血液制品病毒灭活／去除技术平台的建立与应用

目的：建立血液制品病毒灭活／去除技术并应用于血液制品的病毒灭活／去除工艺验证。方法建立指示病毒库以及S／D处理法、低pH孵放法、干热法、巴氏消毒法、纳米膜过滤法等血液制品病毒灭活／去除技术,采用细胞病变法测定病毒滴度,Spearman和Karber法计算病毒滴度,病毒滴度降低量（ LRV）≥4判为有效,对企业的血液制品样品进行病毒灭活／去除验证。结果 S／D处理法和低pH孵放法可有效灭活有包膜指示病毒,干热法和巴氏消毒法可有效灭活有、无包膜指示病毒,纳米膜过滤法可在一定过滤量范围内去除PPV指示病毒。结论所建立的血液制品病毒灭活／去除技术可用于血液制品的病毒灭活／去除工艺验证,以提高血液制品的病毒安全性。     

发色底物法在酶促反应初速度内测定α1抗胰蛋白酶的活性

目的：优化发色底物法,使其在酶促反应初速度内测定α1抗胰蛋白酶（ AAT）的活性并用于血浆蛋白纯化过程中各样品活性的检测。方法采用酶标仪动态监测模式观察酶浓度和反应时间对酶促反应的影响;计算初速度并确定被底物饱和的最大酶浓度。将AAT与胰蛋白酶孵育,剩余靶酶和底物作用产生的光密度可反映AAT的活性。通过△D与AAT标准品活性进行拟合建立标准曲线,测定相关样品的活性,进行精密度和准确度验证。结果胰蛋白酶浓度为0．0625 mg／ml,20 min内酶促反应处于初速度内。 AAT标准曲线范围为200～1200 IU／ml, r＞0．99。该法测定Cohn Ⅳ、前处理液、洗脱峰样品中AAT的活性分别为（720．59±18．63）、（601．84±19．18）、（568．09±24．83）IU／ml。每个样品之间的RSD＜10％,加样回收率均在90％～110％。结论发色底物法经优化后,准确度和精密度大幅度提高,更适于实验室制备AAT或不同生产阶段样品的活性检测。     

α2－巨球蛋白活性检测方法的建立与优化

目的：建立α2－巨球蛋白（α2－macroglobulin ,α2－M）活性检测方法,检测Cohn组分Ⅳ中α2－M的活性。方法α2－M可与胰蛋白酶相互作用形成“α2－M－胰蛋白酶复合物”,利用酶标仪检测出“α2－M－胰蛋白酶复合物”与小分子底物Na－苯甲酰－DL－精氨酸－对硝基酰胺盐酸盐（ Na－benzoyl－DL－arginine 4－nitroanilide hydrochloride ,BAPNA）显色反应后的光密度值（410 nm）,根据建立的血浆α2－M活性标准曲线,定量计算出Cohn组分Ⅳ浓缩液中α2－M的活性。结果通过对实验体系中几个关键实验条件进行优化,建立了血浆α2－M活性标准曲线,并计算出Cohn组分Ⅳ浓缩液中α2－M活性的平均值为1．578 PU／ml。结论以正常人混合血浆作为参考标准品,用发色底物法检测Cohn组分Ⅳ浓缩液中α2－M的活性,方法简便易行,为α2－M制备过程中活性测定提供了实验基础。     

氢气通过诱导血红素加氧酶1表达减轻氧中毒急性肺损伤的实验研究

目的 研究氢气(H2)对于防治氧中毒急性肺损伤(HALI)的作用机制.方法 将30只雄性Sprague-Dawley大鼠随机分为3组:正常对照组、氧中毒模型组(HALI组)和H2治疗组(H2组).其中正常对照组大鼠仅暴露于常压空气,HALI组和H2组大鼠暴露于100%医用纯氧,每隔12 h分别腹腔注射医用生理盐水和氢饱和生理盐水(10 ml/kg).60 h后对各组大鼠进行动脉血氧分压检测和肺组织病理学检查,并应用RT-qPCR和Western印迹技术检测肺组织中血红素加氧酶1(human heme oxygenase 1,HO-1)的mRNA转录水平和蛋白表达水平.结果与HALI组相比,H2组大鼠因慢性纯氧暴露导致的肺损伤程度明显减轻,动脉血氧饱和度升高,HO-1蛋白及其mRNA在肺组织中的表达显著升高.结论 HO-1可能在H2防治大鼠HALI中发挥重要作用.     

