肿瘤坏死因子α基因沉默对无菌性炎症的抑制作用

目的 研究局部应用靶向肿瘤坏死因子α（TNF-α）的小干扰RNA（siRNA）对磨损颗粒诱导的无菌性炎症的抑制作用。方法 构建重组慢病毒载体,设计靶向TNF-α的siRNA序列和错配序列各1条。建立小鼠气囊模型,气囊内注射聚甲基丙烯酸甲酯颗粒诱导无菌性炎症反应。将建模后的小鼠随机分为3组,每组12只,分别在小鼠气囊内注入TNF-α siRNA（TNF-α组）、错配siRNA（MS组）和PBS（对照组）;慢病毒转染后第14和28天每组各处死6只小鼠,取出气囊组织。采用Real-Time PCR法检测气囊中TNF-α、IL-1β和IL-6 mRNA的表达;ELISA法检测TNF-α蛋白的含量;组织学检测气囊壁厚度和炎症细胞计数;活体荧光成像定量分析绿色荧光蛋白（GFP）荧光的强度和分布。结果 慢病毒介导TNF-α siRNA的局部应用显著降低了TNF-α组中TNF-α、IL-1和IL-6 mRNA的表达（P<0.01）,也降低了TNF-α蛋白的含量（P<0.01）;TNF-α组炎症反应（囊壁厚度和细胞浸润）显著减弱（P<0.05或P<0.01）。活体荧光成像显示,GFP的表达局限于气囊局部,TNF-α组和MS组荧光量比对照组升高5倍左右。结论 局部应用TNF-α siRNA可有效抑制磨损颗粒诱导的无菌性炎症,且无全身性不良作用。     

巨细胞病毒嗜肝细胞性和肝细胞感染模型的建立

目的确定巨细胞病毒（CMV）体外能否直接攻击肝细胞,并建立肝细胞感染模型。方法①人肝细胞系感染：用人CMV（HCMV）AD169毒株感染正常人肝细胞系（L-02）和人胚肺成纤维细胞（HELF）与L-02共培养细胞,HC-MV感染的HELF细胞为阳性对照;②原代鼠肝细胞（PML）感染：用重组鼠CMV（MCMV）感染PML细胞。光镜观察细胞病变（CPE）,电镜观察病毒颗粒,间接免疫荧光（IFA）法检测HCMV抗原;原位杂交法检测MCMVIE基因。PML性质经观察其特征性超微结构和检测培养上清白蛋白水平予以鉴定。结果在PML细胞纯度〉95%（培养第8天）时感染病毒,3d后〉80%细胞出现典型CPE;电镜下胞核和胞质内见大量病毒颗粒;病毒IE基因检测呈阳性。HELF细胞可被HCMV感染;而L-02细胞无论是单独,还是与HELF共培养,其病毒标志物均呈阴性,细胞结构保持正常。结论原代鼠肝细胞体外可受到MCMV直接感染,为CMV肝炎的体外研究提供成功的肝细胞感染模型;而正常人肝细胞系不能感染HCMV,推测其表面HCMV受体发生改变或丢失。     

MCMV感染同种异型皮肤移植小鼠间质性肺炎模型的建立

目的 建立小鼠巨细胞病毒(MCMV)经鼻腔急性感染同种异型皮肤移植BALB/c小鼠间质性肺炎模型.方法 ① 25只供体C57BL/6雌鼠与100只受体BALB/c雌鼠背部皮肤移植后,每只小鼠腹腔注射环孢素A(CsA,12 mg/kg),连续14 d.② 移植受体小鼠随机分为5组,其中4组每只鼻腔接种30 μl不同剂量MCMV悬液(102、103、104、105 PFU/只),另一组为正常对照组,小鼠鼻腔接种原代小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)悬液30 μl/只.在接种后第5、9、14、21天处死小鼠,无菌取肺组织分别做HE染色、透射电镜、PCR、RT-PCR检测MCMV Smith毒株的即刻早期(IE)和晚期基因糖蛋白B(gB)基因转录产物,并进行原位杂交和免疫组织化学实验.结果 104、105 PFU实验组小鼠肺组织有局灶性的病理损害,并发现感染后第14天肺组织病理改变最明显;透射电镜检测到疱疹样病毒颗粒;PCR、RT-PCR检测实验组MCMV IE和gB基因及其转录产物均为阳性;两组原位杂交和免疫组织化学检测均可见肺间质上皮细胞中存在病毒核酸和蛋白;并在感染后的21 d内,105 PFU组小鼠相比对照组有明显的临床表现.结论 成功建立同种异型皮肤移植后MCMV急性感染所致的小鼠间质性肺炎模型.     

