高校科研实验室的建设与管理探讨

对高校科研实验室的建设与管理的3个方面进行了论述。包括高校科研实验室建设中科研团队建设;改变实验室定位,提高仪器设备利用率;建设开放型实验室,加强交流合作等。认为高校科研实验室的建设必须与时俱进,追求创新,加大交流合作,努力将科研实验室建设成高度信息化、智能化的产、学、研相结合的科研基地。     

高效液相色谱串联质谱法测定当归芍药散提取物和含药血清中3种活性成分含量

目的建立测定当归芍药散提取物和含药血清中3种活性成分含量的高效液相色谱串联质谱方法。方法药物提取物样品经甲醇-水(1∶1,V/V)溶液溶解、离心、净化后过0.45μm滤膜,血清样品适当稀释、过膜后用高效液相色谱串联质谱法测定。色谱柱为Agilent Poroshell 120 EC-C18(100 mm×2.1 mm,2.7μm),茯苓酸流动相为乙腈-0.5mmol/L乙酸铵水溶液(9∶1,V/V),阿魏酸和芍药苷以乙腈-5mmol/L乙酸铵水溶液为流动相梯度洗脱,流速0.4 mL/min,柱温35℃,进样量5μL,采用电喷雾离子源,负离子模式,干燥气温度350℃,干燥气流速12L/min,检测方式为多反应监测。结果当归芍药散中阿魏酸、芍药苷和茯苓酸分别在0.1~20.0μg/mL、1~100μg/mL、0.1~20.0μg/mL范围内线性关系良好,加样回收率高,重复性好。当归芍药散提取物中阿魏酸、芍药苷和茯苓酸含量分别为(127.6±14.9)μg/g、(6081.8±468.0)μg/g和(14.7±0.75)μg/g,当归芍药散含药血清中阿魏酸和芍药苷含量分别为(0.026±0.004)μg/g和(0.61±0.07)μg/g。结论本研究建立的方法样品处理简单,方法特异性强,精确度高,重复性偏差小,回收率高,可用于当归芍药散提取物和含药血清中活性成分的质量控制。     

人参皂苷Rg1对H2O2诱导的HT22细胞凋亡及胞内Ca2+变化的影响

目的 研究人参皂苷Rg1对H2O2诱导的HT22细胞凋亡及胞内Ca2+浓度变化的影响.方法 以0、6.25、12.5、25、50、100μg/L人参皂苷Rg1预处理细胞24 h,采用Ca2+荧光染料探针Fluo-3/AM负载细胞1 h后,50 mmol/L H2O2刺激细胞,多功能酶标仪测定荧光强度,激光共聚焦显微镜实时监测[Ca2+]i变化,Hoechst 33258染色检测细胞凋亡.结果 H2O2可诱导细胞内Ca2+浓度增加(P<0.01),并增加细胞凋亡率(P<0.01).不同浓度人参皂苷Rg1可呈剂量依赖性的抑制H2O2诱导的HT22[Ca2+]i增加(P<0.01),抑制细胞凋亡(P<0.01),以50μg/L的作用为最强(P<0.01).结论 人参皂苷Rg1可通过降低H2O2诱导的HT22细胞内Ca2+水平的升高,抑制氧化应激引起的细胞凋亡.     

