丹参对克隆化成骨细胞株MC3T3—E1细胞影响的实验研究

了解丹参对体外培养的成骨细胞生长，分化与代的影响。选择克隆化成骨细胞株ＭＣ３Ｔ３－Ｅ１细胞，采用细胞培养方法，观察细胞内ＤＮＡ合成及碱性磷酸酶活性。丹参明显增强ＭＣ３Ｔ３－Ｅ１细胞内ＡＬＰａｓｅ活性，丹参浓度为５．０ｇ／Ｌ时，对ＭＣ３Ｔ３－Ｅ１细胞内ＡＬＰａｓｅ活性影响最大，比对照组强约１３５％     

CR3的Ⅰ结构域的克隆和在CHO细胞中的表达及配体结合特性的研究

研究白细胞整体合素ＣＲ３α亚基的Ⅰ结构域在配体结合中的作用。方法克隆ＣＤ１１ｂ的Ⅰ结构域，用重叠ＰＣＲ的方法将其与信号肽ＤＮＡ连接，克隆到表达载体ＰＥＥ６ＨＣＭＶ．ＧＳ，转化ＣＨＯ－Ｋ１细胞。表达的Ⅰ－结构域经ＳＰ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ和ｍｏｎｏ－Ｓ柱纯化后，与Ｃ３ｂｉ进行配体结构实验。结果用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ测得重组的Ⅰ结构域分子量为２９ＫＤ。重组的Ⅰ结构域可以与Ｃ３ｂｉ结合，Ｓｃａｔｃｈａｒｄ分析     

内源性阿片肽对兔肺动脉平滑肌细胞增殖的抑制作用

目的：观察内源性阿片肽Ｌ－Ｅｎｋ、吗啡对兔肺动脉平滑肌细胞增殖作用的影响并分析其作用机制．方法：离体培养新西兰兔肺动脉平滑肌细胞（ＰＡＳＭＣ），采用四唑盐比色法（ＭＴＴ）和３Ｈ－ＴｄＲ参入实验观察ＰＡＳＭＣ增殖和ＤＮＡ合成量的变化．结果：Ｌ－Ｅｎｋ对ＰＡＳＭＣ增殖及ＤＮＡ合成有抑制作用且呈剂量依赖效应．Ｌ－Ｅｎｋ（１×１０－３～１×１０－４ｍｏｌ／Ｌ）对ＰＡＳＭＣ的增殖和ＤＮＡ的合成有显著的抑制作用，该作用可被阿片受体阻断剂纳络酮阻断．吗啡对ＰＡＳＭＣ的增殖和ＤＮＡ的合成无显著影响．结论：内源性阿片肽可能主要是通过δ亚型阿片受体对ＰＡＳＭＣ的生长、增殖起抑制作用的，而与μ亚型阿片受体无明显关系．阿片肽类递质抑制ＰＡＳＭＣ增殖作用的可能机制是通过抑制原癌基因ｃ－ｍｙｃ、ｃ－ｆｏｓ的表达从而抑制细胞从Ｇ１进入Ｓ期．     

环六亚甲基双乙酰胺对胃癌细胞MGc80—3增殖分化的影响

目的 研究环六亚甲基双乙酰胺（ＨＭＢＡ）对胃癌细胞ＭＧｃ８０－３增殖分化的影响。方法 使用＾３Ｈ－ＴＤＲ标记ＤＮＡ技术来显示ＨＭＢＡ诱导处理前后ＭＧｃ８０－３细胞内ＤＮＡ合成量的变化。结果 ＨＭＢＡ抑制ＭＧｃ－８０－３细胞的生长活动，最高抑制率可达５６．７％，细胞分裂指数降低１．２５倍，细胞核内可标ＤＮＡ量急剧下降，其细胞ＤＮＡ可对照组ＤＮＡ的放射性ＣＰＭ比值约为１：５．２２。结论ＨＭＢＡ通过抑制     

