天麻素通过下调ERK1/2-p38信号通路保护谷氨酸损伤的PC12细胞

目的研究天麻素(gastrodin,Gas)通过调控ERK1/2-p38信号通路保护谷氨酸损伤的PC12细胞。方法建立谷氨酸损伤的PC12细胞模型;甲基噻唑基四唑比色法测定细胞活力;Hochest 33258染色荧光显微镜观察细胞凋亡形态;罗丹明123染色流式细胞术检测细胞线粒体膜电位;Western blot法检测细胞内p38、ERK1/2、p-p38、p-ERK1/2蛋白表达。结果天麻素明显抑制谷氨酸诱导的PC12细胞凋亡,在0.1～10μmol/L剂量范围内呈一定的量效关系;天麻素升高谷氨酸损伤引起的细胞线粒体膜电位的降低,下调p-p38、p-ERK1/2蛋白的表达。结论天麻素对谷氨酸损伤的PC12细胞具有保护作用,其机制可能与升高线粒体膜电位水平,下调p-p38、p-ERK1/2蛋白表达,抑制细胞凋亡有关。     

红景天苷对CoCl2诱导PC12细胞低氧损伤的保护作用

目的研究红景天苷（Sal）对Co Cl2诱导PC12细胞低氧损伤的影响。方法用200μM Co Cl2诱导PC12细胞致其损伤,用不同浓度的红景天苷（0.1、1、10μM）作用于PC12细胞,TUNEL染色法观察细胞凋亡情况;RT-q PCR法测定Arc m RNA的表达;Western blot法测定Arc蛋白的表达。结果不同浓度红景天苷能明显抑制Co Cl2诱导的PC12细胞凋亡,并能显著提高PC12细胞中Arc m RNA和蛋白表达水平。结论红景天苷对Co Cl2诱导的PC12细胞低氧损伤具有一定的保护作用,其机制可能与红景天苷抵抗Co Cl2诱导PC12细胞的凋亡,上调PC12细胞Arc m RNA和蛋白表达水平有关。     

山楂叶总黄酮对H2O2诱导PC12细胞凋亡的保护作用及机制的研究

目的探讨山楂叶总黄酮(flavone mixture of crataegus leaves,FMCL)对H2O2诱导的PC12细胞凋亡的保护作用及其分子机制.方法用H2O2刺激PC12细胞使其发生凋亡,用流式细胞仪检测PC12细胞凋亡率,用Western blot 法检测Bcl-2、Bax、Caspase-3P20蛋白及用RT-PCR法检测Bcl-2、Bax mRNA表达量的变化.结果与模型组比较FMCL 100μg/ml剂量组PC12细胞凋亡率下降,Bcl-2蛋白及mRNA表达量明显升高,而Bax、Caspase-3P20蛋白及Bax mRNA表达量明显降低(P<0.05或P<0.01),且在一定范围内存在剂量依赖关系.结论山楂叶总黄酮可抑制H2O2诱导的PC12细胞凋亡,其机制可能与调节凋亡相关基因及蛋白的表达从而抑制Caspase-3活化有关.     

17-丙烯胺-17去甲氧格尔德霉素对大鼠嗜铬细胞瘤细胞凋亡及血管内皮生长因子表达的影响

目的探讨热休克蛋白90（HSP90）抑制剂17-丙烯胺-17去甲氧格尔德霉素（17-AAG）对大鼠嗜铬细胞瘤细胞系PC12细胞生长及血管内皮生长因子（VEGF）表达的影响。方法将实验组PC12细胞分成两组：实验一组分别加入不同终浓度（0.005、0.025、0.05、0.1、0.25、0.5、1.0、2.0μmol/L）17-AAG培养液;实验二组分别加入150μg/L VEGF（VEGF组）、0.1μmol/L17-AAG（17-AAG组）、0.1μmol/L17-AAG＋150μg/L VEGF（17-AAG＋VEGF组）培养液。另设DMSO组（阴性对照组）和空白对照组。采用MTT法检测细胞存活率;Wrights-Giemsa染色观察细胞形态变化;流式细胞术检测细胞凋亡率;Western blotting检测细胞中VEGF-165蛋白的表达。结果 17-AAG呈时间、剂量依赖性抑制PC12细胞增殖（P〈0.05）;24 h半数抑制浓度（IC50）为0.1μmol/L。0.1μmol/L 17-AAG作用于PC12细胞6、12、24、48 h的细胞凋亡率均明显高于空白对照组（P〈0.01）。0.1μmol/L 17-AAG作用于PC12细胞6、12、24、48 h,VEGF-165蛋白表达逐渐降低;各时点VEGF-165蛋白表达量与阴性对照组比较,差异均有统计学意义（P〈0.05）。结论 HSP90抑制剂17-AAG能抑制PC12细胞增殖,诱导细胞凋亡,抑制VEGF蛋白表达。     

