低强度脉冲超声促进兔髌骨-髌腱连接点纤维软骨愈合的形态学分析

目的: 观察低强度脉冲超声对兔髌骨-髌腱连接点愈合的影响。方法: 60只成熟雌性新西兰大白兔按同一标准行髌骨部分切除术,术后按治疗方式随机分成对照组和治疗组。对照组术后给予安慰治疗,治疗组术后3d~6周给予低强度脉冲超声治疗。分别于术后6,12,18周时处死动物并获取髌骨-髌腱复合体标本,标本常规脱钙后做成切片行H&E染色与番红素染色用于组织学观察。利用SANO Microscope Partner显微图像测量软件进行组织学分析,比较两组纤维软骨层厚度与灰度值差异。结果: 术后6,12和18周时,治疗组的纤维软骨层厚度明显大于对照(P<0.01),灰度值明显小于对照(P<0.01)。结论: 低强度脉冲超声可以促进兔髌骨-髌腱连接点纤维软骨层的愈合。     

低强度脉冲超声对兔膝髌骨骨腱接点修复作用的MR初步评价

目的 探讨MR在评价低强度脉冲超声促进兔膝髌骨骨腱接点修复方面的价值.方法 将28只成年兔左膝髌骨骨腱接点损伤修复术后随机分为2组,超声组在术后3天开始每日接受低强度超声刺激,对照组在术后不给予治疗,分别于术后3周、6周(n=7)行MR横断、矢状、冠状面扫描,扫描序列包括SE T1WI、GE T1WI、GE T2WI和STIR序列,分析MR表现.结果 对照组术后3周MR可见髌骨骨腱接点重接区域结构模糊,髌韧带下1/4段肿胀;术后6周见髌骨清晰,髌韧带上3/4段轮廓可辨,髌韧带下1/4段水肿基本消失,张力良好.超声组术后3周MR所见与对照组比较无明显差异,术后6 周MR可见髌骨骨腱接点重接区域结构较对照组清晰,髌韧带上3/4段信号更低.结论 MR可显示兔膝关节髌骨骨腱接点重接术后早期变化,在评价低强度脉冲超声对髌骨骨腱接点修复作用方面具有一定价值.     

软骨细胞-海藻酸钠水凝胶微球修复大鼠颅骨缺损

目的 探讨软骨细胞-海藻酸钠水凝胶修复骨缺损的可行性,比较其与单纯海藻酸钠水凝胶修复效果的差别.方法 取SD大鼠乳鼠膝关节软骨分离培养获得第2代软骨细胞,以1×106/mL接种于海藻酸钠水溶液中培养并交联形成复合水凝胶微球.取12只2月龄雄性SD大鼠,建立颅顶单侧缺损模型,随机分为实验组与对照组,分别植入软骨细胞-海藻酸钠水凝胶和单纯海藻酸钠水凝胶微球.于术后6周取材行大体及组织学观察以及Micro-CT扫描定量分析.结果 大体观察示术后6周实验组缺损已基本修复完全,表面光滑无塌陷或碎裂,质地较硬接近新生骨组织;对照组缺损明显,周围为不规则骨和纤维结缔样组织.Micro-CT扫描示实验组颅骨缺损得到良好的修复重建,定量分析示实验组骨矿物质密度、骨组织体积分数及骨小梁数目均高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).组织学观察示术后6周实验组缺损区由新生骨组织修复,含少量软骨及纤维结缔组织,出现血管结构;对照组缺损明显,边缘主要由纤维结缔组织和少量新生骨组织构成.结论 海藻酸钠复合软骨细胞制备的水凝胶微球对于大鼠颅骨缺损具有一定的修复效果.     