CD3AK细胞的生物学特性及其抗肿瘤作用

用人的外周血单核（ＰＢＭＣ）与抗ＣＤ３单克隆抗体和基因重组的人ＩＬ－２共同培养制备ＣＤ３ＡＫ细胞（ＣＤ３ＭｃＡｂ ａｃｔｉｖａｔｉｖｅｄ ｋｉｌｌｅｒ ｃｅｌｌｓ），并系统地研究ＣＤ３ＡＫ细胞的生物学特性及其体外抗肿瘤作用。结果表明，ＣＤ３ＡＫ细胞是异质细胞群，前体细胞来源丰富，主要是Ｔ细胞；经期内大量扩增，体外可长期存活，广谱杀瘤活性较低的ＩＬ－２依赖性。ＣＤ３ＡＫ细胞的增殖机制与其表面高表达Ｉ     

香烟烟雾提取物对气道平滑肌细胞增殖及内皮素释放的影响

探讨气道平滑肌细胞（ＡＳＭＣ）自分泌的内皮素（ＥＴ）是否介导了吸烟对ＡＳＭＣ的作用。方法在体外培养的家兔ＡＳＭＣ上加入香烟烟雾提取物（ＣＩＳＥ）测定细胞存活率，乳酸脱氢酶（ＬＤＨ）水平，并用Ｈ－ＴｄＲ掺入法及放射免疫方法观察ＣＳＥ对ＡＳＭＣ的增殖作用，及对ＥＴ－１释放的影响。用３Ｈ－ＴｄＲ掺入实验，观察低浓度（５％）ＣＳＥ对ＡＳＭＣ增殖的影响及与ＥＴ的关系。结果１０％和３０％ＣＳＥ对ＡＳＭＣ呈现明显毒性作用，表现为细胞存活率降低，脂质过氧化终产物丙二醛（ＭＤＡ）含量增加和细胞ＬＤＨ漏出随时间进行性增加。５％ＣＳＥ呈时间依赖地刺激ＡＳＭＣ释放ＥＴ－１并促进ＡＳＭＣ（３Ｈ－ＴｄＲ）掺入（较对照组增加５９．９％，Ｐ＜０．０１）。内皮素Ａ受体（ＥＴＡ受体）拮抗剂ＪＫＣ－３０１呈浓度依赖地抑制５％ＣＳＥ促ＡＳＭＣ增殖作用。结论吸烟可以刺激ＡＳＭＣ释放ＥＴ－１且通过ＥＴＡ受体介导ＡＳＭＣ增殖     

K562细胞定向表达cDNA文库的快速构建

采用一步法快速从培养的Ｋ５６２细胞中抽提、纯化ｍＲＮＡ，逆转录成ｃＤＮＡ分子后，通过在ｃＤＮＡ分子两端加ＥｃｏＲＩ适配子、Ｔ４多核苷酸激酶作用下磷酸化、ＮｏｔＩ内切酶消化、过ＳｅｐｈａｒｏｓｅＣＬ－４Ｂ柱等步骤，与λＥｘＣｅｌｌ／ＮｏｔＩ／ＥｃｏＲＩ／ＣＩＰ载体连接，然后用包装蛋白在体外包装连接产物，感染Ｅ·ＣｏｌｉＮＭ５２２以构建ｃＤＮＡ文库。经检测：该文库含有１．０×１０６个重组子，ｃＤＮＡ分子长度在０．４～８．５ｋ６范围，扩增后的滴度达１．２×１０１０ｐｆｕ／ｍｌ，完全达到筛选低表达基因的要求，为从Ｋ５６２细胞中克隆新的锌指蛋白ｃＤＮＡ基因奠定了基础。并对构建ｃＤ－ＮＡ文库的关至和应用进行了讨论     

