多粘蛋白的分离及其与纤粘蛋白的比较

用明胶、肝素和精氨酸亲和柱等从猪血浆中分离得到一明胶亲和蛋白Polynectin(PN)。此蛋白与精氨酸的亲和性很高,借此与FN分开,经聚丙烯酰胺凝胶电泳证明,PN的分子量为450 000,由多个相同的小亚基连接形成。免疫双扩散和ELISA结果表明,PN与FN之间无免疫交叉反应,PN只存在于猪血中,人及其它动物(牛、羊,小鼠和大鼠)血中无PN。PN不具有促中国地鼠卵巢(CHO)细胞贴壁活性。提示PN是一种不同于FN的大分子糖蛋白。此外,用无PN的FN免疫兔,制得高效价FN抗血清(1:32),并进一步纯化制得亲和层析纯FN抗体.     

血浆纤维连接素的纯化、抗血清制备及其临床初步应用

本文介绍改良的纯化血浆纤维连接素(FN)的gelatin-Sepharose亲和层析法,抗FN血清的制备方法及血浆FN的单向琼脂扩散测定法,初步观察了血浆FN的年龄变化与性别差异,发现健康老人组的血浆FN均值为321·8±22·6微克/毫升,显著低于健康成人组的均值(446·9±22·5微克/毫升)(P<0.001);在老人组与成人组中,男女两组之间均无显著差异(P>0.05)。老年人血浆FN含量的降低是否为其防御功能减退的原因之一,尚有待进一步研究。     

重组人纤维连接蛋白羧基端细胞结合域单克隆抗体的制备与鉴定

目的:制备人纤维连接蛋白(fibronectin,FN)羧基端细胞结合域的单克隆抗体,并以该抗体检测心脏瓣膜基质蛋白中FN蛋白的表达情况.方法:用RT-PCR方法获取人FN羧基端细胞结合域基因序列,通过pET32质粒表达获得TRX融合蛋白.并以纯化的融合蛋白作为抗原免疫BALB/c小鼠后,按常规方法制备成单克隆抗体,获得分泌抗FN单克隆抗体的杂交瘤细胞株.结果:蛋白电泳结果显示,所获TRX融合蛋白条带与理论计算值相符,免疫动物后获得2株分泌抗FN羧基端细胞结合域不同位点单克隆抗体的杂交瘤细胞株,抗体亚型为IgG2a,免疫组化显示该抗体能特异性地结合人心脏瓣膜基质中的FN.结论:成功制备了分泌抗FN单克隆抗体,为FN结构、功能和机制的研究提供了有效工具.     

研制抗生物素蛋白及其在BA-ELISA法检测中的应用

用改良的CMC离子交换层析法,从鸡蛋清中分离提纯抗生物素蛋白(Avidin),方法简化,得率高,对抗生物素蛋白的理化性质分析结果表明,纯度>98％,比活性约14U/mg。分子量及亚基分子量测定值分别约为67.8K和16.9K。等电点在10.3附近。最大荧光发射波长为338nm。将抗生素蛋白与辣根过氧化物酶的偶联物(A-HRP)用于生物素-抗生物素蛋白酶连接免疫吸附测定(BA-ELISA)检测兔抗猪透明带(ZP)抗体,其敏感性是间接免疫荧光试验法的2048倍,而且BA-ELISA法特异性高,简便客观,定量结果满意。     