体外冲击波对兔ACL重建腱骨愈合影响的组织学观察

目的组织学观察体外冲击波（Extracorporeal Shock Waves,ESW）治疗对前交叉韧带（ACL）重建后腱骨愈合的影响。方法健康新西兰大白兔18只（2-3月龄雌雄不限）,随机分为2组,采用趾长伸肌腱建立ACL重建动物模型,ESW治疗组ACL重建术后24h给予冲击波治疗,对照组不给予冲击波处理,术后2、4、8周处死动物取标本行HE染色观察组织学改变,血管墨汁灌注观察愈合组织新生血管含量。结果 ESW组术后4周腱骨界面成纤维细胞和成软骨细胞增生活跃,胶原纤维合成明显增多、排列规则。术后8周腱骨界面由致密结缔组织连接,胶原纤维大量合成、呈垂直纵向规则排列,部分区域出现胶原纤维-纤维软骨组织-骨组织的移行带改变,形成类似韧带直接止点样结构。腱骨界面组织愈合较对照组迅速。术后4周和8周腱骨界面新生血管的含量ESW组明显高于对照组（P=0.028,P=0.008）。结论 ESW作用可诱导腱骨界面血管新生,改善腱骨界面血供,促进腱骨界面组织愈合。     

低强度脉冲超声对兔腰椎融合区软骨内成骨的影响

目的:观察低强度脉冲超声对兔腰椎融合区软骨内成骨的影响,探讨其可能的作用机制.方法:20只新西兰兔行双侧腰椎后外侧融合术,左侧植入自体髂骨,右侧植入羟基磷灰石人工骨.所有实验兔随机分成治疗组和对照组,治疗组于术后1周开始低强度脉冲超声治疗,共4周;对照组予以假治疗.于手术结束及超声治疗结束时摄腰椎后前位X线片观察融合情况;组织学检测观察融合区形态学结构,并计数软骨细胞.结果:治疗组X线融合率明显高于对照组(P＜0.05).组织学切片发现治疗组融合区骨小梁结构丰富,软骨细胞数量明显高于对照组(P＜0.05),髂骨组与人工骨组治疗后软骨细胞数量无统计学差异(P＞0.05).结论:低强度脉冲超声能提高兔腰椎后外侧融合的植骨融合率,其可能机制是促进软骨内成骨.     

局部运用神经生长因子促进骨折愈合的实验研究

目的:研究神经生长因子对骨折愈合促进的作用,为临床上促进骨折愈合,减少骨不连发生提供有效、安全的治疗方法。方法:在大白兔右侧腓骨中下段截骨制造骨折模型,实验组采用神经生长因子进行治疗,对照组相同剂量的生理盐水进行治疗,在第2、4、6周抽取该组实验兔耳缘静脉血作肾上腺素和去甲肾上腺素测定。在第3、6周后除死大白兔,作病理形态学检查,最后进行统计学处理。结果:骨折后第2、4、6周,在血清中的肾上腺素和去甲肾上腺素浓度实验组高于对照组,差异具有统计学意义(P<0.01或P<0.05)。病理检测实验组在术后第2周纤维骨痂中已有大量透明软骨细胞形成,第6周骨痂中的透明软骨细胞已被成骨细胞替代;而在对照组术后第2周纤维骨痂中仅有纤维组织,而且其间还有破骨细胞存在,术后第4周骨痂中出现了透明软骨细胞,第6周骨痂中的软骨细胞仍没有完全成骨细胞化。结论:神经生长因子对骨折愈合有明显促进作用。     

增强型纤维蛋白胶组织工程支架修复关节软骨缺损的组织学评估

目的 探讨以增强型纤维蛋白胶(FG)为支架构建组织工程化软骨修复兔关节软骨缺损的可行性.方法 ①通过在FG中引入抑肽酶和氨甲环酸,构建细胞标准FG支架复合物和细胞增强FG支架复合物.②将6月龄新西兰兔32只(体重2～2.5 kg)分成A组13只、B组13只、C组6只.复合物体外培养后植入动物模型体内,按缺损内分别植入细胞标准FG复合物和细胞增强FG复合物作为A,B组,C组为空白对照.术后第6,12和18 周取材(n=8),对新生软骨进行大体、光镜观察及组织学评分.结果 A组术后18周,软骨细胞分化良好,表面较平整,但软骨细胞修复层较薄,未形成典型的束状排列.B组术后18周,修复软骨与正常软骨厚度一致,细胞排列进一步趋于规则,富含阿利欣蓝染色阳性基质.C组术后6,12,18 周缺损区均主要由纤维瘢痕充填.细胞增强FG支架组新生软骨组织在组织学特性上与正常软骨组织相似,组织学评分优于标准组,两者统计学上差异有显著性(P＜0.05).结论 在纤维蛋白胶中加入抑肽酶和氨甲环酸,可显著地减缓纤维蛋白胶的降解速度,使FG降解速度与软骨细胞基质形成速度同步,提高了软骨修复质量.     