松茸多糖对MPP~+损伤PC12细胞保护机制的研究

目的探讨松茸多糖对MPP~+诱导的PC12细胞损伤的保护作用。方法 MTT法检测细胞活性,q RT-PCR检测Caspase-3基因表达水平,并用Westernblot法检测Caspase-3蛋白表达。结果在MPP~+(800μmol/L)处理PC12细胞48h后,与模型组相比,在5ng/ML的松茸多糖保护组,细胞活性显著增高,Caspase-3基因及蛋白的表达水平均明显降低。结论在一定剂量范围内的多糖松茸对MPP~+诱导的PC12细胞的损伤具有保护作用,此作用可能与抑制细胞凋亡有关。     

橄榄苦苷对HK-2细胞缺糖缺氧损伤的保护作用

目的分析橄榄苦苷对HK-2细胞缺糖缺氧损伤的保护作用并探讨其可能的作用机制。方法实验于2017年1-4月在武汉大学人民医院中心实验室进行,体外培养HK-2细胞,应用无糖无血清培养基和三气培养箱建立缺糖缺氧模型,将细胞分为对照组、单纯缺氧24 h复氧3 h组(IR组)和缺氧24 h复氧3 h加不同浓度(10μmol/L、50μmol/L、100μmol/L、200μmol/L)的橄榄苦苷干预组。用CCK-8检测各组细胞的A450值,与对照组比较计算细胞的存活率,Hoechst染色检测各组细胞的凋亡情况,Western Blot法测定B淋巴细胞瘤-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)、Bcl-2相关x蛋白(Bcl-2 associate X protein,Bax)的蛋白表达量,结果橄榄苦苷随浓度升高能够提高HK-2细胞在缺糖缺氧环境下的细胞存活率,100μmol/L组存活率最高,但至200μmol/L组存活率呈降低趋势;Hoechst染色显示橄榄苦苷可减少缺糖缺氧损伤引起的细胞凋亡,100μmol/L组凋亡率最低;Western blot结果显示橄榄苦苷能够增加细胞Bcl-2蛋白的表达,降低Bax蛋白的表达。结论橄榄苦苷对HK-2细胞的缺糖缺氧损伤具有一定的保护作用,其作用机制可能与其抑制细胞凋亡有关。     

Salubrinal保护心肌细胞内质网应激凋亡的实验研究

目的探讨Salubrinal对衣霉素诱导的乳鼠原代心肌细胞凋亡的保护作用及机制。方法采用消化贴壁法获得乳鼠原代心肌细胞,分别给与不同浓度的Salubrinal（10μmol、20μmol、40μmol）预处理,30min后加入TM（5μg/ml）,继续培养24h后通过流式细胞和TUNEL检测方法对乳鼠心肌细胞凋亡进行检测;Western印迹法检测凋亡过程中Caspase-12蛋白酶的表达变化。结果经Salubrinal预处理的细胞同单独使用衣霉素相比,细胞凋亡率和细胞凋亡指数均显著下降;Caspase-12表达明显减少。结论Salubrinal对衣霉素诱导的乳鼠原代心肌细胞凋亡具有保护作用,其机制可能是通过抑制内质网应激凋亡通路。     

