NIH 3T3细胞转化前后细胞骨架及细胞表面纤维粘连蛋白的免疫荧光观察

本实验用抗纤维粘连蛋白(FN)亲和层析纯抗体和抗管蛋白抗体及鬼笔环肽,以免疫荧光组织化学方法,对NIH3T3细胞转染人肺腺癌细胞系AGZY基因组DNA前后细胞表面FN及细胞内骨架系统进行染色观察。结果表明,细胞在发生转化后,微丝及微管均表现出明显受损,细胞骨架结构不清,呈现为弥散样荧光;细胞表面FN大量减少,仅及正常NIH3T3细胞的1/9,其分布也由细丝形成的网状,变成斑点或斑块状。这一结果进一步证实,细胞恶变是涉及到细胞骨架系统及膜表面糖蛋白变化的复杂过程,并预示这些变化可能就是导致细胞形态发生变化、细胞失去正常生长调控的原因之一。     

猪纤维粘连蛋白对培养细胞的作用

本文报道了分离纯化猪血浆纤维粘连蛋白(fibronectin,FN)的方法及其对培养细胞的作用。根据 FN 与明胶和肝素有亲和性的特点,用偶联有明胶和肝素的 Sepharose 4B 亲和层析柱,我们首次从猪血浆中纯化得到大量 FN。将此 FN 涂于瓶底(2μg/cm~2)或加入到培养基中(4μg/ml),观察了     

猪血浆FN的分离及其性质鉴定

本文用明胶和肝素亲和层析柱等方法,从猪血浆中分离得到大量(0.5mg/ml)的纤维粘连蛋白(FN)。此FN在琼脂糖电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳中呈单一条带,分子量约450000;巯基乙醇还原后呈现分子量约230000的两条带;可以与抗人和抗牛血浆FN抗体发生免疫沉淀反应;并具有强烈促CHO细胞贴壁活性。提示猪血浆是一种分离提取FN的良好资源。     

纤维结合蛋白在伤口愈合中的作用

纤维结合蛋白(fibronectin.FN)是广泛存在于机体组织中的重要糖蛋白,它可以与纤维原、纤维蛋白原、肝素及硫酸肝素和胶原相结合,也可以通过位于细胞表面的 FN 受体与细胞和血小板等相结合。由于 FN 具有上述功能,它在伤口的修复和愈合过程中担着十分重要的作用:1)作为趋化因子(chemotaxis)诱导外周血中的单核细胞及其它吞噬细胞、上皮细胞、成纤维细胞向伤口处运动。2)作为一种非特异调理素(opsone)调动吞噬系统清除病菌及组织碎片、净化伤口。3)作为细胞运动的基质。4)作为基质形成的基础。5)作为生长因子,具有强烈的促细胞生长活性。     

多粘蛋白的分离及其与纤粘蛋白的比较

用明胶、肝素和精氨酸亲和柱等从猪血浆中分离得到一明胶亲和蛋白Polynectin(PN)。此蛋白与精氨酸的亲和性很高,借此与FN分开,经聚丙烯酰胺凝胶电泳证明,PN的分子量为450 000,由多个相同的小亚基连接形成。免疫双扩散和ELISA结果表明,PN与FN之间无免疫交叉反应,PN只存在于猪血中,人及其它动物(牛、羊,小鼠和大鼠)血中无PN。PN不具有促中国地鼠卵巢(CHO)细胞贴壁活性。提示PN是一种不同于FN的大分子糖蛋白。此外,用无PN的FN免疫兔,制得高效价FN抗血清(1:32),并进一步纯化制得亲和层析纯FN抗体.