵管通液术中有价值的判断指标以及诊断价值。方法：对325例不孕症患者采用B超监视下输卵管通液术，术后随访6—12个月，自然受孕42例，进行腹腔镜检查22例，通过对妊娠者及臆腔镜证实输卵管异常者的分析评价输卵管通液术有价值的判断指标；与腹腔镜对比，评价通液术的诊断价值。结果：B超监视下通液术后自然妊娠42例为输卵管正常组，腹腔镜检查发现有盆腔粘连、输卵管一例或双侧堵塞12例为输卵管异常组，两组术中推注液体的阻力、患者的疼痛感觉、宫旁液流情况、后穹隆积液量差异有统计学意义；输卵管通液术与腹腔镜总符合率为81．8％；结论：B超监视下输卵管通液术中推注液体的阻力、患者的疼痛感觉、宫旁液流情况、后穹隆积液量是有价值的判断指标；B超监视下输卵管通液术是一种简单方便、准确的输卵管检查方法。     

胚胎干细胞分化为胰岛素分泌细胞的诱导条件

目的：探索胚胎干细胞ES—D3分化为胰岛素分泌细胞的诱导条件。方法：ES—D3细胞培养于鼠胚成纤维细胞滋养层上，对数生长期时转入无血清含bFGF的DMEM液中，隔天换液，2周后，用DTZ染色、ELISA、免疫细胞化学染色等方法鉴定诱导生成的胰岛素分泌细胞及其所分泌的胰岛素。结果：ES—D3细胞在不含白血病抑制因子和滋养细胞的无血清培养体系中呈悬浮生长，并于第4天形成拟胚体，加入促分化因子bFGF可使胚胎干细胞向胰岛素分泌细胞分化，诱导生成的胰岛素分泌细胞在培养基中自我组装形成三维立体细胞簇。诱导第17天，DTZ染色发现大量被染成暗红色的胰岛素分泌细胞，免疫细胞化学染色亦证实了胰岛素分泌细胞的存在；同时，用ELISA法检测到胰岛素分泌。随着诱导天数增加，DTZ染色阳性细胞数及胰岛素含量均增加?结论：胚胎干细胞ES—D3在无血清含bFGF培养基中能被诱导分化为胰岛素分泌细胞，且该细胞能够分泌胰岛素。     

人类卵子体外成熟及其胚胎冷冻复苏研究

目的:探讨取卵周期准备、卵泡发育状态、培养液成分对未成熟卵的获取率、体外成熟率、受精率、胚胎质量、胚胎移植后成功率及其胚胎冷冻复苏移植的影响。方法:19例进行卵子体外成熟的不孕不育患者为研究对象。其中1例为自然周期,14例为促性腺激素(Gn)诱导排卵周期,4例常规控制性促排卵(COS)周期;分别以TCM 199或人输卵管液(HTF)为基础培养液,进行卵子体外成熟培养。结果:当取卵时卵泡大小不均一且最大卵泡直径≥12 mm时,获卵率、受精率和胚胎质量下降;TCM 199组优质胚胎的形成率显著高于HTF组(P<0.01)。IVM胚胎经冷冻复苏、胚胎移植能获得与常规IVF周期相似的妊娠成功,出生后代健康、无畸形。结论:在IVM周期取卵时卵泡大小不均一且最大卵泡直径≥12 mm时,将影响胚胎着床率和累积妊娠率。TCM 199优于HTF培养液,能提高未成熟卵体外成熟后受精卵所形成胚胎的发育能力。IVM胚胎经冷冻复苏-胚胎移植能获得与常规IVF周期相似的妊娠成功,出生后代健康、无畸形。     

表皮生长因子对大鼠胚胎神经干细胞增殖分化的影响

目的：建立神经干细胞分离、培养的技术方法，探讨表皮生长因子(EGF)对大鼠胚胎神经干细胞增殖、分化的影响。方法：从大鼠胚胎大脑组织中分离、培养神经干细胞，并用EGF和血清诱导其分化，采用免疫细胞化学方法鉴定神经干细胞增殖和分化的神经样细胞。结果：大鼠胚胎神经干细胞在无细胞因子和血清的培养基中无新生细胞形成，但能在EGF和血清的诱导下产生nestin和BrdU阳性细胞，细胞贴壁后分化为神经元和星形胶质样细胞。结论：EGF和血清能促进神经干细胞增殖，并诱导其向神经元样和星形胶质样细胞分化。     

