酸枣仁汤含药血清对皮质酮损伤的PC12细胞[Ca~(2+)]i、CaM的影响

目的:观察酸枣仁汤含药血清对皮质酮损伤的PC12细胞[Ca2+]i、CaM的影响。方法:以高浓度皮质酮诱导PC12细胞凋亡模拟焦虑症神经细胞损伤状态,通过激光共聚焦显微镜法检测[Ca2+]i浓度、细胞化学染色法测定CaM的表达,探讨酸枣仁汤含药血清对皮质酮诱导PC12细胞凋亡的钙信号转导通路的影响。结果:与空白对照组比较,皮质酮组细胞内[Ca2+]i浓度显著升高;与皮质酮+正常动物血清组比较,皮质酮+酸枣仁汤含药血清组细胞内[Ca2+]i浓度显著降低,皮质酮+安定含药血清组、皮质酮+酸枣仁汤含药血清组细胞CaM表达明显下降。结论:胞内钙超载可能是皮质酮诱导PC12细胞凋亡的主要原因之一,酸枣仁汤含药血清可能通过减轻胞内钙超载,减少Ca2+-CaM复合物的产生,拮抗皮质酮诱导的PC12细胞凋亡。     

酸枣仁汤含药血清对皮质酮损伤的PCI2细胞[Ca2+]i、CaM的影响

目的:观察酸枣仁汤含药血清对皮质酮损伤的PC12细胞[Ca2+]i、CaM的影响.方法:以高浓度皮质酮诱导PC12细胞凋亡模拟焦虑症神经细胞损伤状态.通过激光共聚焦显微镜法检测[Ca2+]i浓度、细胞化学染色法测定CaM的表达,探讨酸枣仁汤含药血清对皮质酮诱导PC12细胞凋亡的钙信号转导通路的影响.结果:与空白对照组比较,皮质酮组细胞内[Ca2+]i浓度显著升高;与皮质酮+正常动物血清组比较,皮质酮+酸枣仁汤含药血清组细胞内[Ca2+i浓度显著降低,皮质酮+安定含药血清组'皮质酮+酸枣仁汤含药血清组细胞CaM表达明显下降.结论:胞内钙超载可能是皮质酮诱导PC12细胞凋亡的主要原因之一,酸枣仁汤含药血清可能通过减轻胞内钙超载,减少Ca2+-CaM复合物的产生,拮抗皮质酮诱导的PC12细胞凋亡.     

氯胺酮对谷氨酸诱导大鼠脊髓背角星形胶质细胞内游离钙浓度的影响

目的:观察氯胺酮对谷氨酸诱导大鼠脊髓背角星形胶质细胞凋亡和胞内游离钙浓度([Ca2+]i)变化的影响。方法:取新生2~3 d W istar大鼠T11~L6脊髓背角星形胶质细胞,原代纯化培养。将细胞随机分为:对照组(C组),谷氨酸组(G组),氯胺酮组(K组),余下3组为谷氨酸+不同浓度氯胺酮组(标记为GK1~GK3组),培养30 m in后取各细胞检测[Ca2+]i,再培养48 h检测星形胶质细胞凋亡率。结果:与C组比较,G组细胞发生了大量凋亡(P<0.01),[Ca2+]i显著升高(P<0.01);与G组比较,GK2组细胞凋亡率和[Ca2+]i明显降低(P<0.05),GK3组细胞凋亡率和[Ca2+]i显著降低(P<0.01)。结论:适量氯胺酮通过抑制细胞内钙超载显著抑制了谷氨酸诱导星形胶质细胞凋亡。     

