过敏所致急性纤维素性机化性肺炎的诊治经验及文献复习

急性纤维素性机化性肺炎是一种罕见类型的间质性肺疾病,其病因及相关发病机制尚不明确,国内外关于此项疾病的研究及报道较少,亦无明确的诊断标准与规范的治疗方案。报道多为感染或药物不良反应相关,对过敏所致的此类疾病报道罕见,本文总结了成功诊治的一例此类患者相关诊疗经过,并做相关文献复习,以提高对该疾病的认识,避免误诊漏诊,同时提供一治疗方案供临床参考。     

碱性成纤维细胞生长因子基因转染大鼠骨髓间充质干细胞后目的基因的表达

目的:观察碱性成纤维细胞生长因子基因转染大鼠骨髓间充质干细胞后bFGF目的基因的表达情况,并进行影响骨髓间充质干细胞的生物学特性分析。方法:实验于2005-03/2006-02在中山大学第二附属医院医学研究中心完成。①选择近交系4周龄雄性SD大鼠10只,贴壁法分离培养骨髓间充质干细胞,构建含bFGF基因的腺病毒表达载体,利用腺病毒介导转染SD大鼠骨髓间充质干细胞。②传2代后,将细胞接种12孔培养板,培养至90%融合时弃上清,调整转染病毒滴度范围为50～400。荧光显微镜下通过观察绿色荧光强度检测转染效果,以流式细胞仪检测细胞转染效率。③传2代后,胰酶消化,置于6孔板内,每孔细胞数量5×105,2d后细胞贴壁生长于盖玻片上,分别转染Ad.bFGF、Ad.GFP,同时设立空白对照。转染病毒滴度选择200。应用免疫组化和Western-Blot法鉴定碱性成纤维细胞生长因子的表达,ELISA法检测培养上清液中碱性成纤维细胞生长因子的浓度。观察转染后骨髓间充质干细胞形态和生长情况的变化。结果:①pcDNA3/bFGF的鉴定结果:成功构建碱性成纤维细胞生长因子腺病毒表达载体。②Ad.GFP转染骨髓间充质干细胞的效率测定:转染48h后,绿色荧光蛋白的表达明显增强。当转染病毒滴度≤200时,腺病毒的转染效率与病毒剂量呈明显的正相关(P<0.05),当>200时转染效率趋于稳定,均在96%以上。③Ad.bFGF转染骨髓间充质干细胞的表达情况:bFGF蛋白表达免疫组化检测可见转染Ad.bFGF骨髓间充质干细胞的胞浆内充满棕褐色颗粒,阳性表达率为86%,而转染Ad.GFP及空白对照的骨髓间充质干细胞均为阴性。Western-Blot示转染Ad.bFGF的细胞裂解产物中碱性成纤维细胞生长因子含量明显高于转染Ad.GFP及空白对照。ELISA检测结果表明转染Ad.bFGF的细胞培养上清液中碱性成纤维细胞生长因子浓度第15天达高峰1467ng/L,此后逐渐下降,但至转染第28天时仍显著高于空白对照(441ng/L,128ng/L,t=4.31,P<0.01)。④转染Ad.bFGF对骨髓间充质干细胞增殖的影响:骨髓间充质干细胞的增殖分化没有明显变化。结论:采用腺病毒介导的基因转染技术可以将碱性成纤维细胞生长因子转染至骨髓间充质干细胞中,并有外源性基因和蛋白的表达。提示骨髓间充质干细胞是碱性成纤维细胞生长因子基因治疗的理想载体。     

原发性高血压患者主动脉夹层钙化特点分析

目的分析原发性高血压患者主动脉夹层(AD)的血管钙化(VC)特点。方法选择2010年1月至2015年12月于中山大学孙逸仙纪念医院住院的原发性高血压并经过主动脉计算机断层扫描血管造影(CTA)确诊为AD的30例患者为AD组,原发性高血压且主动脉CTA提示无主动脉病变者30例为对照组。通过CTA和Agatston评分系统分析2组人群以及不同Stanford类型AD患者之主动脉钙化特点。结果与对照组比较,AD组降主动脉VC发生率升高(P0.05),主动脉弓VC发生率下降(P0.05)。2组Agatston评分及不同程度VC发生率的差异无统计学意义(均P0.05)。AD组患者分为Stanford A型及Stanford B型2个亚组。2个亚组的临床资料、主动脉及不同部位VC发生率差异无统计学意义(均P0.05)。多因素Logistic回归分析显示,与AD病变相关的因素有:低密度脂蛋白胆固醇(OR=3.397,95%CI 1.234～9.354,P=0.018)、不规律服用降压药(OR=20.417,95%CI2.326～179.233,P=0.006)、主动脉弓VC发生率(OR=0.027,95%CI 0.002～0.357,P=0.006)及降主动脉VC发生率(OR=35.606,95%CI 2.475～512.27,P=0.009)。结论原发性高血压患者主动脉不同部位钙化特点不同可能是高血压促进AD病变的重要环节。     

