人参二醇皂苷对内毒素休克大鼠肺CD14和NF-KB表达的影响

目的 :探讨人参二醇皂苷 (PDS)对内毒素休克肺损伤保护作用的分子机制。方法 :Wistar大鼠随机分为实验对照组 (CTRG)、内毒素 (L PS)休克组 (L PSG)、人参二醇皂苷组 (PDSG)和地塞米松组 (DEXG)。以内毒素 (4mg· kg- 1 )复制内毒素休克模型 ,平均动脉压降至基础血压的 2 / 3为休克状态。取肺组织光镜下进行形态学观察 ,提取肺总 RNA和蛋白 ,分别以 RT- PCR检测 CD14和 IκBα m RNA表达 ,应用 Western blotting检测 CD14和 NF- κB的蛋白表达。结果 :1肺组织的病理学变化 ,L PSG可见弥漫性间质炎性改变 ,肺泡壁明显增宽 ,肺泡腔含气量明显减少 ,很多肺泡腔内有渗出液。 PDSG和 DEXG的病变显著轻于 L PSG;2肺组织CD14 m RNA和蛋白质表达丰度以 L PSG最高 ,PDSG与 DEXG均明显低于 L PSG (P<0 .0 5 ) ,而与 CTRG相近(P>0 .0 5 )。 IκBα m RNA表达水平 ,L PSG明显低于 CTRG (P<0 .0 1) ,PDSG与 DEXG明显高于 L PSG(P<0 .0 5和 P<0 .0 1) ,而与 CTRG相近 (P>0 .0 5 )。 L PSG的 NF- κB P6 5蛋白质表达水平明显高于 CTRG,PDSG与 DEXG的 NF- κB P6 5蛋白质表达水平也低于 L PSG(P<0 .0 5 ) ,接近 CTRG(P>0 .0 5 )。结论 :PDS与DEX对内毒素休克肺损伤有类似的保护作用 ,抑制 L PS介导的 CD14 - NF- κB信号     

人参二醇组皂苷对内毒素休克大鼠脑皮质ⅠκBα mRNA表达的影响

目的：通过观察内毒素休克大鼠脑皮质中LPO含量、SOD活力和ⅠκBα mRNA表达及人参二醇组皂苷（PDS）对其的影响，探讨内毒素引起脑组织损伤的分子机制。方法：Wistar大鼠随机分为对照组、内毒素休克（LPS）组、地塞米松（LPS+Dex）组和人参二醇组皂苷（LPS+PDS）组。大鼠静脉注射内毒素（4 mg•kg^-1）4 h后测定脑组织中LPO含量、SOD活力及ⅠκBα mRNA的表达。 结果：LPS+Dex组和LPS+PDS组LPO显著低于LPS组（P<0.05），SOD活力明显高于LPS组（P<0.05）。LPS+Dex组和LPS+PDS组ⅠκBαmRNA表达高于LPS组(P<0.05)。 结论：PDS能够上调脑组织中ⅠκBα的表达，减轻内毒素引起的组织过氧化反应，对中枢神经系统具有保护作用(P<0.05)。     

地塞米松对内毒素休克大鼠脑皮质TLR4、IκBα和IL-18 mRNA表达的影响

目的：通过观察内毒素休克大鼠脑皮质中TLR4、IκBα和IL-18 mRNA的表达及地塞米松（Dex）对其的影响,探讨内毒素引起脑组织损伤的分子机制。方法：18只Wistar大鼠随机分为实验对照组（Control）、内毒素休克组（LPS）和地塞米松组（LPS+Dex）,每组6只。除对照组外,大鼠静脉注射内毒素（4 mg•kg^-1）,对照组大鼠静脉注射等量葡萄糖溶液;4 h后检测脑皮质中TLR4、IκBα和IL-18 mRNA的表达。结果：LPS+Dex组平均动脉压明显高于LPS组（P<0.01）,大鼠存活率亦明显高于LPS组（P<0.01）。LPS+Dex组TLR4、IL-18mRNA表达均明显低于LPS组（P<0.05）,而IκBα mRNA表达明显高于LPS组（P<0.05）。 结论：Dex能下调脑组织中TLR4 mRNA表达,而上调IκBα mRNA表达,对中枢神经系统具有一定的保护作用。     

