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相似文献
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1.
目的:体外观察正常人树突状细胞(dendritic cells,DC)疫苗诱导免疫效应细胞对胰腺癌细胞系(PC3)的凋亡和抑制作用.方法:用淋巴细胞分离液分离抗凝新鲜全血以获得单核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMC),用贴壁法获取DC和去DC的单核细胞(即免疫效应细胞),并分别用人粒/巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、人白介素4(IL-4)、人肿瘤坏死因子(TNF-α)、PC3肿瘤相关抗原(PC3TAA)和人白介素2(IL-2)培养正常人DC和免疫效应细胞,6 d后将DC和免疫效应细胞混合培养1 d并计数细胞.观察DC生长状况,检测DC表型(CD1a、CD80、CD83、CD86).MTT法检测DC诱导免疫效应细胞对PC3的抑制作用,TdT法检测培养上清液对PC3细胞的凋亡作用.结果:体外多种细胞因子和肿瘤相关抗原能有效引起DC增殖,并高表达CD80、CD83、CD86;体外实验中,DC疫苗诱导免疫效应细胞对PC3的最大抑制(杀伤)效率为98.1%;DC培养上清液和DC混合免疫效应细胞培养上清液均能有效地引起PC3凋亡.结论:DC在抗胰腺肿瘤中有重要作用.  相似文献   

2.
骆高江  方明  姜昌浩 《浙江医学》2014,(21):1771-1774
目的:研究雷帕霉素对人树突状细胞(DC)免疫功能的影响。方法分离外周血单个核细胞,在含粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(rhGM- CSF)、IL-4、胎牛血清及有或无雷帕霉素的培养条件下制备DC。用流式细胞仪检测DC表型(CD1a、CD83、CD86、HLA- DR);混合淋巴细胞反应(MLR)检测DC对同种异体T淋巴细胞的刺激能力;流式细胞仪检测DC吞噬功能和凋亡细胞数;ELISA法测定MLR上清液中的细胞因子。结果与对照组比较,经雷帕霉素处理的DC表面CD1a、CD83、CD86、HLA- DR的表达明显降低(均P<0.01);对T淋巴细胞刺激的能力下降(P<0.01);细胞吞噬能力下降(P<0.01);凋亡细胞数增加(P<0.01),MLR中细胞因子(TNF-α、IL-10、IL-12)浓度降低(均P<0.01)。结论雷帕霉素对人树突状细胞免疫功能有明显的抑制作用,可能是其防止冠状动脉支架术后再狭窄的机制之一。  相似文献   

3.
PMA是一种强促癌剂,对其促癌机理已有大量深入的研究.我们以往的工作表明,PMA对细胞免疫功能也有多方面的影响。其中,PMA对小鼠脾粘附细胞的免疫扶佐功能的抑制作用尤为明显.树突状细胞(deadritic cell,DC)是一类有很强免疫扶佐活性的细胞群。本文报道,从小鼠脾粘附细胞中分离纯化DC,观察经PMA预处理的DC在初级混合淋巴细胞反应(I°MLR)和氧化物刺激的淋巴细胞增殖反应中的免疫扶佐功能的改变.  相似文献   

4.
目的:研究Lewis肺癌细胞裂解物对小鼠树突状细胞(DC)的免疫抑制作用。方法:反复冻融法制备Lewis肺癌细胞裂解物,骨髓冲洗提取C57/BL6小鼠DC,GM-CSF、IL-4体外诱导培养DC,ELISA检测肿瘤细胞裂解物(TCL)中透明质酸(HA)含量,ELISA检测DC培养上清液中IL-12和IL-10水平。结果:经检测,Lewis肺癌细胞TCL中含有HA,其含量为42 mg/ml。将这种TCL作用于C57/BL6小鼠DC,同对照组相比,DC的IL-12分泌水平显著下降(P<0.01),而IL-10的分泌水平显著提高(P<0.01),这符合免疫耐受DC细胞因子分泌特点。在用Pep-1抗体封闭DC表面的HA受体CD44后,DC的IL-12、IL-10分泌水平则恢复至同对照组相同的水平(P>0.05)。结论:Lewis肺癌细胞裂解物中含有HA。通过这种物质,肺癌细胞裂解物可以诱生鼠源免疫耐受性DC,从而抑制DC的免疫活性。  相似文献   