非小细胞肺癌淋巴结转移和预后与CD133和CD147表达的关系

目的观察肿瘤干细胞标志物CD133和CD147在非小细胞肺癌（NSCLC）组织中的表达及其临床意义。方法用免疫组织化学方法检测77例NSCLC组织中CD133与CD147的表达，分析其与患者肿瘤大小、组织学类型、组织分化程度、淋巴结转移和预后的关系。结果77例NSCLC组织中CD133与CD147的阳性表达率分别为51．9％（40／77）和67．5％（52／77）。CD133和CD147的表达与淋巴结转移呈正相关（r=0．246，P〈0．05；r=0．295，P〈0．05）；CD133和CD147的表达均与患者术后生存时间呈负相关（P〈0．05）。CD133和CD147的表达与肿瘤大小、组织学类型和组织分化程度均无明显相关（P〉0．05）。CD133与CD147的表达之间呈正相关（r=0．315，P〈0．05）。结论肿瘤干细胞标志物CD133和CD147的表达与NSCLC的淋巴转移和患者预后密切相关，它们的高表达提示预后不良。     

不开胸食管剥脱术在颈段食管癌中的治疗价值

目的探讨不开胸食管剥脱术治疗颈段食管癌的效果。方法自1995年7月至2004年12月对21例颈段食管癌患者行不开胸食管剥脱术并Ⅰ期行胃咽吻合或胃食管端侧吻合术。结果本组病人的手术切除率100%。手术后发生各类并发症8例,其中吻合口瘘3例,肺部感染3例,伤口裂开1例,气胸1例。18例患者术后有不同程度的胃液反流。1例住院期间因胃大出血死亡。除2例失访外其余患者获得随访27个月～12年,13例存活超过1年,6例存活超过3年,3例存活超过5年。结论不开胸食管剥脱术手术简单,效果满意,适用于颈段食管癌。食管剥脱术后行胃代食管者胃液反流严重,手术方式有待进一步改善。     

P53表达在胸腺瘤分型中的意义

目的探讨P53的表达在不同类型胸腺瘤中的意义。方法选取我科2000年5月至2005年12月29例经病理证实的胸腺瘤手术切除标本,采用SP免疫组化方法检测P53蛋白在胸腺瘤中的表达情况。结果P53阳性表达率分别为:良性胸腺瘤7.70%,恶性胸腺瘤I型50.00%,胸腺癌100%。P53的表达随着肿瘤恶性程度的增高而增加(P<0.05)。P53蛋白表达的阳性率与胸腺组织学类型及是否伴有重症肌无力(MG)无关(P>0.05)。结论P53的表达在不同类型胸腺瘤中差异显著,对于判断胸腺瘤良恶性有重要参考价值。     

小鼠梗死心肌组织上VEGF基因治疗和骨髓间充质干细胞移植的实验研究

目的 探讨VEGF基因治疗和MSCs移植各对梗死心肌组织的影响.方法 将相同基因背景的SD雄性大鼠30只随机分成A、B、C三组.建立心肌梗死模型后,MSCs组注射MSCs 4×106 cells/50 μl.AdVEGF组注射AdVEGF 5×107 pfu 50μl.Control组(对照组)注射无血清IMDM培养液50 μl.移植前、移植后2、4周分别用超声检测心功能.病理中检测细胞存活分化和血管新生情况.结果 MSCs组移植2、4周后AdVEGF组与Control组相比,心功能较移植前有明显改善(P＜0.01),而且病理提示大部分MSCs己向心肌样细胞分化.MSCs组和AdVEGF组都有促血管新生作用,MSCs组为(5.94±1.67)mm;AdVEGF组(13.59±1.08)mm,Control组(对照组)无新生血管出现.结论 移植于梗死心肌的骨髓间充质干细胞可以存活,并在一定程度上改善了受体的心功能.     