银杏苦内酯B对急性肺损伤小鼠肺组织NF-κB表达的影响

目的 研究银杏苦内酯B(BN52021)对脂多糖(LPS)诱发的急性肺损伤小鼠肺组织中核转录因子κB(NF-κB)蛋白质表达的影响.方法 健康昆明小鼠50只,随机分为2组:LPS组和BN52021预处理组.每组又根据不同的观察时间点(0、1、3、9 h和12 h)随机分为5个业组,每组5只小鼠.通过检测肺湿质量/干质量值(W/D)初步判断肺功能,普通光镜观察HE染色肺组织的病理变化,Western blot检测NF-κB p65在蛋白水平上的表达差异,ELISA法测定肺组织匀浆中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及白细胞介素-10(IL-10)浓度.结果 LPS注射后,LPS组W/D显著升高,提示存在肺水肿;BN52021预处理组在不同时间点的W/D均低于LPS组(P<0.05,P<0.01).LPS注射后1 h即有明显炎症反应的病理变化:两组光镜下均显示肺泡出血及中性粒细胞浸润,但BN52021预处理组明显轻于LPS组.LPS组NF-κB p65呈双峰表达,峰值分别为LPS注射后1 h和9 h;BN52021预处理组NF-κB p65呈单峰表达,峰值出现于9 h,除9 h外,各时间点BN52021预处理组NF-κB 065的表达均低于LPS组(P<0.05).与LPS组相比,BN52021预处理组可以明显降低TNF-α的表达(P<0.05),但2组IL-10峰值无统计学意义.结论 BN52021通过抑制NF-κB的早期活化抑制炎症反应,减轻肺组织损伤.     

阿米福汀对小鼠放射性肺损伤的防护作用研究

目的 探讨阿米福汀（Amifostine,AMI）对小鼠放射性肺损伤（RILI）的防护作用机制。方法 将24 只雌性C57BL/6J 小鼠随机分为对照组、单纯照射组、AMI 组。用直线加速器6MV-X 射线单次12Gy 照射小鼠全肺,照射前30 min 腹腔注射AMI,对照组和单纯照射组注射同等剂量的生理盐水。照射14 d 后,留取小鼠肺组织标本,采用苏木精- 伊红染色法（HE）观察病理改变;酶联免疫吸附法（ELISA）检测支气管肺泡灌洗液中白介素6（IL-6）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、转化生长因子-β1（TGF-β1）表达水平;凝胶电泳迁移实验检测核转录因子-κB（NF-κB）活性;免疫组织化学法观察NLRP3 蛋白的表达和定位;实时荧光定量聚合酶链反应检测肺组织中NLRP 3 和IL-1β mRNA 的表达;Western blot 检测NF-κB p65、NLRP3、IL-1β 蛋白的表达。结果 照射后第14 天,AMI 组与单纯照射组比较,AMI 组肺组织急性炎症反应减轻;AMI 组支气管肺泡灌洗液中IL-6、TNF-α 水平下降,TGF-β1 水平升高（P <0.05）;AMI 组肺组织中NF-κB 活性下降（P <0.05）;AMI 组肺组织中NLRP3 蛋白表达下降（P <0.05）;AMI 组NLRP3 和IL-1β mRNA 表达下降（P <0.05）;AMI 组NF-κB p65、NLRP3、IL-1β 蛋白表达下降（P <0.05）。结论 AMI 可能通过抑制辐射引起的NF-κB 激活,进而抑制NLRP 3 基因的转录和表达,抑制炎症因子的释放,减轻RILI。     