尼卡地平对谷氨酸诱导大鼠海马星形胶质细胞损伤的影响

目的:观察不同浓度尼卡地平对谷氨酸诱导大鼠海马星形胶质细胞损伤的影响。方法:取新生2～3 dSD大鼠海马星形胶质细胞,原代纯化培养3周。将细胞随机分6组(n=9):正常对照组(C组)加入Hanks液;谷氨酸组(G组)加入谷氨酸至终浓度500μmol/L;尼卡地平组(N组)加入尼卡地平至终浓度10μmol/L;GN1、GN2、GN3组先加入谷氨酸至终浓度500μmol/L,10 m in后分别加入尼卡地平至终浓度1、5、10μmol/L。培养30 m in后检测海马星形胶质细胞内游离钙浓度([Ca2+]i),继续培养24 h检测各组细胞凋亡及丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽(GSH)活性,免疫荧光细胞化学法检测胶质纤维酸性蛋白(GFAP)表达并观察细胞形态学的改变。结果:与C组比较,G组和GN1组细胞大量凋亡,未凋亡的星形胶质细胞增生肥大;GFAP表达、[Ca2+]i及MDA含量升高,SOD和GSH活性均降低(P<0.01);G、GN1组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。与G组比较,GN2组和GN3组凋亡明显减少,细胞形态正常;GFAP表达、[Ca2+]i及MDA含量降低,SOD和GSH活性升高。结论:尼卡地平通过抑制细胞内钙超载和脂质过氧化反应,清除自由基而抑制了谷氨酸诱导海马星形胶质细胞损伤,其抑制程度与剂量有关。     

依托咪酯对过氧化氢损伤PC12细胞株的保护作用

目的 研究依托咪酯对过氧化氢损伤神经元样嗜铬细胞瘤细胞株(PC12)的游离Ca2+作用.方法 PC12细胞株接种于6孔细胞培养板,随机分为损伤组(I组)和依托咪酯3 μmol/L组(E1组)、6 μmol/L组(E2组)和15 μmol/L组(E3组).分别加入含标记Ca2+ 的荧光染色剂Fluo3 10 μmol/L的培养基,37 ℃孵育30 min,置入激光共聚焦显微镜扫描仪连续扫描,并于开始连续扫描2次后加入100 μmol/L H2O2,动态观察各组细胞内游离Ca2+浓度([Ca2+]i)的变化.结果 I组加入H2O2后,90%的细胞立即有反应,细胞[Ca2+]i荧光密度即开始增高(P<0.05),并在10 s后呈现明显变化(P<0.01), 80 s达到峰值并呈持续稳定状态.依托咪酯各浓度组在加入H2O2后约10%细胞有反应,但其细胞[Ca2+]i荧光密度呈现平稳波动.E1和E2组在50 s后,细胞[Ca2+]i荧光密度开始下降(P<0.05),但不呈继续降低趋势.结论 依托咪酯通过抑制H2O2损伤引起的神经细胞内[Ca2+]i持续增高,而发挥其神经保护作用.     

丹参体外诱导人肝癌细胞HepG2凋亡的初步研究

目的观察不同浓度丹参血清对HepG2细胞Caspase-3蛋白表达的影响,探讨该药诱导HepG2细胞凋亡的可能机制。方法不同浓度的丹参含药血清作用低分化人肝癌HepG2细胞,运用蛋白免疫印迹方法(Western Blot)检测各组HepG2细胞Caspase-3表达;酶联免疫吸附实验(ELISA)检测各组细胞TGF-β1分泌水平;钙影像(Calcium Imaging)技术检测各组细胞内Ca2+浓度变化。结果与正常对照组比较,10倍浓度组能明显增加HepG2细胞Caspase-3蛋白表达(P0.05),同时,ELISA检测也显示10倍浓度组HepG2细胞TGF-β1分泌减少(P0.05),且细胞内Ca2+浓度明显降低(P0.05)。结论丹参能够诱导体外培养的HepG2细胞凋亡,Caspase-3蛋白表达明显增加,其促凋亡作用可能是通过降低细胞内Ca2+浓度从而阻断TGF-β1信号通路实现的。     

酸枣仁汤含药血清对皮质酮诱导PC12细胞损伤的保护作用

目的:研究酸枣仁汤(Suan zao ren tang,SZRT)含药血清对皮质酮(CORT)诱导PC12细胞损伤的保护作用。方法:运用MTT法检测细胞增殖率,流式细胞仪法、Giemsa染色法测定细胞凋亡率和细胞DNA周期拟合以及凋亡细胞的显微形态学改变。结果:CORT组细胞增殖率显著下降,凋亡率明显增高,光镜可见明显凋亡形态改变及多个凋亡小体;SZRT含药血清组细胞增殖率升高,凋亡率降低,细胞形态完整,偶见凋亡小体。结论:CORT可引起PC12细胞增殖率下降并伴随细胞凋亡,SZRT含药血清可保护CORT诱导的PC12细胞损伤,提高其存活率,对抗凋亡。     