原发性EB病毒感染患儿AIM2炎症小体通路的表达及与肝损伤的相关性

目的：探讨原发性EB病毒感染患儿黑素瘤缺乏因子2（AIM2）炎症小体通路的表达及与肝损伤的相关性。方法：纳入2020年1月至2021年6月82例原发性EB病毒感染住院患儿（入院时EB-VCA-IgM和EB-DNA检测均阳性）,按有无肝损伤分为肝功能异常组（52 例）与肝功能正常组（30 例）;同期选取门诊体检EBVIgG阳性（EB-VCA-IgG、EB-NA-IgG）而EB-VCA-IgM阴性的50例健康儿童为既往EBV感染组;门诊体检EBV-IgG和EBV-VCA-IgM均阴性的50例健康儿童为对照组。实时荧光定量PCR技术检测外周血单个核细胞AIM2炎症小体（AIM2、ASC和caspase-1）mRNA表达,酶联免疫吸附试验检测血清白细胞介素（IL）-1β、IL-18水平。结果：原发性EBV感染患儿外周血AIM2、ASC和caspase-1 mRNA的表达量以及IL-1β和IL-18水平均高于既往EBV感染组、对照组（P ＜0.05）,并且血清EBV-DNA载量与AIM2、ASC和caspase-1 mRNA表达及IL-1β和IL-18水平呈正相关（r =0.712、0.494、0.479、0.384、0.300,P ＜0.05）。原发性EBV感染组中,肝功能异常组、肝功能正常组患儿AIM2、ASC、caspase-1 mRNA表达量以及IL-1β、IL-18水平均高于对照组,以肝功能异常组更高,差异均有统计学意义（P ＜0.05）。AMI2 mRNA与ASC mRNA、caspase-1 mRNA表达量以及IL-1β、IL-18水平均呈正相关（r =0.718、0.729、0.548、0.529,P ＜0.05）。结论：AIM2炎症小体通路可能参与了原发性EBV感染, 并与EBV肝炎存在相关性。     

巴瑞替尼在新型冠状病毒感染中对Ⅰ型干扰素信号通路的影响

目的 探讨巴瑞替尼在新型冠状病毒感染中的抗病毒作用及对细胞因子表达的影响。方法 首先使用SARS-CoV-2 （MOI=0.1）感染Calu-3 细胞系,通过RT-qPCR分析新冠病毒感染过程中炎症因子（IL-6、IL-8、TNF-α和IL-1β）、干扰素β（IFN-β）和干扰素刺激基因（IFIT2）mRNA表达水平。下一步用巴瑞替尼预处理Calu-3细胞2 h,之后感染SARS-CoV-2 （MOI=0.1）,分别在感染后0、24、36、48 h时间点收集细胞,比较药物处理组和未处理组中上述基因mRNA表达水平及对病毒复制的影响作用。结果 SARS-CoV-2感染Calu-3细胞后,可诱导促炎因子（IL-6、TNF-a、IL-1β）和干扰素及干扰素刺激因子（IFN-β和IFIT2）mRNA水平发生不同程度的显著上调,病毒感染组在感染48 h相对于未感染组上调了近100倍或以上（P<0.000 1）,上述因子的mRNA表达水平随感染时间延长持续增加（P<0.001或P<0.000 1）。IL-8 mRNA水平上升幅度尽管无上述基因显著,但也呈现2~4倍的增加。巴瑞替尼预处理Calu-3细胞后,对胞内SARS-CoV-2的复制水平无显著抑制作用（P>0.05）。然而,该药物可显著抑制SARS-CoV-2感染诱导的IL-6和TNF-α水平的上调（分别下调5.25倍和3.90倍,P<0.01）,对IL-8和IL-1β的水平影响不大。另外,该药物也可明显下调病毒感染对IFN-β和IFIT2水平的增加（分别下调10.51倍和90.78倍,P<0.000 1）。结果 巴瑞替尼药物尽管对新冠病毒在细胞内病毒载量水平无显著抑制效应,但可不同程度抑制新冠病毒感染诱导的炎症因子的大量释放,尤其对干扰素和干扰素刺激基因表达的抑制作用更加显著。考虑到IFN-Ⅰ反应在病毒感染过程中发挥重要作用,临床必须谨慎使用巴瑞替尼治疗 COVID-19 患者。     