腺病毒介导血管内皮细胞生长因子基因体外转染骨髓间充质干细胞

 【目的】探讨腺病毒介导血管内皮细胞生长因子(VEGF165)基因转染大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)后目的基因表达情况及对MSCs增殖分化的影响。【方法】构建含VEGF基因的腺病毒表达载体,利用贴壁法分离培养MSCs后,用荧光显微镜和流式细胞仪检测转染效果和转染率,用免疫组化、Western-Blot和ELISA方法分别检测VEGF基因转染MSCs后VEGF的表达情况。【结果】腺病毒介导的VEGF基因对于MSCs具有很高的转染效率,转染效率与病毒感染复制数(multiplicyties of infection,MOI)具有量效关系。MOI为150倍时,转染效率>95%,转染VEGF后,MSCs可有效表达VEGF,9d时达到表达高峰(1125pg/mL),13d后仍可检测到VEGF的表达。转染VEGF对MSCs的增殖分化没有明显影响。【结论】腺病毒介导的VEGF基因可以有效的转染MSCs,MSCs是一种理想的基因载体细胞,其携带的VEGF基因可获得较高的表达水平。     

MRI活体示踪心肌梗死大鼠骨髓间充质干细胞的移植

背景：干细胞移植的疗效和安全性评估均需要对体内干细胞的存活、分布、迁徙、增殖及分化进行连续监测。目的：观察MRI示踪超顺磁性氧化铁标记的骨髓间充质干细胞在缺血心肌组织的分布、迁徙情况。方法：直接贴壁法分离和培养大鼠骨髓间充质干细胞,获得的细胞进行免疫鉴定。以新型超顺磁性氧化铁标记骨髓间充质干细胞,体外MRI成像确定其体内示踪的可行性。标记后锥虫蓝拒染试验、MTT比色试验分别检测标记细胞的活力、增殖情况。60只SD大鼠随机分为3组,制备大鼠心肌梗死模型2周后再次开胸移植含标记骨髓间充质干细胞的PBS混合液、含未标记骨髓间充质干细胞的PBS混合液和等量PBS。于移植后第1天、第3周行MRI检查,动态观察移植细胞的分布、迁徙,并根据MRI图像定位选择性行CD90免疫组化检查。结果与结论：骨髓间充质于细胞标记后,普鲁士蓝染色见胞浆内蓝色铁颗粒,标记效率为99％,标记细胞与未标记细胞间锥虫蓝拒染率、MTT吸光度差异无显著性意义。体外MRI可检测到标记细胞,并在T2WI及T2W／FFE序列上呈低信号。细胞移植1d后,在T2WI及T2W／FFE序列上可见标记细胞在梗死心肌边缘呈类圆形低信号;移植3周后,移植区域信号边界模糊,范围扩大,对比度降低。CD90免疫组化检测证实移植细胞可由梗死边缘向梗死区域迁徙。结果可见新型超顺磁性氧化铁可成功对大鼠骨髓间充质干细胞进行标记,细胞标记后可被MRI检测。     

沉默caspase-3基因影响骨髓间充质干细胞的增殖和凋亡

背景：缺血缺氧的心肌微环境导致植入的细胞存活率低。目的：观察沉默caspase-3基因对大鼠骨髓间充质干细胞增殖和体外缺血缺氧环境下凋亡的影响。方法：构建靶向caspase-3的shRNA重组慢病毒并转染骨髓间充质干细胞为转基因组,以正常细胞组和空载体组做对照,采用MTS法检测各组细胞增殖情况。建立缺血缺氧模型,real-timePCR和免疫组织化学分别检测缺血缺氧环境各组细胞的caspase-3mRNA和蛋白表达水平,应用流式细胞术检测不同缺血缺氧时间点（0,6,12,24,48h）各组细胞的凋亡率。结果与结论：重组慢病毒成功转染骨髓间充质干细胞,且细胞增殖活性升高（P〈0．05）。缺血缺氧环境下,转基因组细胞caspase-3在mRNA和蛋白表达水平相比对照组下降（P〈0．05）。沉默caspase-3能显著降低骨髓间充质干细胞的凋亡率（P〈0．05）,且随着缺血缺氧时间的延长凋亡率缓慢升高。结果提示,沉默caspase-3能加快骨髓间充质干细胞的生长速度和提高在体外缺血缺氧环境下的抗凋亡能力。