白藜芦醇通过Ca2+/Caspase-3途径减轻内质网应激诱导的神经细胞凋亡

目的：研究白藜芦醇对内质网应激诱导神经细胞凋亡的影响及机制。方法：采用内质网应激诱导剂毒胡萝卜素(thapsigargin,TG)处理PC12细胞,构建内质网应激模型。免疫印迹法检测GRP78蛋白表达,激光共聚焦和Fluo-3/AM检测胞浆钙离子浓度,比色法测定Caspase-3活性,流式细胞术检测细胞凋亡率。结果：白藜芦醇减轻内质网应激诱导剂TG引起的GRP78高表达,阻止内质网应激诱导的钙超载。白藜芦醇和钙离子螯合剂BAPTA均抑制内质网应激诱导的Caspase-3活化和神经细胞凋亡。结论：白藜芦醇可能通过Ca²⁺/Caspase-3途径抑制内质网应激诱导的神经细胞凋亡。     

烧伤血清对大鼠腹腔巨噬细胞内游离钙浓度及其产生NO的影响

目的:观察烧伤血清对分离的大鼠腹腔巨噬细胞内游离钙离子浓度([Ca2+]i)和产生NO的影响.方法:收集腹腔巨噬细胞,用Fura-2/AM作为细胞内游离钙离子指示剂测定[Ca2+]i,用烧伤血清刺激体外的腹腔巨噬细胞即刻进行[Ca2+]i的测定;用同浓度的烧伤血清刺激培养的腹腔巨噬细胞,测定上清NO稳定的代谢产物[NO2+NO3-]的浓度.结果:烧伤血清能显著地促进巨噬细胞[Ca2+]i的增高,以烧伤后6 h血清的作用最为明显,可达正常对照组的9倍,维拉帕米可部分抑制其作用.烧伤血清对腹腔巨噬细胞NO的产生有明显的抑制作用,也以6 h烧伤血清为最明显.结论:烧伤血清能显著地升高腹腔巨噬细胞[Ca2+]i,而NO的产生被明显地抑制.细胞内钙超载和NO产生减少可能是烧伤后早期巨噬细胞免疫功能损伤主要因素之一.     

重组人内抑素对兔耳增生性瘢痕成纤维细胞内钙离子浓度的影响

目的通过探讨重组人内抑素（rhEndostatin）促进兔耳增生性瘢痕成纤维细胞（HSFs）凋亡的部分机制,为临床上药物治疗增生性瘢痕（HS）提供实验依据。方法取新西兰大耳兔6只制备瘢痕模型。以HSFs为研究对象,应用激光共聚焦显微镜（CLSM）结合Fluo-4/AM（Ca2+荧光指示剂）检测在Hanks与D-Hanks液中（有、无细胞外钙）rhEndostatin（100 μg/mL）对HSFs胞内Ca2+浓度（[Ca2+]i）的影响。结果当细胞外液为Hanks液时,rhEndostatin（100 μg/mL）可使HSF胞质内[Ca2+]i水平持续增加,当持续10 s给予rhEndostatin处理后,HSFs胞内[Ca2+]i可迅速增加达峰顶再缓慢下降,在停止药物处理后,HSFs胞内[Ca2+]i继续下降,停止处理约50 s后,胞内[Ca2+]i尚未至基线水平;而当细胞处于D-Hanks液中时,rhEndostatin对HSFs胞质内[Ca2+]i无明显影响。结论rhEndostatin可通过干扰HSFs胞内钙离子稳态,推动胞外Ca2+内流导致胞内钙超载来诱导HSFs凋亡。     