1-烯丙基氯-3对神经细胞胞浆膜和线粒体膜Ca~(2+)-ATPase、Na~+/K~+-ATPase活性的影响

用鸡胚脑神经细胞研究１－烯丙基氯－３对细胞胞浆膜和线粒体膜Ｃａ２＋ＡＴＰａｓｅ、Ｎａ＋／Ｋ＋－ＡＴＰａｓｅ活性的影响。结果表明，胞浆膜Ｃａ２＋－ＰＴＰａｓｅ和Ｎａ／Ｋ＋ＡＴＰａｓｅ活性随毒物剂量增加而明显增高，染毒组与对照组相比差异均有显著性（Ｐ＜０。０１）：线粒体膜Ｃａ２＋－ＡＴＰａｓｅ活性随毒物剂量增加而有下降趋势；Ｎａ＋／Ｋ＋ＡＴＰａｓｅ活性则呈增加趋势。酶组化染色结果显示，Ｃａ２＋－ＡＴＰａｓｅ活性与对照组相比明显增加，黑色沉淀明显增多。提示１－烯丙基氯－３中毒后可引起神经钩胞Ｃａ２＋－ＡＴＰａｓｅ和Ｎａ＋／Ｋ＋－ＡＴＰａｓｅ活性改变，这可能与中毒后细胞胞浆和线粒体内的Ｃａ２＋、Ｎａ＋、Ｋ＋的浓度改变有关。     

丙肝病毒非结构蛋白基因3的克隆及其体外诱导表达

目的：研究丙型病毒非结构蛋白基因３（ｎｓ３基因）在体外真核细胞中的诱导表达。方法：以ＰＣＲ方法从含ＨＣＶｎｓ３基因的重组载体ｐＢｎｓ３中扩增出ｎｓ３基因，并将其插入到克隆载体ｐＧＥＭ－Ｔ中，再与表达载体ｐＭＳＧ重组，以利到重组表达载体ｐＭＳＧ－ｎｓ３。然后采用磷酸钙沉淀法将其转染哺乳动物ＣＨＯ细胞，经地塞米松（ＤＭ）诱导，采用ＥＬＩＳＡ及Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔ技术检测ＮＳ３蛋白的表达水平。结果：     

ATG和抗CD3McAb对再障患者CFU—GM生长的体外影响研究

用ＣＦＵ－ＧＭ半固体琼脂培养技术研究了抗人胸腺细胞球蛋白和抗ＣＤ３单克隆抗体对１８例再生障碍性贫血患者骨髓ＣＦＵ－ＧＭ体外生长的影响。结果表明，１．加入１６．７μｇ／ｍｌＡＴＧ或１：５０抗ＣＤ３ＭｃＡｂ，体外均可增加ＡＡ患者骨髓ＣＦＵ－ＧＭ的集落数，再者的作用无显著差异。     

Galectin-3重组真核表达载体的构建及其在NIH/3T3细胞中的表达

目的:构建半乳糖凝集素-3(Gal-3)的真核表达载体,在NIH/3T3细胞中表达,并检测其表达?方法:通过DNA重组技术和PCR方法从人肿瘤细胞克隆Gal-3基因,插入真核表达载体pEGFP-N1中,通过酶切和测序鉴定重组载体的正确性;采用脂质体转染技术将重组质粒pEGFP-Gal-3瞬时转染NIH/3T3细胞,经荧光和Western blot方法检测Gal-3表达,MTT法检测Gal-3对NIH/3T3细胞增殖的影响?结果:限制性内切酶鉴定和核酸序列测序证实成功构建含Gal-3的重组真核表达载体pEGFP-Gal-3?以重组质粒瞬时转染NIH/3T3细胞,检测到Gal-3蛋白表达,并证实Gal-3蛋白促进NIH/3T3细胞增殖?结论:成功构建的pEGFP-Gal-3真核表达载体在小鼠NIH/3T3细胞中成功表达,并促进NIH/3T3细胞增殖?     

原花青素诱导前列腺癌PC-3细胞凋亡的机制研究

目的：探讨原花青素在体外诱导人前列腺癌PC-3细胞凋亡的机制。方法：体外培养人前列腺癌PC-3细胞株,用100,200,300μg／ml原花青素作用24h。荧光素标记的连接素V（Annexin V—fluoresein isothiocyanate,Annexin V—FITC）和碘化吡啶（propidium iodide,PI）双染检测原花青素对PC-3细胞凋亡的影响,采用流式细胞术检测以不同浓度原花青素作用后PC-3细胞线粒体膜电位（△ψm）的变化。结果：100μg／ml原花青素作用细胞24h,5．64％的细胞出现早期凋亡,84．7％的P03细胞呈现线粒体膜电位降低;300vg／ml原花青素组P＆3细胞凋亡率和坏死率分别为44．86％、50．81％。结论：源花青素可在体外诱导PC-3细胞凋亡,其机制与降低线粒体膜电位有关。     

