缺血性脑血管病中凋亡基因调控的新进展

凋亡 (ａｐｏｐｔｏｓｉｓ) ,又叫细胞程序性死亡 (ｐｒｏｇｒａｍｍｅｄｃｅｌｌｄｅａｔｈ) ,是脑缺血后神经元死亡的一种重要形式。在脑缺血动物模型中 ,缺血中心区以坏死为主 ,而缺血半暗带则以神经元凋亡为主要形式[1 ] 。蛋白酶系统的级联反应和各种死亡基因及其产物的调节作用及线粒体的作用成为近年来凋亡发展研究的中心问题。在受到凋亡刺激时 ,半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶家族 (ｃａｓｐａｓｅ)被激活 ,诱导细胞凋亡 ,特异性ｃａｓｐａｓｅ抑制剂可阻止凋亡进展 ,所以有研究认为ｃａｓｐａｓｅ对神经元凋亡起关键作用 ,凋亡的最后实施…     

半胱天冬酶与中枢神经系统疾病

对凋亡 (ａｐｏｐｔｏｓｉｓ)的分子机制研究显示 ,凋亡是一个遗传性的程序性过程 ,涉及一系列基因的激活表达及调控。凋亡的失调与许多疾病 ,包括肿瘤、神经变性、自身免疫、心脏疾病和其他一些疾病的发病机制有关。本文介绍细胞凋亡的执行者———半胱天冬酶 (ｃｙｓｔｅｉｎｙｌａｓｐａｒａｔｅ ｓｐｅｃｉｆｉｃｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ,ｃａｓｐａｓｅ)以及ｃａｓｐａｓｅ抑制剂在中枢神经系统 (ｃｅｎｔｒａｌｎｅｒｖｏｕｓｓｙｓｔｅｍ ,ＣＮＳ)疾病中的研究进展。1　ｃａｓｐａｓｅ与细胞凋亡1.1　ｃａｓｐａｓｅ家族　对细胞凋亡所…     

ICE/CED3蛋白酶家族在中枢神经系统损伤中的作用

ＩＣＥ ＣＥＤ 3蛋白酶家族 (以下简称ＩＣＥ ＣＥＤ 3或ｃａｓｐａｓｅ)也叫ｃａｓｐａｓｅ家族 ,它们在细胞凋亡过程中发挥着重要作用。中枢神经系统 (ＣＮＳ)损伤如创伤和缺血 ,以及某些神经变性性疾病 ,如阿尔茨海默病都与ＩＣＥ ＣＥＤ 3介导的细胞凋亡过程有关。深入研究ＩＣＥ ＣＥＤ 3在ＣＮＳ损伤中的作用机制 ,可能有助于指导对ＣＮＳ疾患的临床治疗。1　ＩＣＥ ＣＥＤ 3的一般特性1.1　ＩＣＥ ＣＥＤ 3的概念和构成　ＩＣＥ ＣＥＤ 3家族也叫“ｃａｓｐａｓｅ”家族 ,该词源于“人类ＩＣＥ ＣＥＤ 3蛋白酶命名法则” ,实际上是“…     

死亡蛋白酶与细胞凋亡调控及机制

细胞凋亡 (Ａｐｏｐｔｏｓｉｓ)又称程序性死亡 (Ｐｒｏ ｇｒａｍｍｅｄＣｅｌｌＤｅａｔｈ ,ＰＣＤ)。ＰＣＤ由Ａｓｐ特异性半胱氨酸蛋白酶 (Ｃａｓｐａｒｔａｔｅ -ｓｐｅｃｉｆｉｃｃｙｓｔｅｉｎｙｌ ｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ ,Ｃａｓｐａｓｅ或Ｃａｓｐ)家族介导 ,活化的Ｃａｓｐ触发酶级联效应 ,引起染色体ＤＮＡ的降解及细胞解体[1] 。Ｃａｓｐ家族是ＰＣＤ过程的关键元件 ,它的激活与超常表达均引起细胞凋亡 ,因此又称死亡蛋白酶 ,他们通过与众多蛋白质因子的相互作用调控ＰＣＤ[1] 。1　Ｃａｓｐ家族及生物学特性Ｃａｓｐ最初表达为蛋…     