痹肿消汤对实验性关节炎大鼠血浆TNF-α及IL-1β的影响

目的：观察痹肿消汤（bizhongxiao decotion, BZXD）对实验性关节炎大鼠血浆肿瘤坏死因子α（tumornecrosis factorα,TNF-α）和白细胞介素-1β（interleukin-1β,IL-1β）的影响，探讨痹肿消汤治疗类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis，RA)的作用机制。方法：75只SD大鼠随机分为4组，皮下注射Ⅱ型胶原诱导实验性关节炎模型，采用放射免疫法检测各组大鼠不同时间血浆TNF-α和IL-1β水平。结果：造模大鼠88%出现关节炎症状；造模25d后，模型组、痹肿消汤组及甲氨喋呤组大鼠TNF-α和IL-1β水平明显高于正常组（P<0.05）；且模型组TNF-α和IL-1β水平明显高于痹肿消汤组及甲氨喋呤组（P<0.01）；随着时间延长，模型组TNF-α和IL-1β水平逐渐升高，痹肿消汤组及甲氨喋呤组则逐渐降低；而痹肿消汤组TNF-α和IL-1β水平低于甲氨喋呤组（P<0.05）。结论：TNF-α和IL-1β在RA滑膜组织炎症形成和发展中发挥着重要作用；痹肿消汤与甲氨喋呤均能下调血浆TNF-α和IL-1β水平，但痹肿消汤的作用优于甲氨喋呤。     

大蒜新素对巨细胞病毒感染小鼠脾细胞TGF-β1和IL-10的抑制作用

目的:研究大蒜新素对巨细胞病毒(CMV)感染鼠的免疫抑制性细胞因子TGF-β1和IL-10的影响,探讨大蒜新素的抗CMV机制。方法:建立非免疫抑制性鼠巨细胞病毒(MCMV)全身播散性感染小鼠模型;双抗体夹心ELISA法检测感染后1,3,7,14,28,45,60,75,90,120d正常对照组、病毒感染组和药物治疗组小鼠脾细胞培养上清中TGF-β1和IL-10水平的时序性变化。结果:MCMV感染后,TGF-β1和IL-10分泌均显著升高,并呈现出急慢性期两次高峰的特点。大蒜新素治疗对MCMV感染鼠各时间点TGF-β1水平均有下调作用,且对其急性期分泌高峰的抑制更明显。大蒜新素治疗对IL-10的急性期分泌高峰影响不明显,却显著下调慢性期IL-10的分泌高峰。结论:大蒜新素能显著抑制MCMV感染后TGF-β1和IL-10分泌,进而增强机体细胞免疫功能而有利于机体清除MCMV病毒,这可能是大蒜新素抗CMV的另一作用机制。     