蒺藜皂苷对氧化应激PC12细胞内NF-κB水平的影响及其机制

目的：研究蒺藜皂苷(GSTT)对H2O2诱导大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞(PC12)缺氧损伤时细胞内核转录因子(NF-κB)含量的影响,并探讨其机制。方法: 将处于对数生长期的PC12细胞分为对照组、模型组、蒺藜皂苷高剂量组（10 mg·L^-1）和低剂量组（3 mg·L^-1）。用H2O2建立PC12细胞缺氧损伤模型,应用流式细胞术检测细胞凋亡率,并采用流式细胞仪、免疫组织化学方法及Western blotting等方法检测NF-κB蛋白表达水平。结果：与模型组比较,蒺藜皂苷高和低剂量组的PC12细胞凋亡率明显降低(P<0.05);与蒺藜皂苷低剂量组比较,蒺藜皂苷高剂量组细胞凋亡率降低(P<0.05);流式细胞仪及Western blotting方法检测,与模型组比较,蒺藜皂苷高和低剂量组PC12细胞内NF-κB蛋白表达明显增加(P<0.05),蒺藜皂苷高剂量组与低剂量组比较差异无显著性(P>0.05)。免疫组织化学方法检测,与对照组比较,模型组中胞浆呈棕黄色颗粒的细胞数明显减少,NF-κB蛋白表达强度显著降低 (P<0.01);蒺藜皂苷高和低剂量组中NF-κB呈阳性表达的细胞数明显高于模型组(P<0.05)。结论：蒺藜皂苷对H2O2诱导的PC12细胞损伤具有一定的保护作用,其保护作用机制可能与NF-κB的激活有关。     

EGCG恢复Sirt-1拮抗高糖诱导的PC12细胞凋亡

目的:探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对高糖诱导的PC12细胞损伤的保护作用及Sirt-1的介导机制。方法:CCK-8法检测PC12细胞活力; ELISA法检测Bcl-2的活性;免疫荧光法检测Caspase-3在胞质的活性及胞核内DAPI的表达; WB检测Sirt-1的表达。结果:高浓度的葡萄糖(15、30、45 mmol/L)诱导了PC12细胞的损伤,细胞活性较对照组分别下降了14%、32%及57%,凋亡保护蛋白Bcl-2的表达较对照组下降了8%、30%及35%; EGCG(10、20、40μmol/L)对高糖诱导的PC12细胞凋亡提供了保护作用,细胞活性较高糖损伤组分别提升了2%、20%及24%,Bcl-2的表达提升了10%、22%和25%;阻断Sirt-1通路逆转了EGCG提供的保护作用,同时加入阻断剂组的细胞活性较EGCG保护组下降了8%,Bcl-2的表达下降了16%。结论:EGCG通过恢复Sirt-1活性拮抗高糖诱导的PC12细胞的凋亡。     

二苯乙烯苷对氧糖剥夺星形胶质细胞凋亡的影响及其机制

目的 观察2,3,5,4＇-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷（TSG）对大鼠大脑皮层星形胶质细胞（AS）缺氧、缺糖损伤所致凋亡的影响,以及内质网应激相关因子Caspase-12 、Caspase-3 的表达变化,探讨TSG脑保护作用的作用机制.方法 原代培养Sprague-Dawley 大鼠大脑皮层AS,建立缺氧、缺糖损伤模型,以流式细胞术检测细胞凋亡率,以透射电镜观察细胞超微结构尤其是凋亡小体的变化,研究缺氧缺糖对各组AS 的影响;以钙离子敏感的荧光探针Fura-2/AM 负载细胞检测细胞内游离钙离子浓度,研究氧糖剥夺（OGD）对不同组AS 的影响;以免疫细胞化学染色方法和反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）方法观测内质网应激相关因子Caspase-12 和Caspase-3 各组的表达.结果 与正常对照组相比,缺氧缺糖处理后AS 内游离钙离子浓度增高,TSG 预处理可明显降低细胞内游离钙离子,调节钙稳态失衡.免疫细胞化学染色和RT-PCR 结果显示,缺氧缺糖损伤后细胞内Caspase-12 、Caspase-3 表达增加,TSG 预处理可显著抑制两者的表达.结论 TSG 可抑制OGD 诱导的AS 凋亡,其机制可能通过抑制内质网应激发挥作用.     