川芎素对高糖致人腹膜间皮细胞分泌FN和PAI-1的作用

目的研究高糖对人腹膜间皮细胞(HPMC)分泌纤维连接蛋白(FN)和血浆纤溶酶原激活物抑制剂-1(PAI-1)的影响,并进一步探讨川芎素对高糖致HPMC分泌FN和PAI-1的干预作用。方法采用胰蛋白酶消化法从人腹膜组织中分离间皮细胞,建立体外培养模型;用酶联免疫双抗夹心法(ELISA)检测HPMC培养液中FN和PAI-1蛋白质水平;用逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)检测HPMC细胞内FN和PAI-1mRNA的表达。结果与单纯对照组相比,2.5%高糖刺激后,HPMC 培养液内FN和PAI-1蛋白质水平显著升高(P< 0.01),并上调HPMC FN和PAI-1的mRNA表达;加入低剂量(20,40μg/ml)川芎素后,FN和PAI-1蛋白质水平显著下降(P<0.01),mRNA表达水平下调。但随着剂量的加大,川芎素的上述作用减低乃至消失。结论高糖可引起HPMC FN和PAI-1蛋白质水平增加,并上调HPMC FN和PAI-1mRNA的表达,适当剂量的川芎素可拮抗高糖的上述作用。     

猪脑钙调素的分离、纯化及鉴定

作者用苯-琼脂糖(Phenyl-Sepharose)亲和层析等方法从猪大脑组织中分离纯化出钙调素。经鉴定,PAGE板电泳呈现一条带;产率:4.2mg/100g大脑;分子量,经SDS-PAGE测定为14.1±1.0kd(含1mmol/L CaCl_2)和164.9±1.2kd(含1mmol/L EGTA),pI=4.35;对猪脑依赖钙调素磷酸二酯酶激活6.5倍,其激活作用被三氟拉嗪抑制。     

抗GSTAl单克隆抗体的制备与鉴定

目的:制备鼠抗人谷胱甘肽S转移酶A1(GSTAI)的单克隆抗体(mAb),并进行特性鉴定。方法:用纯化后的GSTAl融合蛋白作为抗原免疫BALB/c小鼠,采用常规的细胞融合技术制备抗GSTAl的单克隆抗体(mAb)。用ELISA法测定鼠抗人GSTA1血清的效价;用Western blot方法鉴定抗血清的特异性。结果:筛选到l株可稳定分泌抗人GSTAlmAb的细胞株。腹水效价为12 800。Western blot显示在相对分子量(Mr)约25KD处出现特异性条带。说明制备的mAb可特异地识别成人肝细胞中相对分子量(Mr)约25KD的GST-GSTA1。结论:获得一株能特异性识别抗人GSTAI的单克隆抗体,可用于肝损伤性疾病的诊断。     

与骨吸收有关的生化检查研究进展

1 血浆或血消抗酒石酸盐酸性磷酸酶(tartrate resistant acidphosphatase,简称TRAP)和酸性磷酸酶(AP)主要存在于骨、前列腺、溶酶体、红细胞、血小板和脾脏中,其分子量为100KD。血清中AP高于血浆,因凝血中血小板AP释入血中所致。TRAP在酸性环境中发挥作用,因此分离血浆后应立即加入酸性稳定剂,血浆应用肝素作凝刑。     

胃癌细胞角蛋白和纤维连接蛋白的免疫组织化学及免疫电镜观察

应用鼠抗人细胞角蛋白单抗HK_2Mc Ab(ABC法)和兔抗牛血浆纤维连结蛋白血清(PAP法)对82例胃癌进行了细胞角蛋白(CK)和纤维连接蛋白(FN)的光镜观察。对其中6例应用免疫胶体金电镜技术进行了CK和FN超微结构水平     

细胞外基质及其受体—Very Late Antigen(VLA)结合素与胃癌细胞分化、浸润、转移关系的研究

本研究探讨细胞外基质及其受体在胃癌细胞分化、浸润与转移以及血管生成中的作用。制备敏感性、特异性较高的抗层粘连蛋白(LN)抗体 IgG 的Fab-HRP 交联物,应用该交联物及抗纤维联接蛋白(FN)抗体、抗 VLA 亚族结合素单克隆抗体,对45例胃癌、16例非癌胃粘膜进行免疫组化和免疫细胞化学研究。结果显示:(1)非癌粘膜中,LN,FN 呈连续、均匀的细线状分布于上皮和血管基底膜中,FN 亦呈     

Effect of chronic hypoxia on fibronectin in plasma,bronchoalveolar lavage fluid and liver of rats