猪APOBEC3F基因克隆及真核表达载体的构建与鉴定

目的 克隆猪载脂蛋白B mRNA编辑酶催化多肽样蛋白3F(apolipoprotein B mRNA editing enzyme,catalytic polypeptide 3F,APOBEC3F)基因,构建真核表达载体实现其在体外表达与鉴定。方法分离4头21周龄,体质量25～30kg的雌性健康五指山猪的外周血单个核...     

两种ELISA 试剂盒对我国单采血浆中水痘-带状疱疹病毒中和抗体滴度的测定和比较

目的采用两种不同的检测抗水痘一带状疱疹病毒（VZV）中和抗体间接ELISA法试剂盒,对我国单采血浆中vZv特异性免疫球蛋白（VZIG）的效价进行测定,比较两种试剂盒测定结果的相关性和血浆筛查的适用性,并分析利用国内单采血浆研发生产VZIG的可行性。方法随机选取182份单采血浆样品,100倍稀释后,使用Virion／Serion和VaccZyme／BindingSite两种商品试剂盒同时对样品进行测定,根据评估系统公式或曲线方程计算每份样品中VZIG的效价;采用Pearson乘积矩相关性方法对两种试剂盒的线性关系进行统计学分析。结果（1）VZIG高于10IU／ml的血浆样品数量为13份（7％,Vifion）和16份（9％,VaccZyme）;②两种试剂盒检测结果之间的直线线性关系数R2为0．62（P〈0．0001）,变异系数为4％;（3）Virion与VaccZyme的工作范围有不同,前者对于低效价（0．2—0．4IU／m1）样本的测定具有很好的灵敏度,而VaccZyme适用于高效价血浆样本（〉150IU／ml）的检测。结论Virion与VaccZyme结果具有一致性和相关性;两种试剂盒的工作范围略有差异,VaccZyme较Virion更适用于高效价VZIG原料血浆的检测,可用于普通献浆员单采血浆中VZV中和抗体的筛查。     

HCV第一高变区的免疫学研究

 HCV 属黄热病毒科，感染人体后可引起机体免疫应答发生异常，导致组织损伤，形成慢性持续性感染，并能进一步发展为肝硬化甚至肝细胞肝癌。目前全世界约有 1.7 亿 HCV 感染者，约有 75% 左右的急性丙型肝炎患者转为慢性感染，其中 10% ~ 20% 慢性丙型肝炎患者发展为肝硬化，1% ~ 5% 发展为肝癌^[1]。丙型肝炎在治疗和预防方面具有很强的局限性，这主要是由于 HCV 的高度变异性，其中位于 E2 NS1 区 N 端第 27 位氨基酸的变异性最大，通常称之为第一高变区（hypervariable region 1，HVR1）。研究证明 HVR1 中含有优势表位^[2]，其高度变异性也将对机体产生的针对 HCV 的细胞和体液免疫应答造成障碍。现本文就近年来有关 HCV-HVR1 的免疫学研究进展做一综述。......     

纤维蛋白止血敷料的生物相容性研究

目的评价纤维蛋白止血敷料的生物相容性。方法对纤维蛋白止血敷料进行如下生物学检测:细胞毒性试验(MTT法)、急性全身毒性试验、皮肤刺激试验、皮内刺激试验和溶血试验,根据标准对实验数据进行分析和评估。结果纤维蛋白止血敷料的细胞毒性分级0—1级;无急性全身毒性作用,无皮肤刺激反应、皮内刺激反应,无溶血性。结论纤维蛋白止血敷料具有良好的生物相容性。