大鼠实验性骨关节炎模型的建立及病理特征

目的 通过前交叉韧带切断建立大鼠骨关节炎模型并观察其病理特征,为骨关节炎的研究提供经济有效的动物模型.方法 体重200～250 g的3月龄Wistar大鼠雌雄各20只,随机选取30只作为实验对象,每只随机选取一侧膝关节作手术侧.苯巴比妥钠麻醉后常规备皮消毒膝关节,取髌旁内侧切口显露膝关节髌骨后,将髌骨向外侧脱位,尽量屈曲膝关节显露前交义韧带,在直视下切断前交叉韧带,将髌骨复位,闭合关节腔,对侧不手术作为空白对照组,大鼠不作任何固定措施,分笼饲养.另10只作为假手术对照.术后3 d每天每只大鼠肌肉注射青霉素20万单位预防感染.分别于术后2、4及8周,随机处死10只大鼠,对软骨退变情况行大体观察及光镜观察.结果 实验组2周时,关节软骨失去正常光泽,软骨面不规则;4周时,10例中有4例出现关节积液,并可见滑膜增生,软骨面粗糙糜烂,色泽灰暗;8周时,10例中有8例出现关节积液和滑膜增生,软骨面不规则,出现溃疡甚至软骨缺损,软骨下骨质裸露.光镜下改变:2周后,可见软骨表面原纤维形成,表层软骨细胞肿胀变圆,扁平的软骨细胞减少,软骨细胞簇集,基质番红花红O-固绿染色开始出现减退.4周后,软骨表面原纤维形成明显,表层及中层细胞收缩,细胞数量弥漫性增多,出现大量簇集细胞团,潮线紊乱,基质番红花红O-固绿染色明显减退.滑膜出现增生.8周后病变进一步加重,大部分软骨的表层细胞消失,软骨表面出现溃烂缺损,软骨细胞数量减少,可见坏死崩解细胞,潮线紊乱甚至消失,番红花红O-固绿染色重度减退甚至消失.滑膜亦见明显增生肥厚,出现单核淋巴细胞浸润.结论 前交叉韧带切断能诱发大鼠骨关节炎的发生,其病理改变随时间增加而加重.     

应用凝胶接种技术体外分层构建工程化骨软骨复合组织的初步研究

目的 应用组织工程原理,探索体外构建骨软骨复合组织的关键技术,为移植修复关节骨软骨组织缺损创造条件.方法 采用组织分层构建策略,用兔成骨细胞和羟基磷灰石支架材料,采用凝胶接种技术,体外构建组织工程骨;用兔软骨细胞和聚乳酸/聚磷酸钙纤维支架材料,采用凝胶接种技术,体外构建组织工程软骨;体外培养48 h后,利用界面间凹凸进行压配,并结合蛋白胶粘贴形成工程化骨软骨复合组织;将构建组织移植到裸鼠皮下,以相同大小无细胞复合的支架材料为对照组,术后12周取材进行病理分析.结果 采用凝胶接种技术,在体外可以初步构建组织工程骨和软骨,进而构建工程化骨软骨复合组织;工程化骨软骨复合组织移植到裸鼠皮下,术后12周实验组5例样本在成骨和成软骨区域观察到成骨和成软骨表现,但缺乏正常的钙化层界面结构,而对照组5例未观察到软骨组织形成.结论 采用组织分层构建策略,采用简单的压配技术和新型凝胶接种技术可以在体外初步构建工程化骨软骨复合组织.     