5.
Tan G  Wang ZY  Yin S 《中华医学杂志》2006,86(14):943-946
目的 探讨白细胞介素23(IL-23)基因转染的树突状细胞(DC)负载凋亡癌细胞抗原后诱导的免疫应答对小鼠胰腺癌的治疗作用。方法 克隆并构建IL-23基因真核双表达载体,转染DC后检测其表型及自分泌IL-23和IL-12的能力;观察各组脾脏T淋巴细胞γ干扰素(IFN-γ)和IL4的分泌量以及DC诱导的细胞毒T淋巴细胞(CTL)对胰腺癌细胞的杀伤作用。转染DC并负载肿瘤抗原后制备成疫苗对小鼠抗肿瘤的免疫保护作用和肿瘤抑制作用。结果基因测序证实IL-23基因克隆及双表达载体构建成功,转染后DC对共刺激分子MHC-Ⅰ和MHC-Ⅱ的表达增强;DC自分泌IL-23和IL-12的能力显著增强。DC介导的免疫应答促进了IFN-γ生成型Th1细胞的产生,IL-23转染组每24hIFN-γ的分泌(最高为535pg/ml/10^6)与其他各组比较(对照组每24h为60pg/ml/10^6),P〈0.01;转染的DC疫苗在体内诱导出高水平的CTL活性(P〈0.05)。接种IL-23修饰DC疫苗后小鼠的免疫防御能力显著增强;对肿瘤的生长有明显抑制作用,治疗组荷瘤鼠生存期与其他各组比较差异有显著意义。结论IL-23使DC抗原递呈能力更强,IL-23修饰DC疫苗可强化宿主针对特异肿瘤的CTL免疫应答,使宿主不仅产生防御性免疫反应而且增强自动免疫能力。  相似文献   

6.
目的 探讨乳酸杆菌在树突状细胞(DC)诱导抗肿瘤免疫杀伤中的作用及其意义.方法 采用混合淋巴细胞反应(MLR)、ELISA法分别测定经乳酸杆菌作用后的冻融宫颈癌抗原负载DC体外刺激T细胞的增殖情况以及上清液中白细胞介素12(IL-12)与γ干扰素(IFN-γ)的含量;噻唑蓝法(MTT法)测定乳酸杆菌冻融抗原致敏DC激活的细胞毒T淋巴细胞(CTL)对宫颈癌HeLa细胞的杀伤作用.结果 与单纯冻融抗原、单纯乳酸杆菌致敏DC比较,经乳酸杆菌作用后的冻融宫颈癌抗原负载DC在体外明显增强T细胞的增殖能力(P<0.05)、增加上清液中IL-12与IFN-γ的含量(P<0.05);与单纯冻融抗原、单纯乳酸杆菌致敏DC比较,乳酸杆菌明显增强冻融抗原致敏DC激活的CTL对宫颈癌Helm细胞的杀伤力(P<0.05),结论乳酸杆菌可以增强树突状细胞诱导的对宫颈癌细胞的肿瘤免疫杀伤作用.  相似文献   

7.
目的甲胎蛋白作为一种肿瘤特异性抗原,是临床上诊断肝癌的重要指标。本研究中,检测AFP特异性T细胞的体外抗肿瘤免疫活性。方法采用经过AFP抗原决定簇肽刺激或慢病毒转染的的树突状细胞(dendriticcells,DC),活化AFP特异性的CD4+T细胞和CD8+T细胞,并在体外检测这群T细胞对人肝癌细胞HepG2的杀伤活性。结果本研究结果显示,AFP特异性的CD4+T细胞和CD8+T细胞体外能有效杀伤HepG2细胞,上调培养体系中IL-2、IFN-γ、TNF-α、穿孔素、颗粒酶的水平,对于T细胞活化的负调控因子IL-10,具有显著的抑制作用。结论经DC活化后的AFP特异性T细胞具有显著的体外抗肿瘤免疫活性,有望成为肝细胞癌的免疫治疗新方法。  相似文献   