红景天苷对NaCN及缺糖诱导PC12细胞凋亡的保护作用

目的：研究红景天苷对PC12细胞凋亡的影响,并探讨其抗凋亡的机制。方法：以NaCN及缺糖诱导的PC12细胞凋亡为模型,采用MTT比色法,琼脂糖凝胶电泳分析及流式细胞技术,考察红景天苷对细胞凋亡的保护作用;采用比色法测定Caspase活性、Western-blot技术检测胞浆中细胞色素C水平,考察红景天苷抗凋亡的机制。结果：红景天苷可以有效地改善NaCN及缺糖诱导的PC12细胞凋亡,抑制Caspase活性,降低胞浆中细胞色素C的水平。结论：红景天苷可能通过线粒体途径抑制NaCN及缺糖诱导的PC12细胞凋亡。     

H_2O_2通过上调P38的活性而诱导PC12细胞凋亡

目的:探讨H2O2是否通过调节P38MAPK的活性而诱导PC12细胞凋亡。方法:碘化丙啶(PI)染色流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡;Western-Blot测定磷酸化ERK1/2蛋白和磷酸化p38蛋白的表达。结果:作用PC12细胞24h后,20～80μmol/L的H2O2可呈浓度依赖性地诱导PC12细胞凋亡并增加PC12细胞P38磷酸化的水平;P38特异性抑制剂SB203580(10或20μmol/L)预处理30min可显著减轻40μmol/LH2O2对PC12细胞凋亡的诱导作用。结论:H2O2通过上调P38的活性而诱导PC12细胞凋亡。     

Inhibition of Corydalis decumbens Alkaloids on Hydrogen Peroxide- induced Apoptosis of PC12 Cells through Down-regulating Caspase-3 Expression

Objective To extract alkaloids from Corydalis decumbens (AsCD) by supercritical CO2 fluid extraction (SFE) and to evaluate protective effects of AsCD against hydrogen peroxide (H2O2)-induced apoptosis in rat PC12 cells. Methods AsCD were extracted by SFE and oxidative damage PC12 cells model was induced by H2O2. The survival rate of the cells was determined by MTT assay; Lactate dehydrogenase release was determined by ultraviolet spectrophotometry; Flow cytometry was used to detect apoptosis; Caspase-3 mRNA and protein were determined by real-time PCR and Western blotting assay, respectively. Results AsCD remarkably reduced the cytotoxicity, prevented membrane damage, and inhibited cell apoptosis. AsCD inhibited Caspase-3 mRNA and protein expression induced by H2O2 in PC12 cells. Conclusion AsCD possess protective effects against H2O2-induced apoptosis in PC12 cells, and the mechanism of AsCD responsible to the inhibition of apoptosis is possibly attributed to the down-regulating Caspase-3 expression. AsCD might be useful in the treatment of oxidative stress-related neurodegenerative diseases.     

内质网应激介导过氧化氢诱导的心肌细胞凋亡

目的探讨氧化应激诱导心肌细胞凋亡是否与内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)的调控机制有关。方法给予乳鼠心肌细胞高低两种浓度(500、100μmol/L)和不同时间(0、4、8、12、24h)过氧化氢(H2O2)刺激。采用流式细胞仪检测各组心肌细胞的凋亡率;苏木精-伊红染色法(HE)观察心肌细胞凋亡的典型形态;通过Western blot检测ERS标志蛋白p-PERK和CHOP的表达变化。进一步采用ERS抑制剂化学伴侣PBA(4-phenylbutyric acid)抑制心肌细胞ERS,Western blot检测p-JNK、p-PERK和CHOP蛋白的表达变化;采用流式细胞仪检测Caspase-12和Caspase-3的活性。结果①低浓度H2O2可显著诱导心肌细胞凋亡,高浓度H2O2则导致心肌细胞发生坏死;100μmol/L H2O2刺激心肌细胞8h时其凋亡率最高。②心肌细胞发生凋亡时ERS标志蛋白p-PERK和CHOP表达显著增高。③ERS抑制剂PBA预处理心肌细胞,可有效抑制H2O2诱导的p-PERK、CHOP表达及Caspase-3、Caspase-12活性的上调,与单纯H2O2处理组相比差异有统计学意义(P<0.01)。结论低浓度H2O2可通过促发ERS整合调控机制介导心肌细胞凋亡。这一结果将从ERS整合调控细胞应激的角度为心血管疾病的防治提供新思路。     