丹酚酸B对缺糖诱导的PC12细胞凋亡的保护作用

目的研究丹酚酸B（Salvianolic acid B,Sal B）对缺糖诱导的PC12细胞凋亡的保护作用。方法以无糖培养的PC12细胞建立模型,采用甲基噻唑基四唑检测细胞存活率;采用流式细胞仪检测碘化丙啶单染的PC12细胞凋亡;Western blotting法检测细胞内Caspase-3蛋白的表达。结果 Sal B可明显抑制缺糖对PC12细胞诱导的损伤,在0.1-100μmol/L浓度范围内呈一定的量效关系;流式细胞术显示Sal B显著降低缺糖诱导的PC12细胞凋亡;Western blotting结果显示Sal B显著降低缺糖诱导的活性Caspase-3蛋白的表达。结论在0.1-100μmol/L浓度范围内,Sal B对缺糖损伤的PC12细胞具有保护作用,其保护机制可能与抑制Caspase-3表达有关。     

青蒿琥酯对人前列腺癌PC-3细胞凋亡及细胞

目的 研究青蒿琥酯(artesunate,ART)对人前列腺癌PC-3细胞凋亡以及细胞内游离Ca2+ 浓度（[Ca2+]i）的影响。方法 ART处理PC-3细胞后,透射电镜观察细胞超微结构变化,流式细胞术检测细胞凋亡率和细胞周期分布,激光共聚焦扫描显微镜检测PC-3细胞[Ca2+]i变化。结果 ART诱导PC-3细胞发生典型的凋亡形态学变化和G2/M期阻滞;ART 100,10,1 μmol∕L组及阳性对照组的凋亡率分别是8.9%,10.7%,21.0%, 24.6%均高于阴性对照组（P<0.05）。ART作用PC-3细胞后,[Ca2+]i在15～30 min内显著升高,0.5～1 h 维持在较高水平,4～24 h 后降到阴性对照组水平。结论 青蒿琥酯有诱导人前列腺癌PC-3细胞凋亡和周期阻滞的作用,上调[Ca2+]i可能在其抗肿瘤机制中起重要作用。 【关键词】 青蒿琥酯 前列腺肿瘤 细胞凋亡     

青紫薯色素对β淀粉样肽诱导神经细胞毒性的作用

①目的探讨青紫薯色素对口淀粉样肽诱导神经细胞毒性的保护作用及其机制。②方法建立β淀粉样肽诱导的PC-12神经细胞毒性病理模型，MTT法测定青紫薯色素对PC-12神经细胞增殖活性的影响，流式细胞仪检测PC-12神经细胞的凋亡率、线粒体膜电位、细胞内Ca^2＋浓度和Caspase-3的活性。③结果青紫薯色素可以剂量依赖性地提高PC-12细胞的增殖活性，降低β淀粉样肽诱导的PC-12细胞凋亡率，减轻线粒体膜的损伤，降低细胞内钙离子的浓度，抑制Caspase-3的活化。④结论青紫薯色素通过抑制Caspase-3的活化，减轻线粒体膜的损伤，降低细胞内Ca^2＋的浓度，起到减轻β淀粉样肽诱导的PC-12细胞损伤的作用。     

三氧化二砷对人肺腺癌Anip973细胞内[Ca2+]i的影响

目的研究三氧化二砷(As2O3)对人肺腺癌Anip973细胞内游离[Ca2+]i的影响.方法培养人肺腺癌Anip973细胞,用激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)观察As2O3对人肺腺癌Anip973细胞内游离[Ca2+]i的影响;用生长曲线法测药物对肿瘤细胞增殖的影响.结果①LSCM显示As2O3 作用后的人肺腺癌细胞Anip973细胞内[Ca2+]i显著升高(P<0.001).②As2O3 对人肺腺癌细胞株Anip973细胞内[Ca2+]i升高作用具有剂量依赖性.③As2O3 能明显抑制人肺腺癌Anip973细胞的增殖.结论 As2O3 可能是通过升高人肺腺癌细胞内[Ca2+]i 来启动细胞凋亡机制,诱导肺癌细胞凋亡,从而抑制其增殖.     