8.
目的:探讨落新妇苷对小鼠骨髓来源树突状细胞(dendritic cell, DC)成熟和免疫功能的影响。 方法:采用体外条件培养法得到小鼠骨髓来源未成熟树突状细胞,加入脂多糖刺激细胞成熟。落新妇苷(低浓度25 μg/mL、中浓度50 μg/mL、高浓度100 μg/mL)处理细胞后,流式细胞仪分析各组细胞凋亡,细胞表面主要组织相容性抗原复合物分子Ⅰa和共刺激分子CD40、CD80和CD86表达;异硫氰酸荧光素标记葡聚糖内吞实验分析各组DC抗原吞噬功能;酶联免疫吸附测定法检测各组DC培养液上清白细胞介素12亚单位p40(p40 subunit of interleukin-12,IL-12p40)水平;氚-胸腺嘧啶核苷掺入法检测体外混合淋巴细胞反应(mixed lymphocyte reaction, MLR)中各组DC刺激同种反应性T细胞的增殖能力,酶联免疫吸附测定法检测MLR上清IL-2、IL-4、IL-10、γ干扰素水平。 结果:各组DC凋亡率差异无统计学意义(P>0.05)。与脂多糖组相比,高、中、低浓度落新妇苷组细胞表面主要组织相容性抗原复合物分子Ⅰa和共刺激分子表达明显降低,抗原吞噬能力明显升高,分泌IL-12p40明显减少,刺激同种反应性T细胞增殖的能力显著下降(P〈0.05)。与脂多糖组相比,高、中、低浓度落新妇苷组MLR上清中IL-2和γ干扰素水平明显降低(P〈0.05),而IL-4、IL-10水平比较,差异无统计学意义(P>0.05)。 结论:落新妇苷(25、50、100 μg/mL)能够剂量依赖性地抑制体外培养小鼠骨髓来源DC的成熟,并对其免疫功能具有一定的负性调节作用。  相似文献   

9.
目的:探讨人慢性髓系白血病K-562来源的树突状细胞的免疫功能。方法:用细胞因子粒-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)及IL4在体外诱导培养K-562细胞,获得树突状细胞(DC)检测其细胞表型,并观察其诱导的细胞毒T淋巴细胞(CTL)体外抗肿瘤效应。用ELISA法测定DC培养及DC与外周血单个核细胞共培养上清液中IL-12及IFN-γ的量。结果:联合GM-CSF及IL-4可诱导K-562细胞分化为树突状细胞,K-562DC体外激活的CTL对K-562细胞具有特异性细胞毒活性;诱导DC培养上清及DC与外周血单个核细胞共培养上清测出一定量IL-12及IFN-β。结论:人慢性髓系白血病K-562来源的树突状细胞表达抗原提呈细胞表型,具有诱导CTL反应和分泌IL—12以及促进T细胞分泌IFN-γ的作用。  相似文献   

10.
目的:探讨RNAi对DC表面抗原CD80、CD86表达的缄默作用及siRNA干扰后树突状细胞(DC)诱导T淋巴细胞无能的机制.方法:体外转录合成针对CD80、CD86 mRNA序列特异性siRNA;半定量RT-PCR、流式细胞仪检测转染前后DC中CD80、CD86 mRNA表达水平以及细胞表面抗原CD80、CD86表达情况;混合淋巴细胞培养观察siRNA干扰对DC刺激T淋巴细胞增殖能力的影响,并以半定量RT-PCR测定混合淋巴细胞培养反应体系中IL-2、IFNγ、IL-10 mRNA表达水平.结果:siRNA转染DC后,CD80、CD86 mRNA表达水平明显减低,细胞表面抗原CD80、CD86阳性率由84%、67%下降至35%、30%;混合淋巴细胞培养结果显示,siRNA干扰后DC对T淋巴细胞刺激指数明显下降(P<0.01),且反应体系中IL-2、IFNγ mRNA表达水平明显降低(P<0.01),同时IL-10 mRNA表达水平增高.结论:RNAi可高效、特异地抑制CD80、CD86表达.经RNAi敲减后DC激活异系淋巴细胞的能力降低,合成、分泌IL-2能力下降,并诱使Th细胞分化方向发生免疫偏离,诱导T细胞无能.  相似文献   