TIPE2和炎性细胞因子在鼠动脉硬化斑块形成中的表达及其相互关系

目的 探讨新的免疫负调控分子TIPE2和炎性细胞因子在ApoE基因敲除鼠（ApoE-/-小鼠）动脉粥样硬化斑块形成中的表达及其相互关系，分析其在动脉粥样硬化中的作用。 方法 应用ApoE-/-小鼠构建动脉血管粥样硬化模型，普通C57野生型小鼠为对照组，通过对动脉血管HE染色及油红O染色判定斑块进展情况，并用RT-PCR的方法检测斑块局部TIPE2及白细胞介素-6（IL-6）、白细胞介素-12p40（IL-12p40）、转化生长因子-β（TGF-β）和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的表达，定量后分析其直线相关关系。结果 8周龄ApoE-/-小鼠高脂喂养至16周后，动脉已形成明显粥样硬化斑块，同周龄野生型C57小鼠血管壁内未见斑块形成；TIPE2在ApoE-/-小鼠无斑块期（8周）、斑块早期（16周）及斑块中晚期（24周）主动脉中表达均明显高于C57对照组；IL 6在ApoE-/-小鼠主动脉斑块各时期表达与C57小鼠相比均无明显变化；而在无斑块期IL 12p40、TGF-β及TNF-α表达较C57小鼠已明显升高（P<0.05）；在斑块早期时， TGF-β及TNF-α表达仍然高于对照组（P<0.05）；但斑块进展到中晚期，仅有TGF-β较同周龄C57小鼠表达量高（P<0.05）。进一步分析发现，TIPE2的表达和TNF-α呈正相关，相关系数为0.757（P=0.007），但与IL-6、IL-12p40和TGF-β表达无明显相关性。 结论 TIPE2在ApoE-/-小鼠的表达较C57对照组明显升高，且与TNF-α正相关, 提示TIPE2可能在动脉粥样硬化的发生中发挥作用。     

实验小鼠感染诺如病毒后组织病理变化及病毒含量分析

目的研究常用实验小鼠在人工感染小鼠诺如病毒后组织病理改变及病毒含量变化情况。方法使用KM、BALB/c、NIH、C57BL/6及BALB/c-nu等五个品系小鼠,每个品系分为对照组和感染组,感染组以灌胃方式接种小鼠诺如病毒液,对照组灌同等体积生理盐水,分别在感染后第7、14、21、28、55天采集肝、脾、肺、盲肠、结肠及小肠,每个组织取2份,分别进行病理诊断及病毒核酸含量检测,最后对结果进行汇总分析。结果肝、脾、肺病理改变总发生率分别为8%(10/125)、5.6%(7/125)和4%(5/125),盲肠、结肠及小肠均未发现病变,其中KM及BALB/c小鼠病变主要发生在肝、脾和肺,C57BL/6小鼠主要在肝和肺,NIH及BALB/c-nu小鼠主要在肝和脾。在所观察的实验鼠中KM小鼠较易发生肺的病变; KM及NIH小鼠发生病变较早,C57BL/6小鼠较晚。所有实验鼠盲肠、结肠MNV核酸阳性率均为100%(125/125),小肠、肝、脾、肺及血阳性率分别为71.2%(89/125),17.6%(22/125),39.2%(49/125),3.2%(4/125)和1.6%(2/125);病毒含量比较盲肠结肠小肠脾肺肝; BALB/c-nu小鼠结肠病毒含量显著高于其他品系小鼠(P0.01),其它品系小鼠各组织病毒含量无统计学差异; C57BL/6小鼠在感染MNV第14天盲肠及结肠病毒含量达峰值(P0.05),其它品系小鼠不同时间点病毒含量无统计学差异;组织器官病理检查及病毒核酸检测结果之间无相关性。结论小鼠诺如病毒感染会引起组织病变,建议进行病理有关的动物实验选择MNV阴性小鼠。     

汉坦病毒感染C57BL/6小鼠组织中特异性抗原的检测

目的通过检测汉坦病毒感染C57BL/6小鼠组织中特异性病毒抗原,以建立汉坦病毒感染动物的评价体系。方法将汉坦病毒陈株按照原病毒液、10-1、10-2三个滴度经肌肉注射感染C57BL/6小鼠,在感染后的第3、6、9、12、15天,分别取小鼠的心、肝、脾、肺、肾、脑等组织研磨后制成病毒悬液,以ELISA法检测各组织中的病毒特异性抗原。结果 C57BL/6小鼠感染汉坦病毒后短期内在其肝脏和脾脏可以检测到特异性抗原,随着时间的延长,这些抗原逐步消失。结论上述结果为建立汉坦病毒感染动物的评价体系提供了一种参考。     

