反义脱氧寡核苷酸对SRS病毒复制的抑制作用

本文研究了合成的反义脱氧寡核苷酸,包括修饰的和非修饰的,同聚的和异聚的脱氧寡核苷酸对小鼠SRS病毒复制的抑制作用。结果表明,所合成的寡聚物都有抑制活性。使用不同的寡核苷酸dC_(14),S-dC_9和18mer(PS),使体外培养的病毒感染细胞增殖的抑制率分别达到39％～96％,26％～97％和24％～90％,并且与寡核苷酸的剂量有关。感染细胞经dC_(14)处理后群落数由38/孔减少至22.5/孔;XC融合细胞数由11/孔减少至0/孔。而非感染的NIH3T3细胞,加和不加寡聚物均为0/孔。研究提示     

EGFR反义脱氧寡核苷酸硫代修饰片段对人肝癌细胞中血管内皮生长因子mRNA表达的研究

目的：探讨表皮生长因子受体（epidermal growth factor receptor,EGFR）反义脱氧寡核苷酸硫代修饰片段对人肝癌细胞血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）基因表达的影响。方法：应用逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）法，以次黄嘌吟磷酸核糖转移酶（hypoxanthine phosphoribosyltransferase．HPRT）为内标．分析从1．6～3．2μmol／L浓度的EGFR反义脱氧寡核苷酸硫代修饰片段在84h时对人肝癌细胞VEGF基因mRNA表达水平的影响。结果：EGFR反义脱氧寡核苷酸硫代修饰片段有明显的抑制人肝癌细胞表达VEGF的作用．且这种抑制作用随着EGFR反义脱氧寡核苷酸硫代修饰片段浓度的增高而加强。结论：EGFR反义脱氧寡核苷酸硫代修饰片段能抑制人肝癌细胞VEGF基因的表达．为肝癌的抗血管治疗提供了新的途径和方法．     

阳离子脂质体介导提高反义寡聚脱氧核苷酸转染卵巢癌细胞株SKOV3/mdr1的效率

多药耐药基因(MDR1)编码的P-糖蛋白(Pgp,P-170)是导致卵巢癌化疗失败的重要原因之一.本研究将针对MDR1基因的硫代反义寡聚脱氧核苷酸导入卵巢癌耐药细胞株SKOV3/mdr1,观察其对该细胞株P170表达的影响.反义寡聚脱氧核苷酸(MDR1-AS)通过阳离子脂质体介导或单纯转染的方式导入SKOV3/mdr1细胞,将正义寡聚脱氧核苷酸(MDR1-S)同样导入细胞为对照.经以脂质体介导的1.6μmol/LMDR1-AS转染后,PgP阳性的细胞百分数从100%降至48.7%,经过16μmol/L和10μmol/L两个浓度的单纯MDR1-AS转染后,Pgp阳性细胞的百分数也从100%分别降至52.6%和86.7%.因此,通过阳离子脂质体介导可大大提高反义寡核苷酸转染的效率.     

阳离子脂质体介导提高反义寡聚脱氧核苷酸转染卵巢癌细胞株SKOV3／mdr1的效率

多药耐药基因（MDRI）编码的P－糖蛋白（Pgp,P-170)是导致卵巢癌化疗失败的重要原因之一。本研究将针对MDR1基因的硫代反义寡聚脱氧核苷酸导入卵巢癌耐药细胞株SKOV3．mdr1,观察其对该细胞株P170表达的影响。反义寡聚脱氧核苷酸（MDR1－AS）通过阳离子脂质体介导或单纯转染的方式导入SKOV3／mdr1细胞,将正义寡聚脱氧核苷酸（MDR1－S）同样导入细胞为对照。经以旨质体介导的1．6μmol/LMDR1-AS转染后,Pgp阳性的细胞百分数从100％降至48．7％,经过16μmol/L和10μmol/L两个浓度的单纯MDR1－AS转当柏,Pgp阳性细胞的百分数也从100％分别降至52．6％和86．7％,因此,通过阳离子脂质体介导可大大提高反义寡核苷酸转染的效率。     