谷氨酰胺对细胞缺糖损伤的保护作用

目的观察谷氨酰胺（glutamine，Gln）对细胞缺糖（glucose desprivation，GD）损伤的保护作用．并探讨可能的作用机制。方法在以无糖培养大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤（PCI2）细胞建立细胞缺糖损伤模型的基础上，首先以噻唑蓝比色（MTT）法、流式细胞法、细胞线粒体跨膜电位检测等方法观察Gln对缺糖损伤细胞模型的作用；再以大鼠大脑中动脉线栓法建立动物脑缺血模型．观察Gln对动物缺血性损伤的保护作用；同时用免疫细胞化学法、Western blot印迹法检测细胞中应激基因葡萄糖调节蛋白75（grp75）的表达变化。结果Gln能使离体细胞在缺糖应激下存活率增加、凋亡率降低，线粒体跨膜电位稳定；动物实验显示Gln能减轻动物因缺血造成的脑损伤；免疫细胞化学法、Western blot印迹法检测结果表明Gln可以上调细胞中grp75的表达。结论Gln对细胞缺糖损伤和动物缺血性脑损伤具有一定的保护作用，这种保护作用可能与上调细胞中的应激基因grp75的表达有关。     

6-OHDA诱导过表达nurr1基因的SK-N-SH细胞凋亡

目的比较自身不表达核相关受体因子(nuclear receptor related factor1,Nurr1)基因的人神经母细胞瘤细胞株SK-N-SH和过表达外源性nurr1基因的SK-N-SH/Nurr1细胞对6-羟基多巴胺(6-hydroxydopamine,6-OHDA)的损伤反应,探讨nurr1基因在6-OHDA致细胞损害(死亡或凋亡)中的作用。方法用免疫细胞化学方法和RT-PCR检测基因转染细胞SK-N-SH/NURR1的nurr1蛋白及NURR1 mRNA的表达。细胞经不同浓度6-OHDA(50～100μmol/L)作用不同时间(6、12 h),经AnnexinV/PI双染后流式细胞术(flow cytometry,FCM)测定早期细胞凋亡比例。细胞经75μmol/L 6-OHDA作用12 h,通过透射电镜(transmission electronmicroscopy,TEM)观察细胞超微结构变化。用Western blotting方法检测75μmol/L6-OHDA作用6、12 h,细胞凋亡因子Caspase-3活性前体蛋白的表达水平。结果免疫细胞化学染色结果显示,基因转染细胞SK-N-SH/Nurr1表达NURR1蛋白;经RT-PCR检测,基因转染细胞表达NURR1 mRNA,说明外源性nurr1基因在转染细胞内过表达。FCM检测结果显示,75μmol/L 6-OHDA作用12 h,SK-N-SH/Nurr1细胞凋亡比例明显高于SK-N-SH细胞(P=0.000),而100μmol/L6-OHDA作用6、12 h后,2株细胞均表现为毒性损伤。TEM显示,75μmol/L6-OHDA作用12 h后,部分SK-N-SH/Nurr1细胞出现了典型凋亡改变,而SK-N-SH细胞主要表现为毒性损伤。4.75μmol/L6-OHDA作用6、12 h,SK-N-SH/Nurr1细胞Caspase-3活性前体蛋白表达显著下降(P=0.000),而SK-N-SH细胞Caspase-3活性前体蛋白表达变化不明显。结论外源性nurr1基因过表达促进6-OHDA诱导的SK-N-SH/Nurr1细胞凋亡,在低剂量(≤75μmol/L)时,凋亡比例与剂量呈正相关,高剂量时6-OHDA主要诱导细胞毒性损伤。     

