利福平抗黄热病毒感染的效果及初步机制

目的 检测利福平抗黄热病毒(YFV)感染的效果并初步探索其机制.方法 用不同浓度(0.04、0.2、1、5、25、125、625μmol/L)的利福平处理人肝癌细胞Huh-724 h,通过CCK-8检测利福平的细胞毒性并计算其细胞半数毒性浓度(CC50).YFV感染Huh-7细胞的同时加入不同浓度(0.04、0.2、1、5、25μmol/L)的利福平,检测其抗YFV感染的剂量效应,并计算IC50.YFV感染Huh-7细胞的同时加入5μmol/L利福平,孵育不同时长(2、4、8、12、24 h),检测其抗YFV感染的时间效应.YFV感染Huh-7细胞后,在感染的不同时间段(2、4、6、8、12 h)加入25μmol/L利福平(药物作用时间2 h,病毒感染2 h),检测其抗YFV感染最显著的起效阶段.利用病毒结合实验、内吞荧光标记实验评价利福平对YFV入侵靶细胞的影响.结果 利福平细胞毒性较弱(CC50为176.9μmol/L),抑制YFV作用显著(IC50为1.868μmol/L,P<0.01);动力时间窗、结合和内吞实验表明,利福平能抑制YFV结合、入侵靶细胞(P<0.01),但不影响YFV的内吞过程.此外,利福平在感染后期的复制阶段也有一定的抑制效果(P<0.01).结论 利福平可抑制YFV感染靶细胞,作用机制主要通过在病毒感染早期的入侵阶段阻断病毒结合靶细胞.     

埃博拉病毒2014年毒株的基因组变异特征分析

目的 2014年在西非国家暴发的埃博拉疫情,与既往的疫情相比,流行病学特征有所改变,即病毒的致死能力减弱、人际传播能力增强。本文拟通过对埃博拉病毒2014年毒株基因组共102株序列的分析,研究其变异特征,探讨病毒基因组变异与其流行病学特征改变之间的关系。 方法 选取NCBI公共数据库中埃博拉病毒全基因组序列,应用mummer3.0软件分析病毒基因组变异特征;使用MEGA5软件进行蛋白进化分析;应用CPHmodels和PyMOL软件,根据蛋白同源性模拟蛋白的三维构型。 结果 埃博拉病毒2014年毒株（扎伊尔型）基因组中,共有606个位点发生变异,其中有49个变异位点是2014毒株特有的、并导致所编码的氨基酸发生非同义突变。特别是NP蛋白第128位、GP蛋白第82位和L蛋白第1951位氨基酸,不仅在2014年之前所有的扎伊尔型毒株中是保守不变的,而且在其余埃博拉病毒亚型之间也是高度保守的,但在2014毒株中却发生了特异性的变异。 结论 埃博拉病毒2014年毒株基因组具有独特的变异特征,使得NP、GP和L蛋白发生变异,特别是GP蛋白第82位氨基酸由丙氨酸突变为缬氨酸,将影响其所在的?螺旋的稳定性,这可能是2014年毒株致死能力减弱和传播能力增强的原因之一。基因组变异是否直接导致此次疫情中病毒流行病学特征改变,还需要进一步的实验研究证实。     

HIV-1/HCV合并感染者中HCV基因亚型流行情况调查

目的 了解中国部分地区HIV-1和HCV合并感染人群中HCV基因亚型的流行、分布及其与HIV-1感染疾病进展的关系.方法 对186份获自河南、云南、新疆、吉林和辽宁省HIV-1/HCV合并感染人群标本(HCV病毒载量>1000 cop/ml),用反转录巢式聚合酶链反应方法扩增血浆HCV核心基因区并进行基因亚型分型,同时检测HIV-1和HCV载量以及CD4+T细胞计数.结果 (1)HCV不同基因亚型比例分别为1a(1.7%)、1b(39.9%)、2a(17.9%)、3a(10.4%)、3b(15.6%)、6a(1.2%)、6n(6.4%)和6型未鉴定亚型(7.5%).HCV 2a和1b主要流行于河南省既往有偿献血浆人员中;3a和3b亚型主要流行于新疆和云南静脉注射吸毒者(IDU)中;HCV6型主要流行于云南吸毒人员中.(2)1b亚型的HCVRNA水平显著高于非1b亚型,但在HIV-1载量和CD4+T细胞数方面差异无统计学意义.2a亚型的HIV-1 RNA和HCV RNA水平显著低于非2a亚型.结论 HIV-1/HCV合并感染人群中HCV基因亚型的流行和分布与流行地区和感染途径有关.新的HCV6型亚型病毒株已经在合并感染的IDU人群中流行.尚未发现HCV基因哑型与HIV感染疾病进展之间的关系.     