积液就是积水吗

问：医生好，我因每次月经来时流出来的都是清水，去院做了各种检查，确定是（陶氏腔积液和右输卵管积液），我想问一下积液就是积水吗？还有该病有什么药可用？平时要注意点什么？谢谢了! 答：输卵管积液，也叫输卵管积水，主要见于慢性输卵管炎。引起输卵管积水的原因可能有两方面：（1）发生慢性输9日管炎时，输卵管伞端可以因炎症而粘连闭锁，输卵管管腔内的漏出液、渗出液逐渐积聚而成。     

纹状体组织块诱导胚胎干细胞定向分化的实验研究

目的：探讨由胚胎干细胞向多巴胺能神经元方向分化的最佳诱导条件。方法：本实验采用纹状体组织炔与胚胎干细胞联合培养的方法，通过形态学观察和酪氨酸羟化酶(TH)免疫细胞化学染色对分化细胞进行鉴定。结果：14％左右的胚胎干细胞诱导分化为多巴胺能神经元，而且分化神经元具有投射神经元的典型特征。结论：纹状体组织炔不仅能诱导胚胎干细胞向多巴胺能神经元方向分化，还可影响轴突和／或树突的投射方向和分支模式。     

胚胎干细胞诱导的内皮细胞对自身向成骨细胞分化的影响

目的探讨由胚胎干细胞（embryonic stem cells,ESCs）诱导的内皮细胞（endothelial cells,Ec）与自体胚胎干细胞联合培养时对ESCs成骨作用的影响。方法提取小鼠的胚胎干细胞和胚胎成纤维细胞,诱导胚胎干细胞生成Ec,培养细胞分为四组。A组：胚胎干细胞诱导组;B组：胚胎干细胞诱导组;C组：胚胎干细胞诱导生成的内皮细胞（Ec）诱导组;D组：ESCs和诱导的EC联合培养诱导组。通过干细胞形态的观察、免疫荧光、细胞的增值、碱性磷酸酶以及骨钙素含量的测定从酶学、组织学及生化学等不同方面观测骨髓基质细胞对胚胎干细胞向成骨细胞诱导转化的影响。结果通过细胞免疫荧光染色证实C组培养诱导的细胞为EC。D组ESCs和诱导的Ec联合培养组MTT检测结果各组细胞生长差异没有显著意义（p〉0.05）,骨钙素和碱性磷酸酶测定D组有明显差异高于其他3组（p〈0.05）。结论以胚胎干细胞诱导生成的内皮细胞对胚胎干细胞的成骨有明显的促进作用。     

山莨菪碱对脂多糖结合血管内皮细胞及诱导NO合成的抑制作用

目的：实验观察山莨菪碱对细菌脂多糖（LPS）结合血管内皮细胞膜及诱导NO生成的影响。方法：体外分离培养牛主动脉血管内皮细胞，用免疫组化显色反应显示细菌脂多糖与血管内皮细胞的结合，并通过图像分析对结果进行半定量；用高压液相色谱分析细胞培养液中NO3^-的含量，间接反应NO的生成水平。结果：细胞分组处理，间接法显色后图像分析，结果表明山莨菪碱组的平均灰度值明显低于LPS组（P＜0.05)；并且对细胞培养液中NO3^-的检测显示山莨菪碱组的浓度明显低于LPS组（P＜0.05)。结论：山莨菪碱能够抑制LPS结合血管内皮细胞，并且能够抑制LPS对NO合成的诱导作用。     

