鼻咽癌干细胞增殖特征及细胞周期相关蛋白表达水平研究

目的　研究鼻咽癌干细胞的增殖特征并初步探讨其分子机制。方法　采用无血清悬浮培养法从鼻咽癌细胞CNE2和5-8F获得鼻咽癌干细胞CNE2-SC、5-8F-SC，分别采用细胞存活率分析计数器、细胞平板克隆形成试验观察鼻咽癌干细胞的增殖特性和克隆形成能力，Western blot法检测细胞周期相关蛋白表达水平。结果　鼻咽癌干细胞比其来源的鼻咽癌细胞增殖速度显著降低，差异有统计学意义（P＜0.05）。鼻咽癌干细胞克隆形成率显著高于其来源鼻咽癌细胞（P＜0.01），但肿瘤干细胞克隆显著小于其来源细胞。与普通鼻咽癌细胞比较，鼻咽癌干细胞的细胞周期蛋白CylinD1、CylinD3及细胞周期调控蛋白CDK2、CDK4、CDK6的表达水平显著下调（P＜0.01）。结论　鼻咽癌干细胞比其来源的鼻咽癌细胞生长增殖缓慢，可能与其细胞周期蛋白和周期蛋白依赖激酶表达水平下调有关。     

不同中医临床证型下行型鼻咽癌组织细胞核蛋白质差异表达的初步研究

目的： 研究下行型鼻咽癌不同中医临床证型患者原发病灶组织细胞核差异表达蛋白质,为中医证型分类的科学性提供依据。方法：采用双向凝胶电泳及基质辅助激光解吸电离-飞行时间质谱法 (MALDI-TOF-MS)对下行型鼻咽癌火毒困结型、气阴两虚型和气血凝结型患者的鼻咽癌组织细胞核蛋白进行分离和表达谱研究,利用生物信息学方法鉴定差异蛋白质。结果：与下行型鼻咽癌气阴两虚型细胞核蛋白点相比,气血凝结型有28个蛋白点表达上调、12个蛋白点表达下调,火毒困结型有9个点表达上调,19个蛋白点表达下调;与下行型鼻咽癌气血凝结型细胞核蛋白点相比,火毒困结型有25个蛋白点表达上调、18个蛋白点表达下调。MALDI-TOF-MS成功鉴定出3个差异蛋白质,来源于气血凝结型鼻咽癌患者的瘤组织细胞不均一性核糖核蛋白H (heterogeneous nuclear ribonucleoprotein H,hnRNP H)和微管蛋白β链1 (tubulin beta-1 chain,TUB1)表达上调,来源于火毒困结型鼻咽癌患者瘤细胞的核蛋白Ⅵ型胶原蛋白α2链 (type Ⅵ collagen alpha 2 chain,COLⅥA2)前体表达下调。结论：下行型气血凝结型鼻咽癌患者的瘤细胞核蛋白hnRNP H和TUB1表达上调,下行型火毒困结型鼻咽癌患者的瘤细胞核蛋白中COLⅥA2前体表达下调。     

人参皂苷Rg1对H2O2诱导的HT22细胞凋亡及胞内Ca2+变化的影响

目的 研究人参皂苷Rg1对H2O2诱导的HT22细胞凋亡及胞内Ca2+浓度变化的影响.方法 以0、6.25、12.5、25、50、100μg/L人参皂苷Rg1预处理细胞24 h,采用Ca2+荧光染料探针Fluo-3/AM负载细胞1 h后,50 mmol/L H2O2刺激细胞,多功能酶标仪测定荧光强度,激光共聚焦显微镜实时监测[Ca2+]i变化,Hoechst 33258染色检测细胞凋亡.结果 H2O2可诱导细胞内Ca2+浓度增加(P<0.01),并增加细胞凋亡率(P<0.01).不同浓度人参皂苷Rg1可呈剂量依赖性的抑制H2O2诱导的HT22[Ca2+]i增加(P<0.01),抑制细胞凋亡(P<0.01),以50μg/L的作用为最强(P<0.01).结论 人参皂苷Rg1可通过降低H2O2诱导的HT22细胞内Ca2+水平的升高,抑制氧化应激引起的细胞凋亡.     

益气解毒方乙酸乙酯提取部位对鼻咽癌患者外周血树突状细胞生物学特性的影响

目的察益气解毒方乙酸乙酯提取部位(ethyl acetate extract,EAE)对鼻咽癌(nasopha ryngealcarcinoma,NPC)患者外周血树突状细胞(dendritic cells,DCs)生物学特性及其功能的影响。方法初诊NPC患者10例,抽取肘静脉血,分离培养外周血单个核细胞(PBMC),用10%胎牛血清RPMI 1640培养基分别加不同浓度益气解毒方EAE进行体外培养,倒置显微镜下观察DCs的形态学特征,流式细胞仪检测DCs表面特异分子CD1a、CD86和HLA DR的表达水平,ELISA法检测培养上清液中IL-12含量。结果益气解毒方EAE能促进NPC患者PBMC来源的DCs成熟分化并高表达成熟DCs表面的特异性分子标志物(CD1a,CD86,HLA DR),其IL 12分泌水平亦随着培养天数的增加而持续升高。结论益气解毒方EAE能明显促进NPC患者外周血来源的DCs成熟分化和功能活性表达。     