人参皂苷Ro延长秀丽隐杆线虫的寿命并增强氧化应激抵抗力＊

目的 以秀丽隐杆线虫（（Caenorhabditis elegans，C. elegans），下文简称线虫）及其突变株为生物模型，研究人参皂苷Ro（Ginsenoside-Ro，G-Ro）对健康寿命的影响及抗氧化作用。方法 实验设空白对照组、不同剂量G-Ro（5、10、20 μmol·L^-1）药物组、阳性药物对照组（40 μmol·L^-1二甲双胍），研究G-Ro对线虫寿命、脂褐素荧光的影响。另外，在上述基础上利用10 mmol·L^-1百草枯（Paraquat，PQ）建立氧化损伤模型，探究G-Ro对线虫氧化应激状态下寿命及活性氧自由基（Reactive oxygen species，ROS）的影响。利用绿色荧光蛋白标记的DAF-16：：GFP、SOD-3：：GFP线虫及突变株daf-16（mu86）分析G-Ro对DAF-16及SOD-3的调节作用。结果 与空白对照组相比，20μmol·L^-1 G-Ro延长了线虫寿命（***P<0.001）；在氧化应激模型中，延长线虫寿命（^#P<0.05）；降低脂褐素荧光水平（11.70%）。20 μmol·L^-1 G-Ro降低线虫内源性ROS（11.92%，*P<0.05），降低氧化应激后升高的ROS（79.67%，*P<0.001）。与空白对照组相比，20 μmol·L^-1 G-Ro提高叉头转录因子（Fork head box O，FOXO）同系物DAF-16去磷酸化入核率（51.00%）；增强SOD-3荧光强度（19.85%，***P <0.001）。在正常及氧化应激状态下，G-Ro对突变体daf-16（mu86）寿命的影响均无统计学意义。结论 在正常及氧化应激状态下G-Ro延长线虫寿命的作用，可能与其上调SOD-3，清除累积的ROS相关。DAF-16的转录活性可能介导G-Ro效应。     

从凋亡网络的调控研究地黄饮子治疗阿尔兹海默病的分子机制

目的 利用中药网络药理学和分子生物学从凋亡网络的调控研究地黄饮子（DHYZ）治疗阿尔兹海默病（AD）的分子机制。方法 利用网络药理学方法筛选和预测DHYZ的活性成分治疗AD的潜在作用靶点，构建药物-靶标-疾病网络和蛋白与蛋白相互作用网络，运用生物信息学分析DHYZ调控凋亡网络的主要靶点和信号途径；Aβ1-42处理构建AD细胞模型，使用不同浓度含药血清处理，运用MTT法检测细胞活率，流式细胞术检测细胞凋亡情况，qPCR和Western blotting检测细胞凋亡相关基因和蛋白的表达。结果 筛选出DHYZ中108种活性成分有222个AD的潜在治疗靶点，其中有202个靶点之间存在的3 737种蛋白蛋白相互作用关系，DHYZ对凋亡网络的调控是其防治AD的重要生物学途径，预测其核心调控靶点有TNF、AKT1、MAPK3、NFKB1、TP53、CASP3等，qPCR和Western blotting验证了预测结果。细胞实验证明不同浓度DYHZ含药血清呈浓度依赖性抑制Aβ1-42处理的SH-SY5Y细胞凋亡，且与调控细胞凋亡相关基因和蛋白有关。结论 DHYZ活性化合物对细胞凋亡相关的多个靶点和多条信号通路的调控是其防治AD的重要作用机制。     

小组合作式教学模式在儿科临床护理带教中的应用

目的探讨小组合作式教学在儿科临床护理带教中的应用效果。方法选取2015年4月～2017年4月于本院学习的140名护理实习生作为研究对象,随机分为对照组和实验组,每组各70名。实验组实行小组合作式带教模式,对照组按照传统方法进行带教。比较2组护生出科时理论考核及操作考核成绩,患者对其的护理满意度情况及护生对带教的满意度情况。结果实验组护生理论考核及操作考核等分均高于对照组,且患儿家长对护生满意度及护生对带教模式的满意度均高于对照组,差异有统计学意义(P 0. 05)。结论实行小组合作式护理带教模式,能提高护生的儿科护理临床综合技能,在儿科临床护理带教中有较好的推广意义。     