当归拈痛汤治疗急性痛风性关节炎疗效和作用机制的小鼠实验研究

背景　急性痛风性关节炎（AGA）是多因素作用的结果,中药复方以多成分、多靶点作用而在降尿酸、缓解AGA症状等方面具有独特疗效,但具体作用机制尚不完全明确。目的　探讨当归拈痛汤治疗AGA的疗效和作用机制。方法　本实验于2020-08-17至2020-10-07实施。适应性饲养1周后将30只10~12周龄SPF级雄性C57BL/6小鼠编号并采用随机数字表法分为对照组、溶剂组和DGNTT组,每组10只。对照组小鼠在双侧足掌深层跖跗关节周围注射磷酸盐缓冲液,溶剂组和DGNTT组小鼠在双侧足掌深层跖跗关节周围注射3%尿酸单钠悬液诱导造模;造模完成后对照组和溶剂组小鼠予以0.9%氯化钠溶液灌胃1周,DGNTT组小鼠予以当归拈痛汤中药液灌胃1周。比较三组小鼠治疗前后体质量,造模前、造模后6 h、治疗后1~7 d足掌厚度增长百分比,治疗后7 d注射足部组织白介素1β（IL-1β）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）、诱导型一氧化氮合酶（iNOS）mRNA相对表达量及血尿酸浓度。结果　三组小鼠治疗前后组间、组内体质量比较,差异均无统计学意义（P>0.05）。时间与方法在足掌厚度增长百分比上存在交互作用（P<0.001）;时间、方法在足掌厚度增长百分比上主效应显著（P<0.001）。溶剂组和DGNTT组小鼠造模后6 h及治疗后1~7 d足掌厚度增长百分比大于对照组,DGNTT组小鼠造模后6 h及治疗后1~5 d、7 d足掌厚度增长百分比小于溶剂组（P<0.05）。溶剂组和DGNTT组小鼠治疗后7 d注射足部组织IL-1β、TNF-α、iNOS mRNA相对表达量高于对照组,DGNTT组小鼠治疗后7 d注射足部组织IL-1β、TNF-α、iNOS mRNA相对表达量低于溶剂组（P<0.01）。DGNTT组小鼠治疗后7 d血尿酸浓度低于对照组、溶剂组（P<0.01）。结论　当归拈痛汤可有效缓解AGA小鼠足爪炎性肿胀程度,下调炎性因子IL-1β、TNF-α、iNOS mRNA的表达,降低血尿酸浓度,是能够解决AGA多个核心问题的有效方剂且安全性较高。     

4种炎症因子在牙周炎与冠心病相关性中的作用

目的：探讨4种炎症因子IL-1β、IL-6、TNF-α、MCP-1在牙周炎与冠心病（CHD）相关性中的可能角色,进一步探索牙周炎和CHD的相关机制。方法：选取2015年7月至2016年5月就诊于温州市中医院口腔科及温州市人民医院心内科的129例研究对象,其中健康者39名,单纯中重度牙周炎患者35例,单纯CHD患者31例,CHD伴中重度牙周炎患者24例,采用定制的Procarta Plex多因子ELISA试剂盒检测每位受检者的血清IL-1β、IL-6、TNF-α、MCP-1含量。结果：经协方差分析排除危险因素BMI和血压的作用后,各组血清IL-1β、IL-6、TNF-α、MCP-1的差异有统计学意义（P＜0.05）,CHD伴中重度牙周炎组最高。除MCP-1以外,中重度牙周炎组和CHD组血清IL-1β、IL-6、TNF-α水平均高于健康组。结论：中重度牙周炎患者升高的血清IL-1β、IL-6、TNF-α水平,可能促进CHD的发生发展。     