地昔帕明对脂多糖急性肺损伤小鼠核因子-κB表达的影响

目的:观察地昔帕明(DP)对脂多糖(LPS)引起的急性肺损伤小鼠肺组织核因子-κB(NF-κB)的影响,进一步探讨DP对急性肺损伤的保护机制。方法:昆明小鼠随机分为生理盐水对照组(NS组)、地昔帕明对照组(DP组)、模型组(LPS组)及地昔帕明处理组(DP+LPS组)。腹腔注射LPS建立小鼠急性肺损伤模型。造模6h后光镜下观察肺组织病理学改变,免疫组化检测NF-κB在肺组织的表达和分布。结果:病理切片显示LPS组肺泡和间隙水肿明显,大量中性粒细胞浸润,肺间隔增厚,充血明显,DP处理组病理改变较LPS组有不同程度减轻。免疫组化结果显示LPS组NF-κB p65表达较DP处理组明显升高。结论:DP对LPS急性肺损伤小鼠的保护机制可能抑制与NF-κB信号转导通路,减轻肺组织中性粒细胞浸润程度有关。     

罗红霉素对LPS诱导的肺泡巨噬细胞NF-κB活化及对TNF-α,IL-10释放的影响

目的:探讨罗红霉素(RM)对内毒素(LPS)诱导下肺泡巨噬细胞(PAM)核因子-κB(NF-κB)活化及对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和IL-10表达的调节作用. 方法:收集大鼠支气管肺泡灌洗液中PAM进行培养,分为正常对照组、模型组和RM治疗组. 用凝胶电泳迁移率改变分析(EMSA)法和放射免疫法分别测定各组核提取物中NF-κB活性和细胞培养上清中TNF-α,IL-10含量. 结果:模型组NF-κB活性明显高于正常对照组,用RM干预后NF-κB活性高于正常对照组(P<0.05),但比模型组低(P<0.05). LPS刺激1~4 h内TNF-α含量高于正常对照组;RM(20 mg/L) 能够抑制培养上清液中TNF-α的升高(P<0.05). NF-κB活性与TNF-α浓度有相关性(r=0.684,P<0.01). LPS刺激在观察早期IL-10高于正常对照组(P<0.05),使用RM干预后IL-10无明显变化(P>0.05). 正常对照组与治疗组TNF-α/IL-10比值在观察期间无明显上升和下降,模型组TNF-α/IL-10比值变化明显. 结论:RM可能通过PAM NF-κB活化的抑制,减少了TNF-α的释放,调节TNF-α/IL-10的比例,对LPS诱导的急性肺损伤模型有保护作用.     

乌司他丁对脂多糖诱导大鼠急性肺损伤作用的研究

目的 探讨蛋白酶抑制剂乌司他丁对内毒素（LPS）诱导的大鼠ALI的保护作用。方法 将30只SD雄性大鼠区组随机分为三组：正常对照组、LPS组和UTI组。LPS组经尾经脉注射LPS造成大鼠ALI模型,UTI组在按与LPS组相同标准给LPS的同时给予乌司他丁（UTI）（10万U/kg体重）。4h后取肺组织测量肺湿干重比（W/D）,ELISA法检测动脉血及肺组织中白细胞介素-18（IL-18）水平,免疫组化法检测肺组织中核因子κB（NF-κB）的表达,光镜和电镜下观察肺组织病理变化。结果 比较肺组织湿干重比、血清及肺组织中IL-18的水平和肺组织NF-κB表达,LPS组高于对照组;UTI组高于对照组但低于LPS组。LPS组肺泡间质充血水肿、炎性细胞浸润明显;UTI组上述现象较轻。LPS组肺巨噬细胞线粒体、内质网肿胀明显;UTI组肺巨噬细胞内质网仅有零散现象,无肿胀。结论 乌司他丁可通过降低炎性细胞因子IL-18和NF-κB的表达减轻LPS所致ALI的肺部炎性反应。     