基于环状RNA测序探讨当归芍药散对APPswe/PS1ΔE9转基因小鼠的神经保护作用

目的:研究环状RNA(circRNA)在当归芍药散对APPswe/PS1ΔE9双转基因(APP/PS1)小鼠神经保护作用及其机制。方法:6月龄APP/PS1小鼠20只随机分为模型组和药物组,药物组予以当归芍药散水提液灌胃,10只野生C57BL/6小鼠为正常组,正常组和模型组给予等体积生理盐水,各组连续灌药8周。应用circRNA测序分析当归芍药散干预前后APP/PS1小鼠差异表达circRNA,构建circRNA-miRNA mRNA相互作用网络,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)验证cric RNA测序结果,应用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测海马区磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K),磷酸化PI3K(p-PI3K),蛋白激酶B1(Akt1),p-Akt1,B淋巴细胞瘤-2和Bcl-2-相关X的蛋白质(Bax)的蛋白表达水平,应用免疫组化检测海马区的Caspase-3的蛋白表达水平,应用末端标记(TUNEL)法检测小鼠海马区神经元凋亡水平。结果:与模型组比较,当归芍药散干预后有90个差异表达的circRNA,其中46个上调,44个下调。与正常组比较,模型组circRNA1398,circRNA1399表达水平下降,miR-103-3p,miR-153-3p,miR-143-3p及miR-143-5p表达水平上调(P<0.01),与模型组比较,当归芍药散组circRNA1398,circRNA1399表达水平上调,miR-103-3p,miR-153-3p,miR-143-3p及miR-143-5p表达水平下降(P<0.01)。通过circRNA-miRNA mRNA相互作用网络分析circRNA1398和circRNA1399调控Bcl-2和Akt1基因表达。与正常组比较,模型组的p-PI3K,Akt1,p-Akt1和Bcl-2表达量下降(P<0.01),Bax和Caspase-3的蛋白表达量升高(P<0.01);与模型组比较,当归芍药散组APP/PS1小鼠海马区的p-PI3K,Akt1,p-Akt1和Bcl-2表达量增加(P<0.01),Bax和Caspase-3的蛋白表达量下降(P<0.01)。与正常组比较,模型组小鼠海马区神经元凋亡水平上升,细胞凋亡率为(43.76±2.92)%。与模型组比较,当归芍药散干预后细胞凋亡率为(24.64±3.39)%。结论:当归芍药散可以激活PI3K/Akt通路和抑制APP/PS1小鼠海马区神经元凋亡,发挥神经保护作用,具体机制可能与其上调circRNA1398和circRNA1399表达及其相应miRNA的表达相关。     

基于网络药理学研究当归芍药散防治阿尔茨海默病的作用机制

目的 探究当归芍药散防治阿尔茨海默病的作用机制。方法 选取当归芍药散中的当归、白芍、白术、川芎、茯苓、泽泻为研究对象,应用TCMSP数据库对6味中药主要化学成分进行筛选;使用TCMSP数据库,对筛选出的化合物及阿尔茨海默病进行靶点预测,选取当归芍药散与阿茨海默病一致的6个靶点蛋白作为后续研究对象,通过生物分子功能注释系统（MAS 3.0）及KEGG通路数据库进行通路注解及分析,得到当归芍药散治疗阿茨海默病的相关靶点通路预测图及相关信号通路。结果 从当归芍药散中筛选出35个化合物,可作用于阿尔茨海默病6个潜在的蛋白靶点,找出靶点的相关通路22条。作用通路涉及阿尔茨海默病发病机制相关的钙信号途径、炎症、免疫调节、细胞与细胞之间的信号交流、肌动蛋白细胞骨架的调节等各个环节,6味中药既有共同的成分及作用靶点、通路,又各有偏重,各通路间通过共有靶点连接,显示出不同成分间的多靶点、多途径的协同作用。结论 预测出当归芍药散治疗阿尔茨海默病可能与其调节炎症、免疫系统、钙信号、细胞与细胞之间的信号交流等机制有关。     

Sp8在健康大鼠侧脑室室管膜区的表达

目的:探讨健康大鼠侧脑室室管膜区(SVZ区)Sp8与微管相关蛋白Doublecortin(DCX)的表达。方法:1、6、12月龄SD大鼠被处死。脑冠状位切片,免疫荧光单标染色观察1、6、12月龄组SVZ区Sp8细胞与DCX细胞的表达,免疫荧光双标染色观察1月龄组Sp8/GFAP、Sp8/Ki67的共表达情况。结果:1月龄组SVZ区Sp8细胞、DCX细胞密度均显著高于6月龄组及12月龄组;除此之外,1月龄组SVZ区有Sp8/GFAP、Sp8/Ki67的共表达细胞。结论:Sp8与DCX在大鼠的SVZ区有广泛的表达;Sp8调控SVZ区神经发生和星形胶质干细胞的分化。