聚乳酸涂层的多孔羟基磷灰石负载软骨细胞移植修复兔关节软骨缺损

目的　研究复合材料负载软骨细胞修复兔关节软骨缺损。方法　把软骨细胞种植到聚乳酸 (PLA)涂层的多孔羟基磷灰石 (HA)表面 ,培养 2周后 ,移植软骨细胞 载体的复合体修复兔膝关节股骨髁的软骨缺损 (直径约 5mm ,深约 2 .5mm ,达钙化层 )。然后对缺损的修复情况在移植后进行大体、光镜评估和电镜观察。另外对兔膝关节正常的软骨和移植后 12周缺损处的修复软骨进行胶原量的测定。结果　移植的软骨细胞能在复合材料上良好地生长 ,形成透明软骨 ,软骨缺损被修复。无细胞移植的对照组仅纤维修复。另外 ,多孔HA在修复过程中充当了软骨下骨的临时替代。胶原量的测定显示移植 12周后的修复软骨胶原量约 44 .6 9% ,自身正常的软骨胶原量约为 5 4.74% ,两者差异有统计学意义。结论　PLA涂层的多孔HA负载软骨细胞移植能以透明软骨的方式成功修复兔膝股骨髁软骨缺损。软骨细胞不成熟导致胶原量的差异有统计学意义。     

组织工程化骨修复兔桡骨缺损的实验研究

目的:探讨骨髓间充质干细胞复合脱钙骨基质和骨形成蛋白修复兔桡骨缺损的效果。方法:体外分离、培养骨髓间充质干细胞,复合于脱钙骨基质,以骨形成蛋白进行成骨化诱导。日本大耳白兔45只,随机分为3组,A组:骨髓间充质干细胞+脱钙骨基质+骨形成蛋白;B组:脱钙骨基质+骨形成蛋白;C组:空白组。行兔15 mm桡骨缺损修复。术后12周取桡骨标本,大体观察并手法评估3组桡骨缺损修复情况,组织学及生物力学测定植入材料融合情况。结果:术后12周,大体可见A组基本骨性愈合,融合组织质地硬,形态不规整;B组见少量骨痂形成,尚有部分缺损未愈合。C组骨缺损处见肉芽组织充填,未见骨痂形成。组织学观察Masson染色示A组大量软骨形成,靠近连接处可见新生骨小梁形成且处于成骨活跃期,软骨与骨组织之间过渡自然。B组可见部分新生骨小梁形成,材料骨小梁变细较少,断裂明显。C组未见新生骨小梁形成。生物力学测定A组的最大载荷、抗压强度和弹性模量分别为(87.8±9.8)N、(8.4±0.9)MPa及(187.5±8.2)GPa,均低于健侧组([112.3±11.2)N、(9.5±0.2)MPa及(210.5±15.9)GPa],且组间比较有统计学差异(P<0.05)。结论:骨髓间充质干细胞复合脱钙骨基质和骨形成蛋白修复兔桡骨缺损,优于应用脱钙骨基质和骨形成蛋白,早期生物力学强度低于正常骨组织。     

低强度超声丹参透入疗法对骨折愈合影响的实验研究

目的：观察低强度超声丹参透入疗法对骨折愈合的影响。方法：45只新西兰大耳白兔,人为造成右桡骨中段3 mm骨质缺损作为骨折模型,随机分为3组：超声波治疗组（超声组）,超声波联合外用丹参治疗组（实验组）和对照组（不做任何治疗）,分别在术后2、4、6周行 X线检查,进行评分,同时观察比较X线片骨痂灰度值。对部分骨折组织行组织病理检查,从组织学角度观察分析骨折愈合情况。结果：X线检查结果显示实验组骨折愈合较超声组和对照组均提前。术后2、4、6周时 X线评分值,X线骨痂灰度值,实验组均高于超声组和对照组（P〈0.01）。组织病理结果显示,实验组在机化血肿,纤维、软骨、骨性骨痂生长等方面都优于对照组和超声组。结论：超声波丹参透入疗法对骨折愈合有较好的促进作用。     