GM-CSF基因增强HCV非结构蛋白DNA疫苗诱导的细胞免疫应答

作者分别构建了编码丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）非结构蛋白ＮＳ３、ＮＳ４和ＮＳ５的质粒ｐＴＶ－ＮＳ３４５、编码粒细胞－巨噬细胞－集落刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）的质粒ｐＴＶ－ＧＭＣＳＦ以及编码ＮＳ３４５和ＧＭ－ＣＳＦ的双顺反子质粒ｐＴＶ－ＮＳ３４５／ＧＭＣＳＦ，分别将这三种质粒转染ＣＯＳ－７细胞，用免疫沉淀法检测ＨＣＶＮＳ３４５蛋白的表达，用ＥＬＩＳＡ检测培养上清中的ＧＭ－ＣＳＦ。将Ｂｕｆｆａｌｏ大鼠分为４组，第１、２、４组分别肌注ｐＴＶ－ＮＳ３４５、ｐＴＶ－ＮＳ３４５／ＧＭＣＳＦ和对照载体ｇＴＶ ４００μ…     

微反应板酶联夹心杂交定量检测乙型肝炎病毒基因组

目的 建立一种在微量反应板上进行乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）基因杂交定量分析的技术。方法 利用人工合成的多组寡核苷酸探针与乙型肝炎病毒全基因组在微量ＤＮＡ结合板上进行杂交反应，并利用自制的标记放大探针检测杂交信号，信号值以Ａ值标示，与标准曲线比较后，可求得待测标本中ＨＢＶ基因含量。结果 （１）本方法可直接从血清标本中对ＨＢＶ定量，可定量范围为２０ｐｇ－２０ｎｇ／ｍｌ；（２）不与人类基因组及其它病毒或细菌     

CHILDREN’S RESPIRATORY VIRAL DISEASES TREATED WITH INTERFERON AEROSOL

In 1979, the Pediatric Department of Shanghai Changzheng Hospital, in collaboration with the SINE Laboratory, succeeded for the first time in producing a human leukocyte interferon aerosol (IFN-a aerosol). The biological value of the interferon used in the aerosol was not adversely affected. Over 80'70 0f its particles have diameters under 5 Um. In animal ex- periments no irritative reactions were observed. Clinical trials showed the preparation was effective in children's respiratory viral disease including in fluenza, bronchiolitis caused by RSV, mumps, asthma (infectious), asthmatic bronchitis and recurrent upper respiratory tract infections. Based on our animal ex periments and clinical trials lasting more than 7 years, IFN a aerosol is proved effective, safe and non- traumatic. It has no side effects and is economical and easy to use     

人CD38分子基因的克隆及其在真核细胞中的表达

目的：克隆并表达人CD38抗原分子的全长cDNA。方法：采用RT－PCR法，从高表达CD38抗原的Daudi细胞系中克隆出CD38全长cDNA并将其插入pGEM-T载体中，重新设计引物，引入酶切 位点，二次PCR；从重组pGEMT载体上扩增CD38抗原分子的cDNA编码序列，再亚克隆至真核表达载体pcDNA3.1( )，用脂质体法转染COS7细胞。用免疫荧光及A－PAAP方法检测CD38抗原的表达。结果：克隆的CD38抗原的全长cDNA，经酶切鉴定及序列分析表明，其序列与文献报道完全一致。免疫荧光及APAAP方法检测表明，CD38抗原分子在COS7细胞中获得表达。结论：成功构建了CD38真核表达载体，并在COS7细胞中获得表达，对研究CD38分子的功能具有重要的意义。     

重组人内皮细胞抑制素腺病毒载体的构建及其应用

目的　构建表达人内皮细胞抑制素 (Endostatin)的重组腺病毒载体 ,并进行活性检测。方法　将含有IL3分泌肽的人Endostatin全长cDNA插入穿梭质粒pAdCMV产生重组质粒pAd IL3 Endo ,通过脂质体介导与 pBHG1 0共转染 2 93细胞 ,经同源重组产生重组腺病毒Ad IL3 Endo。体外转染人结肠癌SW62 0细胞并观察其上清对人脐静脉内皮细胞 (HUVEC)生长的影响。结果　扩增到的Ad IL3 Endo的滴度为 4 .3× 1 0 1 2 空斑形成单位 (pfu) /L ,多聚酶链反应 (PCR)显示在转染的细胞中有人EndostatincDNA的存在 ,Westernblot显示转染细胞上清中有人Endostatin蛋白表达 ,台盼蓝染色显示其上清作用 72h后HUVEC的生长被抑制了 67% (P <0 .0 5)。结论　所制备的重组人Endostatin腺病毒载体能有效表达具有生物学活性的人Endostatin ,为进一步的研究奠定了基础