caspase3蛋白在胃癌及非典型增生中的表达及其与细胞凋亡的关系

转化生长因子 β(ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ β ,ＴＧＦ β)是一个具有多种生物学活性的细胞因子 ,可抑制正常上皮细胞和部分肿瘤细胞的生长 ,但肿瘤细胞常常逃避ＴＧＦ β的生长控制而无限增殖而促进肿瘤的发展 ;ＴＧＦ - β还可以诱导肿瘤细胞发生凋亡。目前 ,具体的凋亡诱导机制尚不清楚。Ｃａｓｐａｓｅ 3是介导细胞凋亡的一类蛋白水解酶 ,即ｃａｓｐａｓｅ中的关键效应酶。研究发现 ,ＴＧＦ β诱导部分肿瘤细胞调亡时常伴有ｃａｓｐａｓｅ3的激活[1 ,2 ] ,ＴＧＦ - β通过诱导胃癌细胞的ＴＳＣ 2 2基因表达并产生细胞凋亡也与ｃａｓｐａｓｅ3的激活密切相关[3] 。     

caspase-3与脑卒中

凋亡 (ａｐｏｐｓｉｓ)即程序化细胞死亡 ,除在神经系统发育和维持免疫系统的正常功能中具有重要作用外 ,还参与了脑卒中后神经元损伤的病理过程。细胞凋亡过程大致经历启动期、效应期、降解期 3个阶段。半胱氨酸蛋白酶 (ｃｙｓｔｅｉｎｙｌａｓｐａｒａｔｅ ｓｐｅｃｉｆ ｉｃｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ ,ｃａｓｐａｓｅ)的激活是凋亡效应期的一个十分重要的生化事件 ,其中ｃａｓｐａｓｅ 3在脑卒中后神经元损伤中的作用最引人注目。研究ｃａｓｐａｓｅ 3的激活与调控对于深入了解脑卒中的病理机制、并开辟新的治疗途径具有十分重要的作用。1　…     

γ—射线诱导HL—60细胞凋亡相关基因的分离和鉴定

为明确参与γ－射线诱导ＨＬ－６０细胞凋亡的ｃａｓｐａｓｅ家族成员，根据已知ｃａｓｐａｓｅ家族成员保守肽序列设计简并引物，经ＲＴ－ＰＣＲ从凋亡ＨＬ－６０细胞ｍＲＮＡ扩增出一条带，通过基因克隆及序列测定进行鉴定。结果克隆出ｃａｓｐａｓｅ－３ｃＤＮＡ的一段序列。说明ｃａｓｐａｓｅ－３参与了γ－射线诱导的ＨＬ－６０细胞凋亡，可能是该凋亡途径的枢枢元件。     

转导Caspase-1基因对人胃癌细胞药物敏感性的影响

许多研究表明,化学药物对敏感肿瘤细胞有促凋亡作用［１,２］。胃癌的发生发展与肿瘤细胞凋亡受抑有关,而且胃癌细胞对化疗药物的敏感性差。Ｃａｓｐａｓｅ－１基因是哺乳动物细胞促凋亡基因,转染该基因可使肿瘤细胞的增殖受抑,但对化疗药物的敏感性如何尚未见报道。为全面了解转导Ｃａｓｐａｓｅ－１基因后肿瘤细胞对化疗药物的敏感性,本实验观察了４种化疗药物对转染Ｃａｓｐａｓｅ－１基因的胃癌细胞的杀伤作用。１　材料和方法１．１　质粒、逆转录病毒载体构建及转染胃癌细胞株　人Ｃａｓｐａｓｅ－１－ｐＧＥＭ－１质粒由美国Ｔ…     

