难治性癫痫患病风险与MDR1基因tag SNPs rs3789243及rs2235046位点多态性的相关性

目的探讨MDR1基因tag SNPs与中国汉族难治性癫痫患病风险的关系。方法安徽合肥周边地区的汉族癫痫患者164例和健康对照198例,通过传统SNP基因分型技术PCR-CTPP对MDR1基因的标签SNPs rs3789243和rs2235046进行基因分型,随机样本测序验证,并进行统计学分析。结果 SNPs rs3789243的CC基因型分布频率在癫痫病例组和正常对照组之间、难治组和对照组之间均有显著性差异(P<0.01),相对危险度分别为4.315和7.123(P<0.01);SNPs rs2235046的AA基因型分布频率在癫痫病例组和对照组之间有显著性差异(P<0.01),相对危险度为2.837(P<0.01)。结论 MDR1基因多态性rs3789243基因型CC和rs2235046基因型AA可能与癫痫的患病风险升高有关;rs3789243基因型CC可能与IE风险升高有关。     

瑞香素对HMGB1释放及HMGB1诱发的炎症反应的双重抑制作用

目的探讨瑞香素对高迁移率族蛋白1（HMGB1）释放及其诱发炎症反应的双重抑制作用。方法RAW264.7细胞常规培
养,不同浓度的瑞香素单独或联合脂多糖（LPS）作用细胞不同的时间,ELISA检测晚期炎症因子HMGB1的释放;Western blot
检测JAK1/2、STAT1的磷酸化。THP-1细胞常规培养,不同浓度的瑞香素单独或联合rhHMGB1刺激细胞不同的时间,ELISA
检测炎症因子TNF-α,IL-6,PGE2 的释放;NO检测试剂盒检测NO水平;Western blot 检测iNOS、COX-2 的表达及p38、ERK、
JNK的磷酸化水平。结果瑞香素浓度依赖性的下调HMGB1 的释放,抑制rhHMGB1 诱导的iNOS、COX-2 的表达及TNF-α,
IL-6,PGE2、NO的释放。WB结果显示,瑞香素显著下调脂多糖诱导的JAK-STAT1信号磷酸化,但对rhHMGB1诱导的MAPKs
磷酸化无明显抑制作用。结论瑞香素能够抑制HMGB1释放及其诱发的炎症反应,而且瑞香素可能通过抑制JAK-STAT1信号
途径减弱HMGB1的释放。
     

项目教学法在医学院校生物化学实验教学中的应用

生物化学是一门实践性很强的学科,实验课教学是生物化学教学的重要组成部分。为提高医学院校生物化学实验课教学质量,改革当前传统的实验课教学模式,尝试将项目教学法应用于生物化学实验课教学。通过问卷调查和学生实验考核,项目教学法能显著提高学生实验成绩,取得了良好的教学效果。同时,项目教学法能提高学生学习的积极性、主动性,显著提高实验课的教学效果和学生的实践能力。     

PCR-CTPP技术在MDR1基因SNP分型中的应用

目的:建立两对引物-聚合酶链反应(PCR-CTPP)技术改进体系-两步法PCR-CTPP,研究其在MDR1基因SNP的快速分型中的应用价值。方法:采用两步法PCR-CTPP技术对158例的癫痫患者MDR1基因rs3789243和rs2235046进行检测分型,并以DNA测序验证基因分型结果。结果:通过两步法PCR-CTPP得到的基因分型结果与DNA测序得到的基因分型结果完全一致。结论:改进的两步法PCR-CTPP技术是一种可靠、快速的对基因SNP分型检测方法,能在普通实验室广泛应用,有助于基因SNP的分型研究。     

红景天苷通过抑制NOX2-ROS-MAPKs信号途径保护H2O2诱导的PC12细胞凋亡

目的 探讨红景天苷保护H2O2诱导PC12细胞凋亡的分子机制.方法 PC12细胞置于含10％马血清、5％胎牛血清的高糖DMEM完全培养基中常规培养.不同浓度的红景天苷预处理细胞2h,然后H2O2作用细胞特定的时间,Western blot检测细胞凋亡相关蛋白PARP,caspase 3的表达及胞内信号分子p38,ERK和JNK的磷酸化水平;DAPI染色检测细胞核的形态改变;ROS检测试剂盒检测胞内ROS的水平;膜质分离实验检测NOX2的两个重要亚基gp91phox和p47phox在胞膜和胞质中的含量;免疫共沉淀实验检测gp91phox和p47phox的结合.结果 红景天苷浓度依赖性的抑制H2O2诱PC12细胞凋亡;减弱H2O2诱导p38,JNK和ERK的磷酸化;减少H2O2诱发的ROS释放;抑制gp91phox和p47phox的结合,进而抑制NOX2的活性.结论 红景天苷通过抑制NOX2-ROS-MAPKs信号通路保护H2O2诱导PC12细胞凋亡.     