乌苯美司对JAR,SKOV3和3AO细胞体外生长的抑制作用

目的：观察乌苯美司对人绒毛膜癌和卵巢癌细胞体外生长的抑制作用。方法：应用MTT比色法观察不同浓度的乌苯美司(0．5g／L、1g／L、5g／L、10g／L、15g／L、20g／L)对人绒毛膜癌JAR细胞、卵巢癌3AO细胞和SKOV3细胞的生长抑制作用,溴乙啶和丫啶橙荧光染色荧光显微镜观察凋亡细胞DNA结构改变。结果：乌苯美司能抑制JAR细胞、3AO细胞和SKOV3细胞的生长,且对JAR和SKOV3细胞的抑制作用呈时效(r=0．412,r=0．339．P均=0.000)和量效(r=0.704,r=0．753,P均=0．000)关系、5g／L乌苯美司作用48h后荧光显微镜下见细胞染色质边聚,细胞核碎裂等凋亡改变。结论：乌苯美司通过细胞凋亡途径可抑制绒毛膜癌和卵巢癌细胞的生长。     

小鼠白细胞介素-3的制备及其检测条件的分析

从小鼠白细胞介素-3(IL-3)分泌细胞株WEHI-3获取了IL-3,同时用小鼠IL-3依赖细胞株32-D检测IL-3和滴定标本中IL-3的活性单位,并对检测条件进行了探索。结果表明,WEHI上清中含高活性IL-3,不含IL-2,其最佳收集条件是5×10~5/ml细胞浓度培养48h。32-D细胞生长依赖于IL-3。检测细胞的浓度、培养时间及同位素加入时间直接影响检测结果,最佳检测条件是(5～10)×10~5/ml细胞浓度、培养36h、终止前12h加~3H-TdR。     

肾上腺髓质素对上皮性卵巢癌细胞增殖的影响

目的观察肾上腺髓质素（AM）对体外培养的人上皮性浆液性卵巢癌细胞株（CAOV3细胞）增殖的影响。方法将CAOV3细胞进行体外培养,以不同浓度的AM（1-52）（1×10-9mol/L、1×10-8mol/L、1×10-7mol/L、1×10-6mol/L）分别处理CAOV3细胞24小时、48小时、72小时,四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法测定细胞的增殖率。结果在AM（1-52）浓度为1×10-9mol/L、1×10-8mol/L、1×10-7mol/L、1×10-6mol/L时均可促进CAOV3细胞增殖（P〈0.05）,随着AM（1-52）浓度的增高及作用时间的延长细胞的增殖率呈增高趋势（P〈0.05）。结论AM能促进CAOV3细胞的增殖。     

CD3AK细胞和LAK细胞的表型测定

用抗ＣＤ＿３抗体和低剂量ＩＬ－２以及单独用高剂量ＩＬ－２分别诱生正常鼠、免疫鼠脾细胞为ＣＤ＿３ＡＫ细胞和ＬＡＫ细胞。用间接免疫荧光法和微云细胞毒实验两种方法测定培养４ｄ和９ｄ的细胞表型。结果：正常鼠ＣＤ＿３ＡＫ和ＬＡＫ细胞中ＣＤ＿３与ＣＤ＿８阳性细胞率均高于诱生前正常鼠脾细胞（Ｐ＜０．０１）。正常鼠ＣＤ＿３ＡＫ细胞中，ＣＤ＿３与ＣＤ＿８阳性细胞率明显高于正常鼠ＬＡＫ细胞（Ｐ＜０．０１）。免疫鼠ＣＤ＿３ＡＫ与正常鼠ＣＤ＿３ＡＫ的表型相似，而免疫鼠ＬＡＫ细胞的ＣＤ＿８阳性细胞率显著增加，明显高于正常鼠ＬＡＫ细胞（Ｐ＜０．０１）。     