IL-1β和TNF-α对软骨细胞基质降解的影响及相关机制研究

目的研究白介素-1β（IL-1β）和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）对关节软骨细胞外基质降解的作用及相关分子机制。方法体外培养大鼠原代关节软骨细胞,单独或联合使用IL-1β和（或）TNF-α刺激软骨细胞,分别设为IL-1β刺激组、TNF-α刺激组、IL-1β和TNF-α联合刺激组;另设无任何刺激的对照组。在细胞培养24、48、72h时点,采用倒置显微镜观察软骨细胞外基质的变化;采用Real-TimePCR法检测基质金属蛋白酶-13（MMP-13）、蛋白聚糖降解酶-1（Adamts-4）和蛋白聚糖降解酶-2（Adamts-5）mRNA的表达。结果细胞在培养48、72h时点,显微镜观察显示对照组与TNF-α刺激组的软骨细胞外基质降解情况无明显差异;IL-1β刺激组、IL-1β和TNF-α联合刺激组细胞外基质失染、降解,细胞形态缩小,细胞间隙增宽。与对照组比较,细胞培养24h时点,IL-1β刺激组MMP-13、Adamts-4和Adamts-5mRNA的表达显著上调（P〈0.01）;而在培养48、72h时点有所下调。IL-1β和TNF-α联合刺激组与IL-1β刺激组比较,在培养各时点,MMP-13、Adamts-4和Adamts-5mRNA表达差异均无统计学意义（P〉0.05）。结论 IL-1β诱导软骨细胞产生大量的MMP-13、Adamts-4和Adamts-5而直接降解软骨细胞外基质;TNF-α可能不直接引起软骨细胞外基质的降解。     

抑制SCD1对被动吸烟小鼠肺部炎症的影响

目的 研究硬脂酰辅酶A去饱和酶1（stearoyl-CoA desaturase 1,SCD1）对被动吸烟小鼠肺部炎症水平的影响。方法 将C57BL/6小鼠随机分为对照（CON）组、SCD1抑制剂（CAY）组、吸烟（Smoke）组及吸烟加抑制剂（Smoke+CAY）组,每组11~14只,记录各组小鼠体重及肝脏系数。RT-qPCR及Western blot检测CON组与Smoke组内SCD1表达水平。肺组织HE病理染色、肺泡灌洗液（bronchoalveolar lavage fluid,BALF）蛋白浓度测定及细胞计数比较肺部炎症损伤水平。ELISA检测BALF中TNF-α、IL-6、IL-1β水平。电化学发光法检测血浆中IL-4、IL-10、IL-13水平。结果 被动吸烟小鼠肺内SCD1水平升高。给予SCD1抑制剂后,小鼠体重减轻、肝脏系数降低。Smoke+CAY组小鼠较其他组肺部炎症改变明显,BALF中蛋白浓度、细胞计数、TNF-α、IL-6、IL-1β水平均明显升高。各组血浆中IL-4、IL-10、IL-13水平变化不明显。结论 吸烟后小鼠肺内SCD1水平升高,且抑制SCD1会加重被动吸烟小鼠肺部炎症损伤。     

三个品系小鼠流感病毒气溶胶感染模型的比较

[摘要] 目的 通过气雾攻击产生气溶胶的感染方式对三个品系的小鼠分别进行感染,比较三个品系小鼠在感染过程中的感染差异,从而对三个品系小鼠流感模型的特点进行分析,为流感发病机制的研究及疫苗和药物的开发选择合适的感染模型提供参考。方法 选用A/Puerto Rico/8/34（H1N1）病毒株,采用气雾攻击的方法感染近交系C57BL/6、BALB/c和远交群 ICR三个品系的小鼠,每日称小鼠体重,肉眼观察小鼠状态,分别于感染后3d,7d,14d处死小鼠,取肺脏称其湿重,进行肺脏的病毒测定及病理观察。结果 三个品系小鼠均可感染,其中C57BL/6小鼠的存活率低于其他两个品系,3d 的肺指数和病毒载量均明显高于ICR小鼠（P<0.05),镜下病理结果显示较其他两个品系也更明显。BALB/c小鼠与其他两个品系小鼠相比,体重在后期的恢复最慢,存活率比 C57BL/6高但比ICR低;肺指数和病毒载量与其他两个品系相比没有显著差异;镜下病理改变相似,但弱于C57BL/6强于ICR。ICR小鼠的发病进程与其他两个品系小鼠基本相似,但体重、存活率、肺指数、病毒载量及镜下病理改变等指标均弱于其他两个品系。结论 三个品系小鼠均可建立流感气溶胶模型,但感染后的三个模型各有特点,在实验中可以根据不同的研究目的来选用合适的小鼠品系建立模型。     