细胞内游离钙影响细胞凋亡的研究进展

钙离子作为第二信使在细胞的各项生理活动中已得到广泛的研究 ,但胞内游离钙和细胞凋亡之间的关系尚未得到进一步阐明。在病理 (如肿瘤 )状态下的研究也仅多见于神经和血液系统疾病中。本文就细胞内游离钙与细胞凋亡的最新研究作一综述。1　细胞凋亡途径　　细胞凋亡最终涉及核酸内切酶 (ＤＮａｓｅ)和半胱氨酸蛋白酶 (Ｃａｓｐａｓｅｓ) ,前者彻底破坏细胞生命活动所必须的全部指令 ,后者导致细胞结构的全面解体。ＤＮａｓｅ的激活需要有凋亡相关基因激活 ,但和Ｃａｓｐａｓｅ的激活也密不可分。Ｃａｓｐａｓｅ的激活主要有两条途径[1 ] ,…     

Ｃａｓｐａｓｅ－３沉默对缺血缺氧大鼠骨髓间充质干细胞凋亡的影响

【目的】 探讨沉默ｃａｓｐａｓｅ－３对大鼠骨髓间充质干细胞（ＭＳＣ）在体外缺血缺氧环境下凋亡的影响。【方法】 构建靶向ｃａｓｐａｓｅ－３的ｓｈＲＮＡ重组慢病毒并转染ＭＳＣ。建立缺血缺氧模型,流式细胞术和Ｈｏｅｃｈｓｔ荧光染色法检测细胞的凋亡情况。Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ检测ｃａｓｐａｓｅ－３的蛋白表达,Ｒｅａｌ－ｔｉｍｅ ＰＣＲ检测ｃａｓｐａｓｅ－３、Ｂｃｌ－２和Ｂａｘ的ｍＲＮＡ表达。【结果】 重组慢病毒成功转染ＭＳＣ。缺血缺氧环境下,转染组的细胞凋亡率为（１３．６６ ± ０．２０）％,低于空载体组的（２１．８６ ± ０．４３）％和空白对照组的（２２．２８ ± ０．４８）％（Ｐ ＜ ０．０１）。沉默ｃａｓｐａｓｅ－３后ｃａｓｐａｓｅ－３表达下调,Ｂｃｌ－２表达上调,Ｂａｘ表达下调,Ｂｃｌ－２／Ｂａｘ比值升高（Ｐ ＜ ０．０５）。【结论】 沉默ｃａｓｐａｓｅ－３能显著提高ＭＳＣ在缺血缺氧环境下的存活能力。     

半胱氨酸—天冬氨酸蛋白酶（Caspase）及其在细胞凋亡中的作用

白细胞介素β转化酶,即ＩＣＥ,与线虫死亡基因产物Ｃｅｄ－３蛋白相似,目前已发现１４种ＩＣＥ类似物,Ａｌｎｅｍｒｉ将ＩＣＥ家族统一命名为Ｃａｓｐａｓｅ（Ｃｙｓｔｅｉｎ－ａｓｐａｒａｔｅ ｐｒｏｔｅａｓｅ,半胱氨酸－天冬氨酸蛋白酶）,Ｃａｓｐａｓｅ以结构酶原形式广泛存在于细胞。Ｃａｓｐａｓｅ酶原主要经细胞色素Ｃ及死亡受体激活。Ｃａｓｐａｓｅ活性中心含半胱氨酸,其选择性裂解底物天冬氨酸后残基,通过对蛋白     

反义bcr／abl寡核苷酸诱导K562细胞凋亡时Caspase3表达及？…

用反义ｂｃｒ／ａｂｌ寡核苷酸片段诱导Ｋ５６２细胞凋亡,观察Ｃａｓｐａｓｅ３表达及活性变化,以阐明Ｃａｓｐａｓｅ在慢性髓性白血病（ＣＭＬ）发病机制中的作用。方法：用反义ｂｃｒ／ａｂｌ寡核苷酸片段ＡＳ和对照无义片段ＮＳ自理５６２,ＳＷＩＭＸＬＥＱＵＭＦ ＹＮＶ ＥＹ display status     