乙酰葛根素对Aβ25-35诱导BV-2小胶质细胞Caspase-3表达的影响

目的 探究乙酰葛根素对β淀粉样蛋白(Aβ_25-35)诱导BV-2小胶质细胞形态及含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-3(Caspase-3)表达的影响。方法 用凝聚态Aβ_25-35诱导体外培养的BV-2小胶质细胞作为阿尔茨海默病炎症细胞模型,将细胞分为对照组、模型组、Caspase-3抑制剂(Z-DEVD-fmk)组以及乙酰葛根素低(0.1 μmol/L)、中(0.4 μmol/L)、高(1.6 μmol/L)剂量共6组,采用倒置相差显微镜观察小胶质细胞形态变化,应用Western blotting检测Caspase-3蛋白表达水平。结果 形态学结果显示,Aβ_25-35可激活小胶质细胞使其由静息态变为阿米巴样,Caspase-3抑制剂、乙酰葛根素可改善Aβ_25-35诱导的小胶质细胞形态改变。Western blotting结果显示,与对照组相比,模型组Caspase-3表达显著升高,差异有统计学意义(P<0.01);与模型组比较,Caspase-3抑制剂、乙酰葛根素各剂量组Caspase-3表达均显著降低(P<0.01);与Caspase-3抑制剂组相比,乙酰葛根素低、中剂量组Caspase-3表达均显著升高(P<0.01),高剂量组则无统计学意义。结论 乙酰葛根素可抑制Aβ诱导BV-2小胶质细胞激活,其机制可能与降低Caspase-3表达有关,且以高剂量组效果较好。     

桃红四物汤含药血清对缺糖缺氧损伤PC12细胞的保护作用

目的 探讨桃红四物汤含药血清对缺糖缺氧（oxygen glucose deprivation,OGD）损伤的PC12细胞的保护作用及其机制。 方法 采用连二亚硫酸钠（Na2S2O4）联合低糖培养基建立体外OGD致PC12细胞损伤模型;分别给予不同浓度的桃红四物汤含药血清,以MTT法检测细胞存活率,倒置显微镜观察细胞形态学变化;检测乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase,LDH）和超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）活性及丙二醛（malondialdehyde,MDA）含量;观察Hoechst33258染色后的细胞形态学变化;Western blot法检测给药后细胞Caspase-3蛋白的表达。 结果 与空白血清对照组相比,经OGD损伤后,细胞活力显著降低,桃红四物汤含药血清可减轻PC12细胞形态损伤,显著提高SOD活力,降低MDA和LDH含量,降低Caspase-3蛋白表达;Hoechst 33258染色结果表明桃红四物汤含药血清能降低OGD诱导的细胞凋亡。 结论 桃红四物汤含药血清对OGD诱导的PC12细胞损伤具有保护作用,其机制与提高SOD活力和降低MDA含量有关。     

N-硬脂酰酪氨酸对H2O2诱导PC12细胞氧化应激损伤的影响

目的研究N-硬脂酰酪氨酸（NsTyr）预处理对过氧化氢（H2O2）诱导的PC12细胞氧化应激损伤的影响。方法体外培养传代的PC12细胞分为空白对照组、H2O2损伤组（不同浓度H2O2诱导16h）和NsTyr预处理组（不同浓度NsTy预处理30min后加入100μmol／LH2O2诱导16h）。流式细胞仪检测细胞凋亡率及活性氧类（ROS）生成,Westernblotting检测Bax和Bcl-2的表达。结果与H2O2（100μmol／L）损伤组比较,5、10μmol／LNsTyr预处理组PC12细胞存活率显著升高（P〈0．01）,凋亡细胞率降低（P〈0．05）,细胞内ROS生成减少（P〈0．05,P〈0．01）,Bcl-2／Bax比值升高（P〈0．05）。结论NsTyr能提高PC12细胞的抗氧化应激损伤能力,上调Bcl-2表达和下调Bax表达,抑制细胞凋亡。