11.
目的 研究通过RNA干扰技术阻断外周单核细胞来源的树突细胞(DC)内的Smad3,并在转化生长因子β1(TGF-β1)作用下对DC的成熟和免疫抑制作用的影响.方法 设计针对Smad3特异性小干扰RNA(siRNA),利用RNAiMAX转入DC,并用RT-PCR检测转染效果.实验分Control-DC组、TGF-β1-Control-DC组、TGF-β1-Negative siRNA-Smad3 DC组和TGF-β1-siRNA-Smad3 DC组.流式检测各组DC成熟表型的变化,ELISA检测各组DC上清白细胞介素12(IL-12)的水平,CCK-8法检测DC刺激同种异体T细胞增殖的能力.结果 TGF-β1-siRNA-Smad3 DC组表面成熟标志CD80、CD83、CD86、HLA-DR及IL-12分泌水平明显高于TGF-β1-Control-DC组和TGF-β1-Negative siRNA-Smad3 DC组(P<0.05),且TGF-βNegative siRNA-Smad3 DC组刺激同种异体T细胞增殖的能力显著增强.结论 通过阻断DC的Smad3表达,可以逆转TGF-β1对DC成熟和免疫功能的抑制.  相似文献   

12.
目的观察复方苦参注射液对晚期合并恶性腹腔积液肿瘤患者的生活质量的影响。方法选择50例晚期肿瘤合并恶性腹腔积液患者,根据治疗方法不同分为2组:观察组(复方苦参加支持疗法)、对照组(支持治疗),观察组在支持治疗基础上加用复方苦参注射液腹腔灌注,每次100 mL,24 h重复l次,2周为1疗程,2疗程后评价2组患者腹水缓解率、KPS评分、NRS评分变化及外周血淋巴细胞免疫表型(CD3+、CD4+、CD8+及CD4+/CD8+)的变化。结果与对照组比较,观察组在腹水缓解率、KPS评分、NRS评分方面差异有统计学意义(P〈0.01),外周血CD3+、CD4+、NK、CD4+/CD8+比值增高,CD8+比例降低,与对照组比较差异有统计学意义(P〈0.01)。结论复方苦参注射液腹腔局部灌注在晚期恶性腹水肿瘤患者的姑息治疗上,可激活患者的免疫功能,改善生存质量。  相似文献   

13.
目的 观察自体CIK细胞过继免疫治疗晚期恶性肿瘤患者后,生活质量及相关指标的变化.方法 从患者外周血中分离出单个核细胞,加入IFN-γ、抗CD3单抗、IL-2等细胞因子,扩增后CIK细胞分4次回输患者体内,观察患者生活质量、毒副反应及相关指标的改变.结果 38例接受CIK治疗的患者疼痛缓解、体重增加、睡眠改善等明显,毒副反应轻微,差异有统计学意义(P﹤0.05),并且有效率(CR+PR+MR )为66%,肿瘤标记物下降,患者外周血中CD3、CD4 T细胞和NK细胞比例均显著提高(P﹤0.05).结论 自体CIK细胞过继性免疫疗法能显著提高肿瘤患者生活质量,改善临床症状,提高患者免疫功能,对晚期肿瘤病人有积极意义.  相似文献   

14.
人卵巢癌细胞系SKOV3对树突细胞免疫功能及凋亡的影响   总被引:1,自引:2,他引:1  
目的:探讨人卵巢癌细胞系SKOV3对树突细胞(DC)免疫表型、细胞因子分泌及凋亡的影响。方法:采用外周血单个核细胞培养DC,以PBS溶液为对照,应用流式细胞仪检测人卵巢癌细胞系SKOV3培养上清液作用于DC后,其凋亡的发生率、免疫表型的表达,应用酶标记免疫吸附分析法(ELISA)检测DC白细胞介素-12(IL-12)的分泌情况。结果:人卵巢癌细胞系SKOV3培养上清液作用于DC后,可诱导DC发生凋亡,DC的CD80、CD83及人类白细胞(位点)DR抗原(HLA-DR)等表型明显下调,IL-12分泌明显下降,与对照组相比差异显著(P<0.05),且IL-12分泌随SKOV3作用时间的延长,其抑制作用更加明显。结论:人卵巢癌细胞系SKOV3可明显抑制DC的免疫功能,并诱导其凋亡。  相似文献   