彩色多普勒超声在输卵管积液患者子宫内膜区血流状态评价中的应用

输卵管积液是不孕症常见原因之一,除了对受精通道的影响外,对受精卵的成功着床也有一定的影响,其对妊娠结局影响的确切机制目前意见不一。本研究使用经阴道彩色多普勒超声评价输卵管积液患者的子宫内膜区血流的分布状态,观察积液患者子宫动脉血流阻力指数（RI）,以探讨输卵管积液对子宫内膜血流灌注的影响,决定是否对拟行体外受精胚胎移植的输卵管积液患者进行临床治疗,以解除输卵管积水对胚胎种植的影响。     

应用人黄素化颗粒细胞条件培养液行人类胚胎体外培养

目的 研究卵泡壁颗粒细胞条件培养液在人类胚胎体外发育中的作用。方法 将卵泡液中回收的卵泡壁颗粒细胞，分别置于添加0．1％聚乙烯醇(PVA)和添加10％胎牛血清(FCS)的TCM-199培养系统中进行体外培养。结果 在无蛋白培养系统中，颗粒细胞能够缓慢生长，第三～五天达到生长高峰，群体倍增时间发生在培养的第二～三天，培养第一～五天可分泌雌二醇到培养液中(3．22～4．65pmol／ml)。在有蛋白培养系统中，颗粒细胞生长速度明显高于无蛋白的培养系统。使用颗粒细胞条件培养液，获得的囊胚在囊胚腔的大小和细胞数量上，均优于商品化囊胚培养液。结论颗粒细胞条件培养液有利于人类4-细胞以后胚胎的发育。     

输卵管积水不同处理方式对冷冻胚胎移植临床结局的影响

目的 探讨拟行冷冻胚胎移植的输卵管积水患者两种不同积水处理方式对助孕结局的影响.方法 回顾分析2014年6月至2016月6月在四川省医学科学院·四川省人民医院拟行冷冻胚胎移植合并输卵管积水的132例患者的临床资料.根据不同积水处理方式分为腹腔镜组(n=64)及穿刺组(n=68),比较两组患者一般情况和助孕结局.结果 两组患者一般情况差异无统计学意义(P>0.05),临床妊娠率(59.37%vs 44.12%)与胚胎着床率(30.15%vs 21.77)腹腔镜组高于穿刺组,但差异无统计学意义(P>0.05),早期流产率穿刺组高于腹腔镜组(20.00%vs 2.63%),差异有统计学意义(P<0.05).结论 若患者有优质胚胎,暂不考虑再次取卵的情况下,输卵管结扎/切除手术不失为拟行冷冻胚胎移植的输卵管积水患者较好的选择.     

腹腔镜手术结合中药灌肠治疗输卵管积水102例分析

目的：探讨腹腔镜手术结合中药治疗提高输卵管积水的治愈率。方法：回顾性分析采用腹腔镜微创技术、TDP理疗及中药灌肠综合治疗102例输卵管积水患者的临床资料。结果：102例中治愈88例,占86.27%;有效10例,占9.80%;无效4例,占3.93%。结论：腹腔镜手术具有微创、粘连少等优点,TDP下腹部照射、中药灌肠可以改变盆腔局部环境,利于输卵管功能恢复。三者结合是治疗输卵管积水安全、有效的方法。     

输卵管积水在不孕症治疗中的处理

目的：探讨输卵管重度积水的临床治疗选择。方法：回顾2005年5月至2010年12月输卵管伞部积水直径〉3cm施行了腹腔镜手术共850例,其中剔除合并子宫肌瘤、多囊卵巢综合征、子宫内膜异位症等干扰因素病例,仅输卵管积水、盆腔粘连患者553例。根据术中情况及患者要求,行输卵管复通、伞部成形手术的患者363例,行伞部成形、输卵管结扎190例。临床资料进行总结分析。结果：随访时间为3-24个月,平均13.5月,术后宫内妊娠率48%至38%。结论：输卵管分期III期以上的患者,其术后自然受孕率极低,复发率较高,可建议行体外受精或胚胎移植治疗。通过手术复通,并在术后加强维持其通畅及功能的治疗,有助于提高自然受孕率、体外受精或胚胎移植的成功。     