Summary The present study was undertaken to measure fibronectin (FN) concentration in plasma and bronchoalveolar lavage fluid (BALF) with an enzyme linked immunosorbent assay (ELISA) method, to observe the distribution of FN in liver with an immunohistochemical stain method and to investigate the effect of chronic normobaric hypoxia on them in experimental rats. The results showed that chronic hypoxia caused a significant decrease in plasma FN concentration while BALF FN concentration and the distribution of FN in the liver were not significantly affected, suggesting that the change in FN in. the lower respiratory tract can not be reflected by the change in plasma FN concentration and that the decrease in plasma FN concentration can not be attributed to the change in liver FN secretion. The decrease in plasma FN concentration may lead to a decrease in the defence ability of the body and may contribute to the development of hypercoagulability observed in some patients with chronic hypoxia.     

吲哚美辛对人腹膜间皮细胞分泌FN和PAI-1的影响

目的:探讨吲哚美辛对人腹膜间皮细胞分泌FN和PAI-1的影响。方法：用LPS或2.5%葡萄糖分别与不同浓度的吲哚美辛作用于体外培养的人腹膜间皮细胞，采用酶联免疫吸附法检测上清液中纤维连接蛋白(FN)和纤溶酶原抑制剂-1(PAI-1)的含量。结果：腹膜间皮细胞在2.5%葡萄糖或10mg/L LPS刺激下分泌FN及PAI-1明显增加，与对照组比较差异有显著性意义(P<0.01)；0.15mg/L及0.75mg/L吲哚美辛可明显抑制2.5%葡萄糖或10mg/L LPS刺激的腹膜间皮细胞24h内分泌FN及PAI-1蛋白水平(P<0.05)。结论：吲哚美辛可抑制人腹膜间皮细胞合成细胞外基质，在腹膜纤维化的防治中有潜在的应用价值。     

血小板活化和内皮细胞损害对大肠癌影响的研究

目的：研究血小板活化和内皮细胞损害对大肠癌病情和预后的影响。方法：采用放射免疫法和酶联免疫法测定55例大肠癌和40例正常人血浆血栓烷B2（TXB2）、11-去氢-血栓烷B2（DH-TXB2）、血小板α-颗粒膜蛋白（GMP-140）、血管性血友病因子（vWF）、血栓调节蛋白（TM）、血清纤维结合蛋白（FN）和环磷酸鸟苷（cGMP）的含量。结果：大肠癌TXB2、DH-TXB2、GMP-140、vWF、TM和cGMP升高，FN下降。大肠癌cGMP与TXB2、DH．TXB2、GMP-140、TM之间均呈正相关。大肠癌已转移FN下降，其余指标升高；手术后FN升高，其余指标下降。结论：大肠癌患者存在血小板活化和内皮细胞损害，二者影响大肠癌的转移和预后。     

猪APOBEC3F基因克隆及真核表达载体的构建与鉴定

目的 克隆猪载脂蛋白B mRNA编辑酶催化多肽样蛋白3F(apolipoprotein B mRNA editing enzyme,catalytic polypeptide 3F,APOBEC3F)基因,构建真核表达载体实现其在体外表达与鉴定。方法分离4头21周龄,体质量25～30kg的雌性健康五指山猪的外周血单个核...     

Fibronectin changes in patients with carboxyhemoglobinemia treated by hyperbaric oxygenation]

In this article, we report the results of plasma fibronectin (FN) assay in 35 patients with moderate and serious carboxyhemoglobinemia before and after treatment by hyperbaric oxygenation. The results showed that there was remarkable decrease of plasma FN in all the patients, which meant a significant difference as compared with the control group (moderate n = 15, P less than 0.001; serious n = 20, P less than 0.001). One week after treatment, plasma FN in the patients turned to the normal level. After studying the plasma FN in both the patients with carboxyhemoglobinemia and the healthy volunteers, we found that after treatment with hyperbaric oxygenation, plasma FN increased significantly than before. This discovery suggests that hyperbaric oxygenation has marked effect in promotin; the active recovery of FN in the human body.     