15.
衡燕春  马珊珊  马玲 《蚌埠医学院学报》2021,46(6):767-770, 774
目的探究调节性B细胞(Bregs)在卵巢癌病人外周血中的表达频率及其与FIGO分期间的关系,并分析其与调节性T细胞(Tregs)及IL-10之间的相关性。方法将卵巢癌(23例)和卵巢良性肿瘤病人(26例)纳入研究,流式细胞术检测外周血CD19+CD24hiCD38hiBreg和CD4+CD25+Treg细胞表达频率及血清IL-10表达水平。并分析两种细胞与FIGO分期、IL-10浓度的关联及两者间的相关性。结果卵巢癌病人外周血中Bregs、Tregs百分比高于卵巢良性肿瘤病人(P < 0.01),并与FIGO分期密切相关,卵巢癌Ⅲ期+Ⅳ期病人高于Ⅰ期+Ⅱ期(P < 0.01);卵巢癌病人血清IL-10高于卵巢良性肿瘤病人(P < 0.01)。相关性分析显示:卵巢癌病人外周血Breg细胞与Treg细胞比例呈正相关关系(P < 0.05);卵巢癌病人血清IL-10与Bregs、Tregs细胞均呈正相关关系(P < 0.05)。结论Bregs和Tregs在卵巢癌病人外周血中所占比例显著升高,能够通过分泌IL-10参与卵巢癌免疫反应,这可能为卵巢癌的免疫治疗提供新靶点。  相似文献   

16.
目的:检测恶性腹水中CD8+CD28-NRP-1+T细胞的表达水平,并探讨其临床价值。方法:采用流式细胞仪检测24例肝硬化腹水、20例结核性腹水、28例恶性腹水中CD8+CD28-NRP-1+T细胞的表达水平。结果:恶性腹水组CD8+CD28-NRP-1+T细胞的表达水平均明显高于肝硬化腹水组及结核性腹水组(P〈0.01)。结论:CD8+CD28-NRP-1+T细胞的表达水平在良恶性腹水中存在显著差异,可作为判定良恶性腹水的辅助诊断指标。  相似文献   

17.
目的:通过检测病人腹水乙醛脱氢酶1(ALDH1)的水平,探讨ALDH1在良恶性腹水鉴别诊断上的价值和意义。方法:随机收集恶性腹水32例和良性腹水22例,采用酶联免疫吸附法检测腹水中ALDH1水平,分析ALDH1水平在良恶性腹水中的差异,以及在不同原发疾病中的情况。结果:恶性腹水组年龄较良性腹水组高(P<0.05),但2组间性别分布差异无统计学意义(P>0.05)。良性及恶性腹水组ALDH1水平在不同年龄和性别间差异均无统计学意义(P>0.05)。恶性腹水中ALDH1的水平明显高于良性腹水组(P<0.05)。腹水ALDH1在几种不同原发肿瘤中的水平在肝癌中最高(P<0.05),在消化道癌、子宫内膜癌、卵巢癌、胰腺癌组之间的水平差异均无统计学意义(P>0.05)。良性腹水中肝硬化腹水ALDH1水平较结核性腹膜炎腹水明显升高(P<0.05)。结论:ALDH1在良恶性腹水的鉴别诊断中有重要意义,对临床寻找不明原因腹水的原发疾病具有重要指导意义。  相似文献   

18.
王勇 《蚌埠医学院学报》2016,41(11):1452-1454
目的:探讨晚期恶性肿瘤患者化疗前后外周血T淋巴细胞亚群(CD3+、CD3+CD4+、CD3+CD8+)数值的变化及临床意义。方法:收集50例晚期恶性肿瘤患者,根据病种及临床分期进行标准方案化疗;采集患者首次化疗前和2个周期化疗后外周血标本,通过流式细胞仪检测T淋巴结细胞亚群在化疗前后的数值及比值,分析T淋巴细胞亚群水平变化。结果:50例晚期恶性肿瘤患者2个周期化疗后外周血CD3+、CD3+CD4+T淋巴细胞数目均显著低于首次化疗前(P<0.01)。CD3+CD8+T淋巴细胞数目在2个周期化疗后均高于首次化疗前(P<0.01);CD3+CD4+/CD3+CD8+细胞比值在2个周期后均明显降低(P<0.01)。结论:晚期恶性肿瘤患者可以通过监测外周血中T淋巴细胞亚群数目评估患者免疫功能状态,并指导治疗及判断预后。  相似文献   