含天然钙化层的骨软骨材料修复猪膝关节软骨缺损

目的 构建含和不含天然钙化层的修复材料,比较两者在猪膝关节软骨缺损修复中的效果,探讨钙化层在骨软骨组织工程中的重要性.方法 选取普通实验猪膝关节骨,软骨通过Ⅱ型胶原水凝胶冻干技术和天然骨软骨脱细胞技术构建含有钙化层和无钙化层的骨软骨支架,以贵州小香猪自体骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)为种子细胞,构建移植修复材料.30只小香猪按随机数字表法分为空白对照组、无钙化层组、含钙化层组(n=10).双膝关节滑车骨软骨缺损造模,直径8 mm,深至软骨下骨,植入对应的修复材料.分别于12、24周取材,采用大体、体式显微镜观察,以及MRI检测缺损填充情况,HE染色、番红0-固绿染色,以及Ⅰ、Ⅱ型胶原蛋白免疫组化染色观察新生修复物的组织类别,O'Driscoll组织学评分评价修复效果.结果 各组术后24周修复效果较12周均有改善.大体和体式显微镜观察,24周空白对照组新生组织部分填充缺损,为纤维组织,软骨表面凹陷深大;无钙化层组移植物填充缺损,软骨表面凹陷;含钙化层组缺损填充较好,表面微凹陷,三层结构可见,与宿主组织整合佳.组织学观察提示空白对照组为纤维组织填充修复;无钙化层组为骨和纤维软骨修复,三层结构不明显;含钙化层组钙化层结构清晰,移植物与宿主整合,软骨表面微凹陷,透明软骨修复.O'Driscoll组织学评分,12、24周空白对照组分别为(3.80±0.83)、(5.50 ±0.52)分,无钙化层组分别为(10.30±0.63)、(14.20±0.68)分,含钙化层组分别为(15.10±0.58)、(18.80±0.87)分,各组评分差异均有统计学意义(P＜0.01),含钙化层组评分最高.结论 含有天然钙化层的骨软骨支架,在猪骨软骨缺损修复中取得了很好的修复效果,明显优于无钙化层支架和空白对照,是今后软骨组织工程支架设计的重要参考.     

运动对骨软骨骨折转归影响的MRI表现与MMP-13表达

观察运动对骨软骨骨折(OCF)转归影响的MRI表现及MMP-13在膝骨折片覆盖软骨中的表达。方法随机选用30只月龄及体质量相近的健康新西兰大白兔,雌雄不限:实验组20只建立兔膝股骨髁OCF模型;假手术对照组10只。所有模型均不进行内固定及外固定。术后即进行术侧膝关节间歇主动活动(IAM)与间歇被动活动(IPM);术后1、2周分别从实验组中随机抽取10只实验兔行MRI检查、大体观察、组织学检查,假手术对照组10只于术后2周行上述检查。MRI扫描序列包括:TSE-T1WI、TSE-T2WI、T2WI/SPAIR、3D/WATSc/FFE/T1WI。结果术后1、2周,骨折线均清晰,OCF片移位14(14/20);骨片覆盖软骨术后2周较术后1周损伤重(P<0.05);骨折区成纤维细胞数术后2周较术后1周多(P<0.05)。术后第2周,股骨髁骨折处骨质增生,MRI示薄层低信号,骨片内部分骨小梁坏死;骨片覆盖软骨MMP-13表达,术后2周较术后1周表达程度明显增高(P<0.05),对照组仅2(2/10)只轻度表达。结论运动可使兔股骨髁关节表面OCF愈合不佳,术后2周变化类似剥脱性骨软骨炎的特点;OCF后骨片覆盖软骨MMP-13表达升高,对临床治疗OCF及评价预后具有重要意义。     

骨保护素对骨-腱愈合促进作用的研究

目的：探讨骨保护素（OPG）在膝关节前交叉韧带重建术后骨腱愈合过程中的作用.方法：将24只成年新西兰白兔随机分成2组,OPG组与空白对照组.制备双膝关节前交叉韧带模型,分别于术后3周、6周和12周末每组各处死4只实验动物,取得完整膝关节标本,2只用于光镜下观察骨-腱愈合情况;2只用于行生物力学检测.结果：空白对照组与骨保护素组比较,组织学结果显示：在术后相同时间,OPG组骨-腱结合面有更多的成骨细胞生成.生物力学实验结果：在术后6周和12周末的生物力学试验结果均存在统计学差异（均P＜0.01）.结论：骨保护素对膝关节前交叉韧带重建术后骨-腱愈合具有显著的促进作用.     