炎症因子在大鼠脑缺血后MMP和TIMP-1致脑损伤中的作用

【目的】 探讨肿瘤坏死因子-α(TNF-α)?白细胞介素1β(IL-1β)?基质金属蛋白酶-3(MMP-3)?基质金属蛋白酶-9(MMP-9)和基质金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP-1)在大鼠脑缺血再灌注后的动态变化及特点,阐明TNF-α?IL-1β在脑缺血大鼠MMP和TIMP-1引起脑损伤中的作用?【方法】雄性SD大鼠56只随机分为假手术组和缺血2 h再灌注6?12?24?48?72 h和7 d组?运用线栓法复制大鼠局灶性脑缺血再灌注模型,采用ELISA法测定脑组织和血清TNF-α和IL-1β含量,及脑组织中MMP-3?MMP-9和TIMP-1的含量?【结果】 与假手术组比较,血清和脑组织TNF-α和IL-1β含量于缺血再灌注6 h明显增加(4.38 ± 0.73 vs 2.63 ± 0.14?5.28 ± 0.71 vs 3.46 ± 0.47;22.34 ± 3.56 vs 12.13 ± 4.26?9.56 ± 0.85 vs 4.23 ± 0.83; P < 0.05),12 h达到高峰,随后各时间点表达开始下降,至7 d与假手术组比较无明显差别?脑组织中MMP-3?MMP-9含量于再灌注6 h开始升高,24 h明显升高(P < 0.05),48 h达高峰,随后逐渐下降,至再灌注7 d与假手术组比较无统计学意义,而脑组织中TIMP-1含量在再灌注各时间点均低于假手术组(P < 0.05)?且血清和脑组织中TNF-α和IL-1β含量与MMP-3?MMP-9的含量呈明显正相关(P < 0.05),与TIMP-1含量呈负相关(P < 0.05)?【结论】 MMP-3?MMP-9在脑缺血大鼠缺血再灌注早期水平即升高,提示MMP-3和MMP-9在脑缺血再灌注的发病过程中起着重要的作用,炎症因子TNF-α和IL-1β可通过促进脑组织中MMP-3?MMP-9的生成,抑制TIMP-1的生成,进一步加重缺血后脑损伤?     

益母草碱在大鼠急性内毒素性葡萄膜炎模型中的保护作用

 目的  建立SD大鼠急性内毒素性葡萄膜炎(endotoxin induced uveitis,EIU)模型,研究益母草碱(leonurine,SCM-198)是否对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)所致眼部结构、功能损伤具有保护作用,并探讨其作用机制。方法  体重180～200 g正常雄性SD大鼠36只,随机分为3组。实验组:又分为4个亚组,分别以每日每千克体重10、20、40、80 mg的SCM-198生理盐水溶液灌胃,共21天;阴性对照组:每日以0.9% NaCl溶液10 mL/kg体重灌胃;阳性对照组:以每日每千克体重0.5 mg的地塞米松(dexamethasone,DEX)磷酸钠生理盐水溶液灌胃。组间饲养无差异,每7天测体重。第18天灌胃后,全部大鼠全麻并充分暗适应后行全视网膜电图(electroretinogram,ERG)检测;第21天灌胃后以1 g/L的伤寒沙门氏菌(S.typhi) LPS生理盐水溶液0.1 mL于全部大鼠左足底注射造模,造模后24 h行全麻下ERG检测,裂隙灯下行双眼炎症评分,取左眼房水-80 ℃冻存后处死动物,取右侧眼球固定后石蜡包埋切片,HE染色,光学显微镜下观察,免疫组织化学(immunohistochemistry,IHC)染色检测肿瘤坏死因子-α(tumour necrosis factor-α,TNF-α)、细胞间黏附分子-1(intercellular cell adhesion molecule-1,ICAM-1)表达水平;对留取的房水样本用BCA法测定蛋白浓度,Western blot检测房水TNF-α、白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、IL-6、ICAM-1水平;以SPSS 19.0软件处理所得数据,综合分析SCM-198对EIU模型大鼠的保护作用。结果  实验组、阴性对照组第21天时体重均显著高于阳性对照组(P<0.05)。实验组裂隙灯下炎症评分低于阴性对照组、高于阳性对照组;实验组病理切片炎症程度介于阴性对照组和阳性对照组之间;SCM-198 20 mgkg-1d-1组造模后0.01 cd下ERG a波波幅显著低于造模前(P<0.05),亦低于其他组造模后;SCM-198 10 mgkg-1d-1组房水TNF-α、IL-6和IL-1β表达低于其他各组。结论  SCM-198灌胃对EIU模型大鼠具有抗炎保护作用,且常规剂量下未见明显全身不良反应;可在一定程度上保护视网膜功能,减轻炎症反应及葡萄膜结构损伤;NF-κB在其抗炎效应中地位重要。SCM-198对炎症相关性眼病治疗具有潜在价值,但最佳给药方式、剂量等仍需进一步探索。     