C57BL/6J小鼠冻融IVF原核胚用于Cas9显微注射探讨

目的探讨小鼠体外受精(IVF)冻融后用于Cas9注射的可行性。方法新鲜C57BL/6J小鼠卵子IVF后采用冻存管法(EFS20/40)冷冻原核胚(单细胞胚)和2细胞胚胎,次日复苏后培养。比较冻融原核胚和2细胞胚胎的回收率及成活率。选取部分冻融原核胚与新鲜原核胚同时进行Cas9和稀释液胞质注射并培养至2细胞,分别比较注射后的存活率及2细胞发育率。结果冻融后的B6小鼠原核胚的回收率为92.5%、成活率为92.8%,2细胞胚的回收率为90.5%、成活率95.8%,两组数据差异无显著性(P0.05)。新鲜原核胚Cas9注射后的存活率为92.7%,空白组注射组为97.5%,冻融原核胚Cas9注射后的存活率为82.6%,空白组为92%,冻融组Cas9注射与各组差异有显著性(P0.05),其它各组差异无显著性(P0.05)。注射后的2细胞胚发育率差异无显著性(P0.05)。结论冻融原核胚可用于Cas9显微注射。     

冻融人早孕蜕膜单层细胞对小鼠胚胎发育的影响

目的　探讨冻融的人早孕蜕膜单层细胞对小鼠胚胎发育的影响。方法　蜕膜单层细胞解冻后接种获得冻融蜕膜单层细胞;观察昆明白小鼠单细胞受精卵与传代的、冻融的人早孕蜕膜单层细胞共培养 (A、B组)及仅用培养液培养(C组)的胚胎发育情况。分析A、B组与C组各期鼠胚的发育情况及 8 细胞期A类胚胎形成情况。结果　A、B、C组的2 细胞期形成率差异无显著性,A组在 4 细胞形成率上高于B、C组。A、B组 8 细胞期、桑椹期、早期囊胚形成率和囊胚孵出率高于C组(P<0 05)。而A、B组之间差异无显著性。A、B组在 8 细胞阶段A、B类胚胎形成率与C组相比,差异有显著性(P<0 05)。同样A、B组之间差异无显著性。共培养 20d的培养液经检查,细菌及真菌均阴性。结论　冻融的人蜕膜单层细胞与传代细胞一样在小鼠胚胎的发育中起到了促进作用,该结果说明了人胚胎与其冻融的自体子宫增殖晚期-分泌早期的内膜单层细胞共培养的可行性。     

氨基酸浓度对昆明小鼠胚胎体外发育的影响

目的探讨培养液中氨基酸成分对植入前昆明小白鼠胚胎发育的影响,摸索植入前胚胎体外培养氨基酸的最佳浓度。方法从超排昆明小鼠输卵管中取出的630枚受精卵均分为7组,分别在经添加不同浓度Eagle's氨基酸的去牛血清白蛋白KSOM培养液(mKSOM、mKSOM 1/16AA、mKSOM 1/8AA、mKSOM 1/4AA、mKSOM 1/2AA、mKSOM AA、mKSOM 2AA)中培养,对比观察各组胚胎体外发育的过程。用卡方检验分析添加各浓度氨基酸的培养液培养效率的差别,并将8细胞发育率和囊胚发育率分别与相应的氨基酸浓度进行曲线拟合分析。结果与未添加氨基酸组对比,添加氨基酸组胚胎发育率高,8细胞胚和囊胚的形成率与培养液中氨基酸的浓度关系均符合三次模型,在氨基酸为1/2浓度时8细胞胚和囊胚的形成率均达到最高。结论氨基酸对胚胎的体外发育有促进作用,但含有高浓度氨基酸的培养液培养效果反而有所下降,可能是由于高浓度的氨基酸影响胚胎的代谢和渗透压的改变,且氨基酸分解及胚胎代谢所产生的铵对胚胎有毒性作用。     