肺微血管内皮细胞IL-8的表达及NF-κB调控机制的研究

目的 探讨脂多糖（LPS）的直接诱导作用对肺微血管内皮细胞（PMVEC）IL-8表达的影响及通过核因子κB（NF-κB）的调控机制。方法 以100ng/ml LPS刺激PMVEC 0、0．5、1、2、4、6、8h或1ng/ml、10ng/ml、100ng/ml LPS刺激1h或6h为检测时相点，ELISA、原位杂交试验分别检测的培养液上清中分泌的IL-8及PMVEC内IL-8mRNA的表达；凝胶电泳迁移率分析（EMSA）检测NF-κB的活化；并观察NF-κB活化抑制对IL-8表达的影响。结果 LPS能显著促进PMVEC表达IL-8，包括促进IL-8mRNA的表达及IL-8的分泌。在时间上mRNA的表达先于IL-8分泌。且LPS的直接诱导能迅速活化NF-κB，1h达到高峰，后逐渐下降。PDTC能显著抑制NF-κB的活化及IL-8的表达（P〈0．01）。结论 表明细茵致病因子LPS的直接诱导确能通过促进NF-κB的活化，从而启动IL-8的高效表达和分泌，为多形核中性粒细胞（PMN）的迁移提供必需的物质条件，导致肺损伤。     

NF-κB在机械通气和内毒素肺损伤中的作用机制

目的探讨幼兔机械通气、内毒素及机械通气复合内毒素肺损伤时,肺组织核因子-κB(NF-κB)活化及其对TNF-α和IL-8表达的影响.方法60只普通级幼兔随机等分为对照组(NMV)、大潮气量组(LVMV)、内毒素组(ENMV)和复合损伤组(EMV)(n=15),检测各时相肺组织NF-κB活性、IκBα含量、TNF-α和IL-8的基因表达和蛋白含量变化,并观察肺组织病理改变.结果NF-κB活性在NMV较底,ENMV致伤后2 h NF-κB活性达最高,而LVMV通气4 h NF-κB活性达高峰;EMV伤后各时相点NF-κB活性强度显著高于其它两组(P＜0.01).IκBα含量在NMV较高,ENMV致伤后4 hIκBα含量降至最低;出现显著下降的时间早于LVMV;EMV在通气后2、4、6 h的IκBα含量降低程度显著大于其它两组(P＜0.01).TNF-α、IL-8 mRNA和蛋白含量在NMV较低,在ENMV和EMV肺组织伤后TNF-α、IL-8 mRNA和蛋白含量峰值早于LVMV,EMV伤后2、4、6 h TNF-αmRNA表达和蛋白含量显著高于其它两组(P＜0.05,P＜0.01).结论机械通气和内毒素可能通过不同的途径使NF-κB活化,启动致炎细胞因子的转录,导致肺损伤.机械通气和内毒素先后作用于机体对NF-κB的活化可能有相互反应后效应的加强,加重肺损伤.     

抑制炎症反应治疗急性肺损伤的实验研究

目的通过观察急性肺损伤（ALI）大鼠血液和肺组织中IL-6、IL-10、TNF-α、NF-κΒ等炎性细胞因子的变化,探讨抑制炎症反应在治疗急性肺损伤中的作用。方法应用气管内滴入内毒素（LPS）复制大鼠急性肺损伤模型。将48只大鼠随机分成4组：对照组（N组）、LPS组、N-乙酰半胱氨酸（NAC）治疗组（NAC组）、NAC联合地塞米松（Dex）治疗组（NAC＋Dex组）,采用免疫印迹法（Western Blotting）检测NF-κΒ的含量,采用RT-PCR检测肺组织中IL-6、IL-10、TNF-α、NF-κΒmRNA的表达,并采用放免检测血清及支气管肺泡灌洗液（BALF）中的IL-6、TNF-α的含量。结果LPS组大鼠肺病理可见明显的肺损伤表现,NAC组及NAC＋Dex组肺组织病理改变明显减轻;NAC组及NAC＋Dex组肺NF-κB,肺IL-6、IL-10、TNF-α、NF-κΒmRNA表达水平及血清和BALF中的IL-6、TNF-α含量明显高于N组（P〈0.01）,而明显低于LPS组（P〈0.05）。结论NAC、Dex等可以抑制炎症反应,减少炎性介质的释放从而减轻肺损伤的程度,达到防治急性肺损伤的目的。     