2-芳基苯并噁唑的合成和生物活性

目的:合成2-芳基苯并噁唑衍生物4a-d,测试化合物4b的生物活性。方法:用有机高价碘化合物醋酸碘苯(DIB)氧化苯酚亚胺分子内环化,生成目标化合物4a-d;采用打孔法测定4b对白念珠菌的抑制活性。结果:产物经过1H NMR,13C NMR,HRMS(EI)和IR等表征;生物活性测试表明,化合物4b在1μg/ml～1 mg/ml药剂浓度下对白念珠菌的抑菌圈直径为1.5～11.1 mm。结论:拓展了用有机高价碘试剂氧化环化形成2-芳基苯并噁唑衍生物的合成方法;化合物4b对白念珠菌有良好的抑制活性。     

脱乙酰化酶抑制剂与去甲基化制剂联合作用对K562的细胞凋亡及EZH2基因表达的影响

目的:探讨DNA甲基转移酶抑制剂5-氮杂-2'-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)和组蛋白去乙酰基抑制剂辛二酰苯胺异羟肟酸(SAHA)联合作用下对白血病细胞株K562中的EZH2基因表达及其对细胞凋亡的影响。方法:通过流式细胞术分析细胞凋亡;利用Western blot检测EZH2的表达水平。结果:对照组、单用5-Aza-CdR(10-7mol/L)或SAHA(10-6mol/L)及两药联合的凋亡率分别是8.2%、13.4%、10.1%和44.7%;两药联合时EZH2的表达水平明显低于单用5-Aza-CdR(10-7mol/L)或SAHA(10-6mol/L)。结论:5-Aza-CdR与SAHA协同可抑制K562细胞中EZH2基因的表达,促进细胞的凋亡。     

肺癌细胞裂解物对树突状细胞的免疫抑制作用

目的:研究Lewis肺癌细胞裂解物对小鼠树突状细胞(DC)的免疫抑制作用。方法:反复冻融法制备Lewis肺癌细胞裂解物,骨髓冲洗提取C57/BL6小鼠DC,GM-CSF、IL-4体外诱导培养DC,ELISA检测肿瘤细胞裂解物(TCL)中透明质酸(HA)含量,ELISA检测DC培养上清液中IL-12和IL-10水平。结果:经检测,Lewis肺癌细胞TCL中含有HA,其含量为42 mg/ml。将这种TCL作用于C57/BL6小鼠DC,同对照组相比,DC的IL-12分泌水平显著下降(P<0.01),而IL-10的分泌水平显著提高(P<0.01),这符合免疫耐受DC细胞因子分泌特点。在用Pep-1抗体封闭DC表面的HA受体CD44后,DC的IL-12、IL-10分泌水平则恢复至同对照组相同的水平(P>0.05)。结论:Lewis肺癌细胞裂解物中含有HA。通过这种物质,肺癌细胞裂解物可以诱生鼠源免疫耐受性DC,从而抑制DC的免疫活性。     

七叶皂苷钠通过抑制AKT,ERK上游信号SRC活性诱导人乳腺癌MCF-7细胞凋亡

探讨七叶皂苷钠对乳腺癌MCF-7细胞的凋亡诱导作用及其可能的作用机制。运用MTT法检测七叶皂苷钠对MCF-7细胞的增殖抑制作用;倒置显微镜观察细胞形态学变化;DAPI染色后在荧光显微镜下检测细胞核变化;采用Annexin V-FITC/PI流式细胞术检测细胞凋亡率;采用Western blotting检测凋亡相关蛋白(PARP,cleaved caspase-8,pro-caspase-3)和细胞存活相关信号分子(AKT,ERK)及其共同上游激酶SRC的磷酸化变化情况。结果显示,不同浓度七叶皂苷钠作用于乳腺癌MCF-7细胞后,以剂量依赖方式抑制MCF-7细胞增殖;诱导细胞凋亡(典型的凋亡形态学变化、细胞核改变和细胞凋亡率显著增加);细胞凋亡相关蛋白PARP切割增加,cleaved caspase-8表达增加,pro-caspase-3表达减少进一步验证了七叶皂苷钠的凋亡诱导作用;七叶皂苷钠显著抑制细胞存活相关信号分子(AKT,ERK)的磷酸化,其共同上游激酶SRC的活化亦显著下降。结果表明,七叶皂苷钠通过抑制SRC的活化,阻断信号向下游信号分子AKT,ERK的传递,抑制乳腺癌细胞MCF-7增殖,诱导细胞凋亡。     

难治性癫痫患病风险与MDRI基因tag SNPs rs3789243及rs2235046位点多态性的相关性

目的 探讨MDRI基因tag SNPs与中国汉族难治性癫痫患病风险的关系.方法 安徽合肥周边地区的汉族癫痫患者164例和健康对照198例,通过传统SNP基因分型技术PER-CTPP对MDRI基因的标签SNPs rs3789243和rs2235046进行基因分型,随机样本测序验证,并进行统计学分析.结果 SNPs rs3...