TGF-β1改善体外培养小鼠胚胎种植率及其作用机制的研究

目的 探讨TGF-β1在体外对小鼠胚胎发育及胚胎种植的影响及其作用机制.方法 ①收集小鼠2-细胞期胚胎,在含不同剂量TGF-β1的M16培养液中进行体外培养,观察胚胎发育情况,并进行胚胎移植,观察着床率;②测定移植后小鼠外周血及胚胎种植部位母胎界面IL-10/INF-γ水平.结果 ①1 ng/mL和10 ng/mL TGF-β1能提高2-细胞期胚胎体外发育速率、质量和胚胎着床率.其中TGF-β1 10 ng/mL时作用最显著,TGF-β1浓度过高对体外胚胎发育不利;②M16+TGF-β1 10 ng/mL组体外培养囊胚移植后母胎界面INF-γ低于M16组,差异有统计学意义[(30.89±11.31) pg/mL vs. (43.23±18.09) pg/mL,P<0.05].两组间IL-10水平无明显差异.结论 ①小鼠胚胎体外培养基中加入适宜浓度TGF-β1可提高2-细胞期胚胎体外发育速率、质量和胚胎着床率;②TGF-β1可能通过促进体外胚胎发育速率和质量,改善胚胎和内膜发育同步性,促进母胎界面Th1/Th2平衡向Th2偏移而促进胚胎着床.     

昆明小鼠体外受精胚冷冻保存的研究

在PBS 20?S 0.5mol/L蔗糖中加2.0和3.0mol/L甘油组的胚胎发育率分别为51.4%和44.4%,冷冻效果明显好于其它浓度甘油;在PBS 20?S十2.0mol/L甘油中,加0.5mol/L蔗糖组的胚胎发育率为47.7%,冷冻效果好于其它浓度蔗糖;慢速降温冷冻组的胚胎发育率为48.8%,效果明显好于快速冷冻法;在各期胚胎冷冻后的发育率中,2细胞胚最低,桑椹胚的存活率明显高于4细胞胚和早期囊胚;冷冻保存后体外受精胚的发育率显著低于体内受精胚:112枚经冷冻保存的体外受精胚移植给受体鼠,2/9妊娠。     

卵巢过度刺激综合征患者VEGF和NO的检测及临床意义

目的检测卵巢过度刺激综合征（OHSS）患者血管内皮生长因子（VEGF）和一氧化氮（NO）的含量,并探讨其临床意义。方法选取接受体外、受精-胚胎移植术（IVF-ET）或单精子卵浆内注射的39例不孕妇女,OHSS患者22例（观察组）,余17例为对照组。采用双抗体夹心ELISA法及硝酸盐还原酶法检测两组患者取卵日的血清及卵泡液中VEGF、NO含量;以免疫化学发光分析法测定月经周期第3天人体催乳素（PRL）、卵泡刺激素（FSH）、黄体生成素（LH）、睾酮（T）、雌二醇（E2）含量及人绒毛膜促性腺激素（hCG）注射日两组患者的血清LH和E2含量;比较两组患者的Gn用药量和用药时间、获卵数、成熟卵细胞数、受精率、卵裂率、移植胚胎数、冷冻胚胎数及妊娠率。结果（1）观察组患者血清VEGF、NO及卵泡液VEGF、NO含量均明显高于对照组（均P〈0.05）,两组患者卵泡液VEGF、NO含量均显著高于自身血清VEGF、NO含量（均P〈0.01）。（2）观察组多胎妊娠1例（3胎）,对照组生化妊娠1例,两组均未发现异位妊娠者。观察组临床妊娠率为72.73％（16／22）,对照组为41.18％（7／17）,差异有统计学意义（P〈0.05）。（3）两组患者在Gn用药时间和用药量、hCG用量、hCG注射日E2含量、获9月数、成熟卵子数、受精卵数、卵裂数、卵裂率、受精率、胚胎移植数及冷冻胚胎数的差异均无统计学意义（均P〉0.05）。结论OHSS患者血清及卵泡液VEGF、NO含量明显升高,提示VEGF和NO在OHSS的发生中起着重要作用：OHSS的发生与临床妊娠率有关,提示妊娠是OHSS发生的高危因素。