β-榄香烯诱导结肠癌Lovo细胞凋亡的作用

目的　研究 β 榄香烯诱导结肠癌细胞的凋亡作用 ,探讨其治疗结肠癌的作用机制。 方法　选择 β 榄香烯诱导结肠癌细胞凋亡 ,采用光镜、琼脂糖凝胶电泳和流式细胞仪检测凋亡及细胞周期。Fura 2荧光复合技术测结肠癌细胞内 [Ca2 +]i浓度。结果　β 榄香烯对结肠癌细胞增殖具有很强的抑制作用。β 榄香烯能够诱导结肠癌凋亡。在结肠癌细胞凋亡过程中 ,胞内 [Ca2 +]i明显升高 ,以凋亡早期更为明显。 1h时为 ( 2 5 6.18± 8.85 )nmol/L ,明显高于对照组 ( 12 7.81± 5 .18)nmol/L(P <0 .0 1)。结论　β 榄香烯对结肠癌细胞生长具有很强的抑制作用 ,与诱导凋亡有关。Ca2 +在 β 榄香烯诱导结肠癌细胞凋亡过程中有一定的作用     

人参皂苷Rg1对H2O2诱导的HT22细胞凋亡及胞内Ca2+变化的影响

目的 研究人参皂苷Rg1对H2O2诱导的HT22细胞凋亡及胞内Ca2+浓度变化的影响.方法 以0、6.25、12.5、25、50、100μg/L人参皂苷Rg1预处理细胞24 h,采用Ca2+荧光染料探针Fluo-3/AM负载细胞1 h后,50 mmol/L H2O2刺激细胞,多功能酶标仪测定荧光强度,激光共聚焦显微镜实时监测[Ca2+]i变化,Hoechst 33258染色检测细胞凋亡.结果 H2O2可诱导细胞内Ca2+浓度增加(P<0.01),并增加细胞凋亡率(P<0.01).不同浓度人参皂苷Rg1可呈剂量依赖性的抑制H2O2诱导的HT22[Ca2+]i增加(P<0.01),抑制细胞凋亡(P<0.01),以50μg/L的作用为最强(P<0.01).结论 人参皂苷Rg1可通过降低H2O2诱导的HT22细胞内Ca2+水平的升高,抑制氧化应激引起的细胞凋亡.     

Na+/H+交换体阻滞剂在培养乳鼠心肌细胞/复氧损伤中的保护作用及其机制

目的:探讨在缺氧/复氧损伤中Na+/H+交换体阻滞剂在不同时相用药的心肌细胞保护作用及其机制。方法:应用乳鼠心肌细胞建立心肌缺血-再灌注(I/R)损伤模型,实验分为对照组、缺氧/复氧全程给药组(EIPA-I组)、复氧前给药1组(EIPA-R1组)和复氧前给药2组(EIPA-R2组)进行缺氧/复氧处理,动态检测单个心肌细胞在缺氧/复氧时细胞胞质Ca2+浓度(即[Ca2+]i)的变化及细胞挛缩程度,并观察细胞的存活率。结果:EIPA-I组和EIPA-R2组显著抑制了[Ca2+]i上升及细胞的挛缩,并提高了细胞存活率。结论:在复氧前给予增大剂量的EIPA与缺氧时常规剂量用药同样有效地抑制复氧期Na+/H+的交换,减轻细胞内钙超载,抑制细胞的挛缩,提高心肌细胞的存活率。     