19.
目的 探讨肿瘤组织树突状细胞(DC)功能缺陷机制,研究卵巢癌细胞对DC成熟及功能的影响.方法 体外共培养卵巢癌细胞与DC,观察DC表面标志、吞噬功能及对T淋巴细刺激胞能力的变化,检测免疫相关因子的变化.结果 成人外周血单个核细胞,经rhGM-CSF和rhIL-4诱导生成DC后,表达CD1a(55.0%±10.3%)、CD86(63.5%±11.1%)、HLA-DR(89.4±19.7%)和CD83(9.7%±3.4%),经肿瘤坏死因子(TNF)-α促成熟后,DC成熟标志CD83(39.5%±7.5%)升高.与卵巢癌细胞共培养,DC特异性标志CD1a(19.1%±4.0%)表达减少,成熟特异性标志CD83(44.2%±8.3%)增高且时间提前,对TNF-α诱导无反应.卵巢癌细胞使DC对葡聚糖的吞噬功能下降43.05%,对同种异体T淋巴细胞刺激活性降低56.35%;抑制DC分泌白细胞介素(IL)-12及与IL-12相关的p38磷酸化,使MLR中T细胞分泌干扰素(IFN)-γ降低而IL-10增高.结论 卵巢癌细胞影响DC成熟及功能,DC吞噬能力及抗原处理功能下降,不能有效刺激T淋巴细胞增殖,抑制特异性CTL活化,造成T细胞对肿瘤细胞耐受.可能是肿瘤逃避机体免疫监视作用的机制之一.  相似文献   

20.
Background  Objective evaluation of the antitumor effect of interleukin-12 (IL-12) gene-transfected dendritic cell (DC) vaccine on laryngeal carcinoma requires in vivo and in vitro tests. The aim of this study was to investigate the function of IL-12 gene transfected DC at initiating specific immune response to laryngeal carcinoma in vitro
Methods  Recombinant adenovirus with IL-12 gene was constructed. DCs were isolated from the peripheral blood of patients with laryngeal carcinoma, pulsed with tumor lysate of laryngeal carcinoma cells (DC+Ag), and transfected with IL-12 (DC-IL-12+Ag). The cells pheotypes including CD83, CD86 and HLA-DR on surface of DCs were assayed by flow cytometry (FCM). The concentration of IL-12 in culture supernatant of DCs and interferon γ (IFN-γ) in culture supernatant of T cells cocultured with DCs were quantified by ELISA. Methyl thiazolys tetrazolium (MTT) was used to evaluate proliferation of autologous T lymphocytes and activation of cytotoxic T lymphocytes (CTL) stimulated by IL-12-transfected DCs pulsed with tumor lysate against laryngeal carcinoma cells.
Results  The recombinant adenovirus expressing IL-12 gene was constructed successfully. Gene-transfected DC plused with tumor lysate with IL-12 (DC-IL-12+Ag) expressed higher level of CD83, CD86 and produced higher level of IL-12 than untransfected DCs (DC+Ag) (CD83: (60.2±1.8)% vs. (50.7±1.2)%, P <0.05; CD86: (88.9±2.1)% vs. (78.2±3.9)%, P <0.05; IL-12: (262.5±3.0) ng/L vs. (103.8±5.1) ng/L, P <0.05). The proliferation of autologous T lymphocytes and production of IFN-γ stimulated by DC transfected with IL-12 were more obviously than untransfected DCs. Cytotoxicity of CTL stimulated by IL-12-transfected DC pulsed with tumor lysate against laryngeal carcinoma cells were significantly stronger than stimulated by untransfected DC.
Conclusion  It is a promising approach for IL-12-transfected DC pulsed with tumor lysate to increase the antitumoral effect.
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