脂多糖诱导小鼠腹腔巨噬细胞缺氧诱导因子-1α表达的信号通路研究

目的研究体外常氧环境下脂多糖（LPS）诱导小鼠腹腔巨噬细胞缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）表达的相关信号通路。方法以LPS单独或联合NF-κB抑制剂柳氮磺胺吡啶（SSZ）、一氧化氮合酶（NOS）抑制剂L-单甲基精氨酸（L-NMMA）作用于BALB/c小鼠腹腔巨噬细胞。用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）法检测HIF-1αmRNA的变化,用免疫细胞化学法检测HIF-1α蛋白的变化,用Griess反应检测培养上清中亚硝酸盐浓度的变化。结果LPS作用于小鼠巨噬细胞10h后,HIF-1αmRNA水平无明显变化（P〉0.05）,HIF-1α蛋白水平则明显增加（P〈0.05）。SSZ和L-NMMA组HIF-1α蛋白的表达则明显低于LPS组（P均〈0.05）。与对照组相比,LPS可明显增加巨噬细胞NO的生成（P〈0.05）,SSZ则可明显抑制LPS诱导的NO的产生（P〈0.05）。结论LPS可通过NF-κB及iNOS等转录后信号途径上调HIF-1α的表达。     

槐定碱预处理对LPS诱导RAW264.7细胞表达NF-κB的影响

目的观察槐定碱预处理对LPS诱导RAW264.7细胞NF-κB p65、TNF-α表达的影响,探讨槐定碱抗内毒素机制。方法培养RAW264.7细胞,分为空白对照组、槐定碱预处理对照组、LPS模型组、槐定碱预处理＋LPS组。各组处理完毕后5、30、60、120min,分别获取细胞与细胞培养液。Western Blot和RT-PCR分别检测细胞NF-κB p65蛋白与mRNA表达,放免法检测细胞培养液TNF-α含量。结果单独槐定碱对NF-κB p65以及TNF-α表达无影响;LPS模型组各时间点NF-κB p65 mRNA与蛋白以及TNF-α表达均显著高于空白对照组（P〈0.01）,且随LPS刺激时间延长而持续升高,至120min未见下降;槐定碱预处理＋LPS组NF-κB p65mRNA与蛋白及其下游TNF-α表达均较同时间点LPS模型组降低,差异有统计学意义（P〈0.01）。结论槐定碱预处理可通过抑制LPS诱导的RAW264.7细胞的NF-κB p65表达及TNF-α分泌发挥抗炎作用。     

人参二醇组皂苷对内毒素休克大鼠脑皮质ⅠκBα mRNA表达的影响

目的 :通过观察内毒素休克大鼠脑皮质中 L PO含量、 SOD活力和 κBα m RNA表达及人参二醇组皂苷 (PDS)对其的影响 ,探讨内毒素引起脑组织损伤的分子机制。方法 :Wistar大鼠随机分为对照组、内毒素休克 (L PS)组、地塞米松 (L PS+Dex)组和人参二醇组皂苷 (L PS+PDS)组。大鼠静脉注射内毒素 (4mg· kg- 1 )4 h后测定脑组织中 L PO含量、 SOD活力及 κBα m RNA的表达。结果 :L PS+Dex组和 L PS+PDS组 L PO显著低于 L PS组 (P<0 .0 5 ) ,SOD活力明显高于 L PS组 (P<0 .0 5 )。 L PS+Dex组和 L PS+PDS组 κBαm RNA表达高于 L PS组 (P<0 .0 5 )。结论 :PDS能够上调脑组织中 κBα的表达 ,减轻内毒素引起的组织过氧化反应 ,对中枢神经系统具有保护作用 (P<0 .0 5 )。     