柔红霉素体外对HL-60细胞的凋亡作用

目的：了解柔红霉素（ＤＮＲ）体外作用于ＨＬ－６０　细胞时产生凋亡的规律及一些相关蛋白表达的变化。方法：应用光镜、ＤＮＡ电泳及ＦＣＭ检测ＨＬ－６０细胞发生的凋亡模式；用ＩＣ、ＦＣＭ观察相关蛋白的变化。结果：当ＤＮＲ浓度为０．２μＭ～２μＭ时，ＨＬ－６０细胞发生的凋亡率随浓度的增加与作用时间的延长而升高，可见典型的凋亡细胞及明显的ＤＮＡ梯度条带。１μＭ　ＤＮＲ作用２ｈ时，ｂｃｌ－２与ｃ－ｍｙｃ的荧光强度指数（ＦＩ）降低，ｂａｘ、ｃａｓｐａｓｅ－３　的　ＦＩ　升高；而作用５ｈ时，ｂａｘ、ｃａｓｐａｓｅ－３的ＦＩ值反而降低。结论：一定浓度的ＤＮＲ在体外可诱导ＨＬ－６０细胞凋亡，它可抑制ｂｃｌ－２与ｃ－ｍｙｃ蛋白的表达，而激活ｂａｘ、ｃａｓｐａｓｅ－３蛋白的表达。     

大鼠臂丛神经损伤后骨骼肌萎缩时肌细胞凋亡的研究

目的 研究大鼠臂丛神经损伤后骨骼肌萎缩与细胞凋亡的关系以及肌细胞凋亡的基因调控机制。方法 应用臂丛神经损伤后骨骼肌萎缩的大鼠模型,采用流式细胞仪ＰＩ法、ＰＩ和ＡｎｎｅｘｉｎＶ双标记法、原位末端标记、ＤＮＡ凝胶电泳和电镜等多种方法有骼肌萎缩与细胞凋亡的关系。并用免疫组织化学和Ｎｏｒｇｔｈｅｒｍ－Ｂｌｏｔ方法检测凋亡相关基因Ｆａｓ、ＦＡＤＤ、Ｃａｓｐａｓｅ－８、Ｂｃｌ－２、Ｐ５３、ｃ－ｍｙｃ的表达。结     

Bcl-2、Bax和Fas、FasL与急性白血病的关系

随着研究工作的不断深入 ,越来越多的资料显示与细胞恶性增殖和分化受阻一样 ,细胞凋亡异常在大多数恶性肿瘤的发病学上有重要地位。在恶性肿瘤的发病过程中 ,细胞凋亡异常的发生机制几乎涉及到细胞凋亡信号途径的所有方面 ,其中研究最深入、广泛的是凋亡抑制基因和凋亡活化基因的异常 ,下面就介绍一下凋亡抑制基因Ｂｃｌ- 2和凋亡活化基因Ｂａｘ以及Ｆａｓ、ＦａｓＬ与急性白血病 (ＡＬ)的关系。1　Ｂｃｌ 2Ｔｓｕｊｉｍｏｔｏ和Ｃｒｏｓｅ[1] 在绝大多数非霍奇金滤泡状Ｂ细胞淋巴瘤中发现存在染色体易位ｔ(14;18) ,该异位导致定位于 18号…     

丝裂原活化蛋白激酶与肿瘤

丝裂原活化蛋白激酶 (ｍｉｔｏｇｅｎ ａｃｔｉｖａｔｅｄｐｒｏｔｅｉｎｋｉｎａｓｅ,ＭＡＰＫ)级联是真核细胞介导细胞外信号到细胞内反应的重要信号转导系统 ,调节着机体细胞的生长、分化、分裂、死亡以及细胞间的功能同步化等多种过程[1] 。在人类已鉴定了4条ＭＡＰＫ通路 ,即细胞外信号调节蛋白激酶 (ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｓｉｇｎａｌ ｒｅｇｕｌａｔｅｄｐｒｏｔｅｉｎｋｉｎａｓｅ ,ＥＲＫ)通路 ,ｃ Ｊｕｎ氨基末端激酶(ｃ ＪｕｎＮ ｔｅｒｍｉｎａｌｋｉｎａｓｅ,ＪＮＫ) /应激激活蛋白激酶 (ｓｔｒｅｓｓ ａｃｔｉｖａｔｅ…     