钒化钠对小鼠成纤维细胞NIH3T3细胞株增殖影响的研究

目的探讨不同浓度钒化钠(sodium vanadate,SV)对小鼠成纤维细胞NIH3T3细胞株增殖作用的影响。方法将培养的NIH3T3细胞给予不同浓度及时间的SV刺激,以噻唑蓝(MTT)比色法检测小鼠成纤维NIH3T3细胞增殖及增殖抑制情况。结果与对照组比较,0.1μM对细胞增殖无影响(P>0.05);1.0、5.0、10.0μM SV可以促进细胞增殖,而200μM SV抑制其增殖(P<0.01),不同处理时间变化趋势一致;100μM SV对细胞作用随处理时间不同而不同。结论SV对NIH3T3细胞增殖作用因处理剂量和时间不同而呈现差异。     

APA-3T3细胞微囊的深低温保存

目的:通过优选冻存液的成份和浓度,建立低温保存APA微囊化小鼠成纤维细胞(3T3细胞)的方法。方法:用海藻酸钙-多聚赖氨酸-海藻酸钙微囊(APA)包裹3T3细胞制成APA-3T3细胞微囊。以高糖DMEM培养液为基础冻存液,分别加入不同浓度的二甲基亚砜(DMSO)或牛血清白蛋白(BSA)。分别将不同的冻存液加入APA-3T3中。按程序控制降温梯度,置于液氮中保存。快速复温后,光镜下观察APA-3T3的形态、细胞活率及膜通透性。结果:①10%DMSO组的微囊内细胞活率降低最少,细胞活率达(75.68±1.54)%,P<0.01。微囊完好率达到(94.48±0.90)%,P<0.01。②与其它组相比,4%BSA组的微囊内细胞活率降低程度最小,活率达(73±1.26)%,P<0.01。微囊完好率最高,为(85.1±0.82)%,P<0.01。③加入不同成份和浓度的冻存液对微囊的通透性没有明显影响。结论:在冻存液中加入10%DMSO和4%BSA,可在低温保存的过程中较好地保护细胞的存活及微囊的完整性。     

逆转录病毒转染的小鼠IL－3基因在NIH／3T3细胞中的表达

将小鼠白细胞介素３（ＩＬ－３）ｃＤＮＡ重组到逆转录病毒载体ｐＮ２Ａ质粒上，用电穿孔法将此重组子转染包装细胞系（ＰＡ３１７），经用Ｇ４１８（ｇｅｎｅｔｉｃｉｎ）选择培养基筛选，得到产病毒效价为每ｍｌ５×１０４～２×１０５ＣＦＵ（ｃｏｌｏｎｙ－ｆｏｒｍｉｎｇｕｎｉｔ）的Ｇ４１８抗性细胞克隆。然后取其培养上清液转染ＮＩＨ／３Ｔ３细胞。通过检测被病毒转染的ＮＩＨ／３Ｔ３细胞培养上清液对小鼠骨髓细胞的增殖反应（ＭＴＴ法）和促分化作用（ＣＦＵ培养法），表明转染的ＮＩＨ／３Ｔ３细胞克隆能分泌ＩＬ－３。此结果为进行ＩＬ－３转基因治疗研究奠定了实验基础。     

T细胞因子3在非小细胞肺癌中的表达

目的 研究T细胞因子3 (T cell factor 3,TCF-3)在非小细胞肺癌中的表达及分布情况.方法 采用50对人非小细胞肺癌组织标本及其正常癌旁组织对照,进行免疫组化检测TCF-3蛋白在肺癌组织及正常肺组织中的表达及分布情况;采用5种人非小细胞肺癌细胞系及2种正常人支气管上皮细胞系进行实时荧光定量PCR,Western blot检测肺癌细胞系中TCF-3在mRNA和蛋白水平的表达情况.结果 (1) TCF-3在肺癌组织中表达,表达率为48％ (24/50),在正常肺组织中未见表达.TCF-3在肺癌细胞胞核与胞质同表达,以细胞核表达为主.(2) TCF-3在A549、H520、HBE、BEP-2D 4种细胞系中mRNA及蛋白水平均有表达.结论 TCF-3在肺癌组织及细胞系中均表达,TCF-3蛋白在细胞核与细胞质同表达,但以细胞核表达为主.