牛磺酸抑制大鼠急性肺损伤时NF-κB的表达

目的：探讨牛磺酸（taurine,Tau）对大鼠急性肺损伤（acute lunginjury,ALI）时肺脏的保护作用及其可能机制。方法：将大鼠随机分为4组：对照组、脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）组、地塞米松（dexam-ethasone,DEX）和Tau处理组。各组动物分别于气道内滴注后6、12和24 h检测肺组织髓过氧化物酶（myeloperoxidase,MPO）和超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）活性及丙二醛（malonaldehyde,MDA）含量;免疫组化检测核因子-κB（nuclear factor-kappa B,NF-κB）在肺组织的表达。结果：LPS组SOD活性较对照组明显降低（P〈0.01）,而MPO活性与MDA含量以及NF-κB的表达则显著升高（P〈0.01）;应用Tau及DEX均显著缓解上述变化（P〈0.05或〈0.01）。结论：Tau对ALI时肺脏的保护作用可能与Tau清除自由基及抑制NF-κB的激活有关。     

桑色素对脑缺血再灌注损伤大鼠多聚腺苷酸二磷酸核糖聚合酶和核因子 κB表达的影响

目的探讨桑色素对大鼠脑缺血再灌注损伤区炎性递质多聚腺苷酸二磷酸核糖聚合酶(poly adeno-sine diphosphate ribose polymerase,PARP)和核因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)表达的影响。方法采用线栓法复制大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型,将动物随机分为假手术组,模型组,尼莫地平组,桑色素高、中、低剂量组。观察各组大鼠的神经功能损害评分(neurological severity scores,NSS),采用蛋白质印迹法和PCR分别检测梗死区NF-κB和PARP蛋白及其mRNA的表达水平。结果与模型组比较,桑色素各剂量组大鼠NSS,以及半暗带区PARP蛋白、NF-κB蛋白、PARP mRNA、NF-κB mRNA表达水平均显著降低(P0.05,或P0.01);桑色素高剂量组在降低上述指标方面显著优于桑色素低、中剂量组及尼莫地平组(P0.05,或P0.01)。结论桑色素可能通过下调炎性递质NF-κB和PARP的表达而抑制炎性反应,从而促进脑缺血损伤神经功能的恢复。     

混合游离脂肪酸对大鼠肺微血管内皮细胞Toll样受体4表达的影响及其介导的炎症反应机制

目的研究混合游离脂肪酸（FFA）对大鼠肺微血管内皮细胞（RRPMVECs）Toll样受体4（TLR4）的激活作用及其介导的链式炎症反应机制。方法以不同浓度的FFA处理体外培养的RPMVECs,Westernblotting检测TLR4蛋白的表达。用干扰小RNA（siRNA）转染体外培养的RPMVECs（TLR4 siRNA组和杂序siRNA组）,设立阴性对照组。分别用0．1mmol／LFFA、10ng／mL脂多糖（LPS）和5ng／mL肿瘤坏死因子-α（TNF-α）处理各组细胞,以未加药细胞作为相应的空白组。Real-TimePCR检测TLR4mRNA和NF-κB抑制蛋白激酶β（IKKβ）mRNA的表达,Westernblotting检测磷酸化核因子κB抑制因子（p-IκBα）和核因子κB（NF-κB）的表达,ELISA法检测细胞培养上清液中炎症因子白介素-1β（IL-1β）的表达。结果RPMVECs的TLR4蛋白相对表达量在0．1mmol／LFFA处理后显著增高（P〈0．05）,并随FFA浓度的升高而增加。在杂序siRNA和阴性对照组,TLR4mRNA的相对表达量在LPS和FFA处理后显著升高（P〈0．05）,TNF-α处理无明显变化;而在TLR4干扰组,3种处理后TLR4mRNA的表达均无显著变化。在杂序siRNA和阴性对照组,3种方式处理后RPMVECs的IKKβmRNA、p-IκBα及IL-1β的相对表达量均显著升高（P〈0．05）,而TLR4siRNA干扰抑制了其在FFA和LPS处理组的表达,但对TNF-α组无抑制作用。结论FFA通过TLR4／IKKβ／NF-κB信号通路介导RPMVECs的炎症反应。