雌性去势大鼠骨细胞内间隙连接蛋白43阳性表达率的动态变化及意义

目的研究雌性去势大鼠骨细胞内间隙连接蛋白43(Cx43)阳性表达率的动态变化及其意义。方法56只4月龄SD大鼠随机分为4个实验组,每个实验组又分为去势组和对照组。在术后4周、10周、16周22周处死大鼠,用骨组织形态计量学方法检查实验动物右胫骨上端骨小梁体积比(TBV,%)、骨小梁平均厚度(MTT,μm)的动态变化。用免疫组化的方法观察去势组与对照组内Cx43阳性表达率的动态变化。结果术后4周后去势组TBV、MTT较对照组明显减少(p<0.05)。免疫组化发现:术后4周、10周、16周、22周,去势组成骨细胞内Cx43阳性表达率低于对照组(p<0.05),且呈逐渐降低的趋势,破骨细胞内Cx43阳性表达率高于于对照组(p<0.05),且成逐渐增高趋势。术后4周、10周、16周、22周,去势组成骨细胞内Cx43阳性表达率均低于破骨细胞内Cx43阳性表达率(p<0.05)。结论切除大鼠双侧卵巢后4周即可制备大鼠的骨质疏松动物模型。Cx43在去势大鼠成骨细胞中的表达下降,而破骨细胞内Cx43的增加,破坏了成骨细胞的骨形成与破骨细胞的骨吸收功能之间的偶联动态平衡,使破骨细胞的骨吸收大于成骨细胞的骨形成,是去势大鼠骨质疏松发生机制中的重要因素。     

同种异体皮质骨锚钉修复肩袖损伤的动物实验

目的探讨使用同种异体皮质骨锚钉修复肩袖损伤在不同时间段锚钉和骨道壁之间的愈合情况。方法使用深低温冷冻（-80℃）的成年羊胫骨皮质骨制成肩袖缝合锚钉,试验动物选用6只山羊。术中直接取肩关节正中切口,解剖分离出冈上肌腱,于止点处锐性切断,使用锉刀在肌腱止点原附着点进行磨挫直至出现新鲜骨面。将皮质骨锚钉缓慢植入预钻孔内,使用锚钉所带缝线将离断的冈上肌腱组织缝合至新鲜骨面。分别在术后第4、8、12周三个时间点取材,进行放射学、大体形态和组织切片检查,观察冈上肌腱的腱-骨愈合情况及骨锚钉的组织学转归。结果术后第12周固定处冈上肌腱与骨面形成牢固的腱骨愈合,放射学显示骨锚钉在各个时间点逐步与周围骨质融合。HE染色检查显示在第12周时骨锚钉与周围骨质完全融合。结论使用同种异体皮质骨锚钉固定修复肩袖损伤可达到牢固的腱-骨愈合目的,术后皮质骨锚钉与周围骨质融合,没有出现锚钉脱出、骨缺损等并发症。     

微螺钉支抗种植体与颌骨结合的组织学表现

目的 观察微螺钉支抗种植体与颌骨结合的组织学表现。方法 3只杂种犬分别在上下颌骨植入微螺钉支抗种植体，即刻加力300g，分别在1周、4周、8周处死。标本常规脱钙，采用光学显微镜观察。结果 1周时，微螺钉种植体与颌骨之间有大量中性粒细胞浸润，部分骨小梁中骨细胞变性坏死，周围见大量骨巨细胞反应及肉芽组织。4周时，骨周围炎症反应消失，结缔组织取代肉芽组织。8周时，大量纤维细胞增生，部分地方可见修复的骨组织。结论 微螺钉种植体与颌骨的结合先是纤维愈合，以后逐渐产生少量的骨愈合。