A型肉毒素对带状疱疹后神经痛小鼠炎性神经递质表达的影响

目的：观察A型肉毒素（BTX-A）对带状疱疹后神经痛（PHN）小鼠炎性神经递质表达的影响，探讨其可能的作用机制。方法：将36只PHN雄性C57小鼠随机分成A、B、C 3组，每组12只。A组在疱疹部位注射0.9%氯化钠溶液；B组在疱疹部位注射BTX-A（2 U/kg）；C组在L5背根神经节（DRG）处注射BTX-A（2 U/kg）。连续干预7 d后处死小鼠，取小鼠DRG和相应的脊髓节段，采用RT-qPCR和ELISA法检测各组小鼠DRG和脊髓中炎性神经递质TNF-α、IL-1β、神经激肽A的mRNA表达，采用Western blot检测各组小鼠DRG和脊髓中Na1.3、Na1.8通道蛋白表达。结果：RT-qPCR检测结果显示，与A组比，B组和C组炎性神经递质TNF-α、IL-1β、神经激肽A的mRNA表达水平显著降低（P＜0.05），但B和C 2组间比较差异无统计学意义。ELISA法检测结果显示，与A组比，B组和C组TNF-α、IL-1β、神经激肽A的蛋白含量显著降低（P＜0.05），但B和C 2组间比较差异无统计学意义。Western blot结果显示，与A组比，B组和C组Na1.3、Na1.8通道蛋白表达显著降低（P＜0.05），但B和C 2组间比较差异无统计学意义。结论：BTX-A能有效抑制PHN，其作用机制可能是通过降低通道蛋白Na1.3、Na1.8的表达，抑制炎性神经递质TNF-α、IL-1β、神经激肽A的mRNA表达水平和蛋白含量。     

脑舒明方对局灶性脑缺血大鼠NF-κB，TNF-α和IL-1β表达的影响

目的：探讨脑舒明方对脑缺血大鼠的影响。方法：采用大脑中动脉阻塞法复制大鼠中脑动脉闭塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)模型,将造模成功大鼠随机分为模型组(n=36)、脑舒明方低剂量组(n=36)、中剂量组 (n=36)及高剂量组(n=36),另设正常组(n=12)及假手术组(n=12)。每组分别于造模后3,7,14 d处死并检测相关指标, 参照Ayelet Levy 14分评分法进行神经功能损伤评分,采用免疫组织化学检测核转录因子(nuclear factor kappa-B,NF- κB)/p50,NF-κB/p65,肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)和IL-1β的蛋白质表达;采用实时荧光定量PCR 检测NF-κB,TNF-α和IL-1β的mRNA表达。结果：与假手术组比较,各个时间点的MCAO模型组及脑舒明方各剂量组 大鼠炎性指标显著增强(均P<0.05或P<0.01),都有神经功能障碍,但随着时间推移炎症指标及神经功能障碍会逐渐改 善。用药治疗3,7,14 d时,分别与模型组比较,脑舒明方各剂量组大鼠的神经功能评分均得到改善,NF-κB/p50, NF-κB/p65,TNF-α和IL-1β的蛋白质表达,以及NF-κB,TNF-α和IL-1β的mRNA表达均降低,差异均有统计学意义(均 P<0.05或P<0.01)。结论：脑舒明方可减轻脑缺血大鼠的损伤。