纤维连接蛋白不同可变区在口腔鳞癌的表达

目的:观察含额外区A(extradomain A,EDA)或额外区B(extradomain B,EDB)可变区的纤维连接蛋白(fibronectin,FN)在口腔鳞癌组织、细胞外基质以及体外细胞培养液中的表达.方法:(1)免疫组织化学染色;(2)鳞癌细胞体外培养;(3)细胞外基质的免疫荧光检查;(4)对肿瘤周围纤维细胞和正常纤维细胞的培养液进行蛋白印迹试验检查.结果:EDA和EDB在口腔鳞癌浸润癌巢周围的反应性基质区内有不同程度表达.肿瘤周围纤维细胞在体外分泌了大量富含EDA可变区的FN和少量的EDB可变区FN;正常纤维细胞只分泌EDA-FN基质而不分泌EDB-FN基质.肿瘤周围纤维细胞条件培养液中仅出现含EDA可变区的FN.结论:EDA和EDB在病损组织、体外细胞培养和肿瘤周围纤维细胞条件培养液中表达的差异提示这两个选择性剪切片段可能具有不同功能.     

老年人腹部手术前后测血CRP,FN,α1—AT含量的临床价值

６１例老年和１８例中青年患者于术前后检测了血ＣＥＰ、ＦＮ、ａ１－ＡＴ含量。病例分三组：Ａ（老年感染组）、Ｂ（老年无感染组）、Ｃ（非老年感染组）。结果：术前Ａ、Ｃ组ＣＲＰ含量明显高于Ｂ组，ＦＮ含量明显低于Ｂ组，Ａ、Ｃ组间含量无显著差异。术后１天三组ＣＲＰ值均升高，３天Ｂ组下降，７大基本降至术前水平，Ａ、Ｃ组５天有降低，７天又再上升。Ａ、Ｃ组间术后各天含量无显著差异；术后Ａ、Ｃ组ＦＮ含量均低于Ｂ组；术后１、３天Ａ、Ｃ组ａ１－ＡＴ含量高于Ｂ组。结果表明术后ＣＲＰ值持续上升，ＦＮ值持续下降对早期诊断老年人感染有一定临床价值。     

血浆冷沉淀物在深度烧伤创面的实验及临床研究

血浆冷沉淀物是将血浆置于 4℃时 ,获取的一种“冷不溶球蛋白” ,即纤维连接蛋白 (FN)。国内外数次的实验证明 ,FN是体内正常存在的大分子糖蛋白 ,具有很强的生物活性 ,它可作为趋化因子 ,起“净化”伤口的作用 ,为创面愈合创造条件 ;FN也有促进细胞生成的活性 ,促进上皮细胞生长 ,有利于皮片扩展 ;FN还在细胞上皮化过程中起“支架”作用。烧伤后体内FN下降 ,对创面愈合有一定影响 ,而深Ⅱ度烧伤创面基底细胞全部损伤 ,仅依靠残留的汗腺、毛囊上皮扩展修复 ,因而创面修复时间长而缓慢。我们通过动物实验与临床应用 ,观察到 :局部外用富含FN的血浆冷沉淀物 ,可以提高烧伤创面局部FN浓度 ,有利于上皮细胞扩展、移行、加速深Ⅱ度创面上皮化愈合过程。     

The Predictive Value of Plasma Fibronectin Concentration on Fetal Growth Retardation at Earlier Stage of the Third Trimester

The prevalence of intrauterine growth retarda-tion( IUGR) is about3%— 1 4% .The perinatalmorbidity and mortality of IURG is high as 6— 8times as the normal birthweight neonates,further-more the fetus future health and intelligence will beaffected[1] .The mechanism of IUGR is notcomplete-ly clear.When the disease is advanced ( >34weeks) ,it continues to be a clinical problem even inthe face of recent advance in obstetrics and pedi-atrics.So the earlier prediction and prevention arethe ke…