鼻咽癌的基因诊断研究进展

鼻咽癌是我国常见头颈部恶性肿瘤,探索优化鼻咽癌早期诊断指标和技术,是提高鼻咽癌防治水平的关键。作为一种新的诊断技术,基因诊断在鼻咽癌防治领域的应用日益普及。本文主要就鼻咽癌早期基因变化及其异常表达蛋白、EB病毒相关蛋白和生物芯片在鼻咽癌早期诊断中的应用进行综述。     

鼻咽癌细胞株CNE-2Z中肿瘤干细胞样细胞的悬浮培养与鉴定

目的探讨鼻咽癌细胞株CNE 2Z中肿瘤干细胞样细胞的富集与鉴定方法。方法鼻咽癌细胞株CNE 2Z细胞普通培养至对数生长期,不同密度细胞分别加入无血清培养液中继续培养,制备第9天无血清培养细胞爬片,CD133和CD44克隆抗体免疫组化染色,电镜观察超微结构。结果无血清悬浮培养至第9天时,以1×10~5/m1细胞密度组活细胞比率最高;普通培养细胞爬片的CD133和CD44细胞强阳性率分别是2.71%和3.00%,而无血清培养细胞爬片的CD133和CD44强阳性率分别为66.7%和67.00%(P<0.01),表现正相关(P<0.01);扫描电镜和透射电镜观察显示,阳性细胞表现特殊的超微结构特点。结论无血清悬浮培养法可富集鼻咽癌细胞中的肿瘤干细胞样细胞,CD133和CD44可作为其特异性表面标志物。     

益气解毒方对TgN(p53mt-LMP1)/HT小鼠鼻腔和鼻咽黏膜上皮细胞增殖及细胞周期的影响

目的 探讨益气解毒方对TgN(p53mt-LMP1)/HT小鼠鼻腔和鼻咽黏膜上皮细胞增殖及细胞周期的影响.方法 第4代8月龄TgN(p53mt-LMP1)/HT阳性小鼠和阴性小鼠分别随机分为益气解毒方组和生理盐水组,即转基因阳性生理盐水组(TC)、转基因阳性益气解毒方组(TM)、转基因阴性生理盐水组(NC)和转基因阴性益气解毒方组(NM),共4组.取鼻腔和鼻咽黏膜组织,H-E染色法观察病理组织学变化,流式细胞术测定细胞周期分布特点.结果 TC组小鼠鼻腔和鼻咽黏膜上皮细胞非典型性增生明昱,TC、TM、NM和NC组小鼠鼻腔和或鼻咽黏膜上皮癌前病变率分别为90.9%、10%、0和0,组间比较差异具有统计学意义(P相似文献   

益气解毒方提取物对CNE2细胞的体内外抑瘤作用

目的观察益气解毒方提取物对鼻咽癌CNE2细胞及移植瘤的抑制作用。方法采用MTT法测定益气解毒方多糖提取物、乙酸乙酯提取物（EAE）、乙醇提取物对CNE2细胞体外增殖的影响。建立CNE2裸鼠移植瘤模型,随机分为模型组、EAE组、顺铂（DDP）组和联合治疗组,分别给予生理盐水、益气解毒方EAE、DDP注射液以及EAE联合DDP注射液,12 d后检测各治疗组的肿瘤抑制率。结果益气解毒方EAE对CNE2细胞具有明显的抑制作用,并呈明显的剂量效应关系（P〈0.05）。联合治疗组能明显抑制裸鼠CNE2肿瘤的生长,抑瘤率高达56.7%,明显高于EAE组和DDP组（P〈0.01）。结论 EAE是益气解毒方中的一种有效的抗鼻咽癌肿瘤成分,EAE联合DDP对裸鼠CNE2鼻咽癌移植瘤的生长具有协同抑制作用。     

AR大鼠IL-5、IFN-γ表达水平与鼻黏膜EOS相关性

目的 探讨变应性鼻炎(AR)大鼠脾组织白介素-5(IL-5)、γ-干扰素(IFN-γ)表达水平与鼻腔黏膜嗜酸性粒细胞(EOS)数相关性.方法 经腹腔隔日1次注射卵清蛋白(OVA)变应原7次后,鼻腔滴入OVA鼻内激发制作AR大鼠模型,并维持10d,最后1d于激发后0.5、1、2、4、6和8h处死动物,采用酶联免疫吸附法定量检测各时段大鼠脾组织IL-5和IFN-γ含量,计数鼻黏膜EOS数,并对IL-5、IFN-γ与EOS之间进行相关性分析.结果 与对照大鼠比较,AR大鼠在各时段EOS数均增加(P＜0.05);AR大鼠在激发后1、2、4、6h脾组织IL-5表达水平分别为(382.86±196.17)、(456.45±149.82)、(286.33±106.56)、(259.50±128.74) pg/mL,均高于对照大鼠(P＜0.05),IFN-γ表达水平分别为(16.82±7.63)、(28.47 ±13.33)、(20.37 ±9.73)、(21.73±10.30) pg/mL,均低于对照大鼠(P＜0.05),IL-5表达水平和鼻黏膜EOS数呈正相关(r=0.942,P=0.000),IFN-γ表达水平与EOS数呈负相关(r=-0.604,P=0.000).结论 AR大鼠脾组织IL-5、IFN-γ表达与鼻黏膜EOS数明显相关.