FasL配体基因治疗血管损伤后再狭窄的研究进展

血管损伤反应是参与动脉粥样硬化和血管再狭窄形成的共同机制 ,在动物血管再狭窄模型中 ,经历了 4个相互交错的阶段[1] ,即炎性细胞浸润 ,血栓形成 ,血管平滑肌细胞增生 ,最后是基质形成。ＰＴＣＡ术后再狭窄率高达 30 %～ 50 % [2 ,3] ,血管平滑肌细胞 (ＶａｓｌｕｌａｒＳｍｏｏｔｈＭｕｓｃｌｅＣｅｌｌＶＳＭＣ)增生是主要的病理变化[4 ] ,而细胞凋亡与细胞增生存在密切关系 ,且参与了再狭窄的形成过程[5] 。促细胞凋亡基因Ｆａｓ配体 (ＦａｓｌｉｇａｎｄＦａｓＬ)导入ＶＳＭＣ ,能诱导ＶＳＭＣ细胞凋亡 ,抑制ＶＳＭＣ增生 ,在动物模型…     

凋亡抑制蛋白因子家族及其与肿瘤的关系

凋亡抑制蛋白因子家族 (ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｏｆａｐｏｐｔｏｓｉｓｐｒｏｔｅｉｎｓ,ＩＡＰｓ)是近 1 0年发现的一类抑制程序性细胞死亡的蛋白因子 ,它们主要的作用机制为∶①抑制半胱氨酸蛋白酶 ｃａｓｐａｓｅ及其前体 ;②对转录因子ＮＦ κＢ的调节及被调节作用。ＩＡＰｓ本身并不是癌基因 ,但这类蛋白因子能通过不同的途径抑制肿瘤细胞凋亡 ,促进肿瘤的发展及耐药的产生。一、ＩＡＰｓ基因的结构(一 )病毒性ＩＡＰｓ基因　最早的凋亡抑制蛋白因子基因是 1 993～ 1 994年从杆状病毒株ＣｐＧＶ和ＯｐＭＮＰＶ中分离出来的 ,该类基因可编…     

丝裂原活化蛋白激酶38通路在肾缺血—再灌注损伤时活性的变化及意义

丝裂原蛋白激酶 (ＭＡＰＫＳ .ｍｉｔｏｇｅｎ -ａｃｔｉｖａｔｅｄｋｉｎａｓｅ)是细胞内的一类丝氨酸 /苏氨酸蛋白激酶。研究证明 ,它是存在于大多数细胞内的一类重要信号转导酶类 ,可将细胞外信号传导到细胞核内 ,影响基因的转录和调控 ,进而影响细胞的生物学行为 ,如细胞增殖、分化、转化及凋亡等[1] 。目前研究表明 ,ＭＡＰＫＳ至少有三个亚类 ,分别为ＥＲＫｓ(ｅｘｔｒａｃｅｌｕｌａｒｓｉｇｎａｌ -ｒｅｇｕｌａｔｅｄｋｉｎａｓｅ)、ＪＮＫｓ/ＳＡＰＫｓ (Ｃ -ＪｕｎＮＨ2 -ｔｅｒｍｉｎａｌｋｉｎａｓｅ/ｓｔｒｅｓｓ -ａｃｔｉｖ…     

细胞凋亡及其研究进展

生物体内环境的稳定 ,不但依赖细胞增殖和分化 ,也依赖于细胞的凋亡。细胞凋亡又叫编程性死亡 ,是生物界重要的生命现象之一。早在 1 0 0多年前ＣａｒｌＶｏｇｔ就发现了这种死亡形式[1 ] 。 1 972年Ｋｅｒｒ等重新提出研究 ,并命名为凋亡 (ａｐｏｐｔｏ ｓｉｓ)。近期的研究在三方面有明显的进展 :①哺乳动物的凋亡是由遗传基因控制的。②阐明了凋亡信号传递途径是由特殊的死亡信号激活半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶系统 (ｃａｓｐａｓｅｓ)来诱导细胞凋亡。③对凋亡在疾病发病机制中的作用及应用凋亡理论和实践来防治疾病。1　凋亡产生的三个步…