丹参素对缺氧/缺糖损伤神经细胞线粒体的保护作用

目的观察丹参素对SH-SY5Y细胞缺氧/缺糖损伤时胞浆内[Ca2 ]i、细胞凋亡率、细胞活性和线粒体膜电位的变化,探讨其对神经细胞线粒体的保护作用及其可能的机理.方法应用细胞培养、四唑盐比色实验(MTT)检测细胞活力,流式细胞术检测细胞内[Ca2 ]i、细胞凋亡百分率和线粒体膜电位.结果 SH-SY5Y细胞缺氧/缺糖损伤2 h时,细胞内[Ca2 ]i明显增加,为8.46 nmol/L(P<0.01),细胞凋亡率明显增高,为18.59% (P<0.01),细胞内[Ca2 ]i的浓度4 h时达到高峰,为9.89 nmol/L(P<0.01),而后呈下降趋势,细胞凋亡率随缺氧/缺糖损伤时间的延长而明显增高12 h时达到45.91%,细胞经缺氧/缺糖处理2 h后,线粒体膜电位和细胞活性分别降低29.17%(P<0.01)、38.80%(P<0.01),随着缺氧/缺糖时间的延长线粒体膜电位和细胞活性进一步下降, 12 h时分别降低56.72%(P<0.01)、63.58%(P<0.01),丹参素能显著降低细胞内[Ca2 ]i,抑制细胞凋亡的发生,提高细胞活性和线粒体膜电位,与缺氧/缺糖组相比均有显著性差异(P<0.05,P<0.01).结论丹参素可抑制缺氧/缺糖损伤所致的线粒体膜电位的降低,从而具有稳定线粒体膜电位的作用,抑制细胞凋亡的发生,这种作用可能与其能抑制神经细胞内钙超载有关.     

LTD4诱导大鼠气道平滑肌细胞收缩的机制

目的探讨LTD4对气道平滑肌细胞(ASMC)收缩的机制.方法以Fluo-3/AM作为细胞内游离Ca2+示踪剂,通过激光共聚焦显微镜观察LTD4对原代大鼠ASMC细胞内钙离子浓度([Ca2+]i)及细胞收缩的影响;观察胞外Ca2+、G蛋白、蛋白激酶C(PKC)、丝裂素活化蛋白(MAPK)在LTD4生理效应中的作用. 结果LTD4刺激后,[Ca2+]i上升前有一个潜伏期,随后缓慢增加.随着LTD4浓度上升,潜伏期逐渐缩短(P＜0.05).在无钙溶液中,LTD4诱导的[Ca2+]i上升明显抑制(P＜0.01).随LTD4浓度上升,ASMC收缩程度也有增强趋势(P＞0.05).LTD4诱导的[Ca2+]i上升与细胞收缩程度显著相关(P＜0.01).PTX对LTD4诱导ASMC[Ca2+]i上升和收缩均有明显抑制作用.Staurosporine对[Ca2+]i上升无明显影响,但对收缩有明显抑制作用.PD098059对[Ca2+]i上升无明显影响,对收缩有部分抑制.结论在大鼠ASMC中,LTD4诱导[Ca2+]i缓慢上升,并有潜伏期.[Ca2+]i在LTD4诱导ASMC收缩中起关键作用.G蛋白、PKC、MAPK在LTD4生理效应中起重要作用.     

LTD4诱导大鼠气道平滑肌细胞收缩的机制

目的探讨LTD4对气道平滑肌细胞（ASMC）收缩的机制。方法 以Fluo-3/AM作为细胞内游离Ca2+示踪剂,通过激光共聚焦显微镜观察LTD4对原代大鼠ASMC细胞内钙离子浓度（[Ca2+]i）及细胞收缩的影响;观察胞外Ca2+、G蛋白。蛋白激酶C（PKC）、丝裂素活化蛋白（MAPK）在LTD4生理效应中的作用。结果　LTD4刺激后,[Ca2+]i上升前有一个潜伏期,随后缓慢增加。随着LTD4浓度上升,潜伏期逐渐缩短（P<0.05）。在无钙溶液中,LTDA诱导的[Ca2+]i上升明显抑制（P<0.01）。随LTD4浓度上升,ASMC收缩程度也有增强趋势（P>0.05）。LTD4诱导的[Ca2+]i上升与细胞收缩程度显著相关（P<0.01）。PTX对LTD4诱导ASMC[Ca2+]i上升和收缩均有明显抑制作用。Staurosporine对[Ca2+]i上升无明显影响,但对收缩有明显抑制作用。PD098059对[Ca2+]i上升元明显影响,对收缩有部分抑制。结论 在大鼠ASMC中,LTD4诱导[Ca2+]i缓慢上升,并有潜伏期。[Ca2+]i在LTD4诱导ASMC收缩中起关键作用。G蛋白、PKC、MAPK在LTD4生理效应中起重要作用。