反义寡聚脱氧核苷酸抑制脑胶质瘤多药耐药基因1的表达

目的研究多药耐药基因1(MDR1)反义寡聚脱氧核苷酸对胶质瘤耐药细胞系C6/adr中MDR1表达的抑制作用.方法以胶质瘤细胞株C6/adr作为胶质瘤体外耐药模型,针对MDR1基因mRNA的AUG起始区-9～ 6序列合成反义和相应的正义寡聚脱氧核苷酸,均经硫代磷酸化修饰.反义寡聚脱氧核苷酸(MDR1-AS)序列为5'-CTCCATCACCACCTC-3',正义寡聚脱氧核苷酸(MDR1-S)序列为5'-GAGGTGGTGATGGAG-3'.在脂质体介导下MDR1-AS、MDR1-S转染C6/adr细胞,48 h后利用形态学观察和噻唑蓝快速比色法检测MDR1-AS的细胞毒性作用;半定量RT-PCR检测MDR1-AS处理前后的MDR1 mRNA的差异表达;流式细胞术分析P糖蛋白(P-gp)的阳性细胞率.结果MDR1-AS对C6/adr细胞无毒性作用;MDR1-AS处理后MDR1 mRNA的差异表达由处理前的106%降至30.44%;P-gp阳性表达率亦由处理前的100%降至32.77%.结论MDR1反义寡聚脱氧核苷酸可有效抑制MDR1mRNA及P-gp的表达,从而为基因治疗耐药胶质瘤提供了实验依据,有望开发成为逆转胶质瘤耐药的反义药物.     

端粒酶反义寡聚脱氧核苷酸对人胃癌细胞株的影响

目的观察端粒酶反义寡聚脱氧核苷酸对人胃癌细胞株的作用。方法用端粒酶反义寡聚脱氧核苷酸与人胃癌细胞株共同温育一定时间后,观察细胞形态变化,检测细胞DNA含量的分布,测定端粒酶活性。结果端粒酶反义寡聚脱氧核苷酸能诱导人胃癌细胞凋亡,抑制端粒酶活性,在形态学上表现为细胞膜起泡、染色质固缩、核碎裂、凋亡小体形成;电泳呈凋亡特征性Ladder带;流式细胞仪分析显示,在G1期前出现亚二倍体凋亡峰,端粒酶活性抑制。结论端粒酶反义寡聚脱氧核苷酸能抑制端粒酶活性,诱导胃癌细胞凋亡,从而抑制胃癌细胞的增殖。     

端粒酶反义寡聚脱氧核苷酸对肝癌细胞株的影响

目的：观察端粒酶反义寡聚脱氧核苷酸对肝癌细胞株的作用。方法：用端粒酶反义寡聚脱氧核苷酸与肝癌细胞株共同孵育一定时间后，观察细胞形态变化，观察细胞DNA含量的分布，测定端粒酶活性。结果：端粒酶反义寡聚脱氧核苷酸能诱导肝癌细胞凋亡，抑制端粒酶活性，在形态学上表现为细胞膜起泡、染色质固缩、核碎裂、凋亡小体形成；电泳呈凋亡特征性Ladder带；流式细胞仪分析显示，在G1期前出现亚2倍体凋亡峰；端粒酶活性抑制。结论：端粒酶反义寡聚脱氧核苷酸能诱导肝癌细胞凋亡，抑制端粒酶活性，抑制端粒合成，从而抑制肝癌细胞的生长。     

硫代修饰bFGF寡核苷酸对B16细胞和L1210细胞增殖的影响

目的研究bFGF寡核苷酸被硫代修饰后对肿瘤细胞增殖的影响。方法设计、合成bFGF寡核苷酸，用聚乙烯亚胺（jetPEI）介导bFGF寡核苷酸转染入黑色素瘤B16细胞和白血病L1210细胞，MTT法检测细胞增殖；微分干涉荧光显微镜观察硫代寡核苷酸在细胞中的定位；流式细胞仪分析寡核苷酸转染效率。结果正／反义硫代寡核苷酸被jetPEI介导成功转染入B16细胞和L1210细胞，在B16细胞均主要分布于细胞核，在L1210细胞分别主要分布于细胞核和细胞质。反义硫代寡核苷酸呈剂量依赖地抑制B16与L1210细胞增殖，且核苷酸突变能降低其对2种肿瘤细胞的增殖抑制。相应非修饰反义寡核苷酸也能显著抑制2种细胞增殖。正义硫代寡核苷酸能呈剂量依赖效应显著影响B16细胞增殖，显著高于非修饰正义寡核苷酸，且其抑制作用并未因核苷酸突变而降低。正义硫代寡核苷酸并不显著L1210细胞增殖，与非修饰正义寡核苷酸的效应基本一致。结论硫代修饰并未明显影响bFGF反义寡核苷酸在细胞内特异性结合核酸的性质，硫代反义寡核苷酸仍能以反义机制抑制肿瘤细胞增殖，但硫代修饰可能改变了bFGF正义寡核苷酸的某些性质。致使其于细胞内以一种非核酸特异性机制影响肿瘤细胞增殖。     

端粒酶反应寡聚脱氧核苷酸对HL—60细胞生长的作用

目的;观察端粒酶反应寡聚脱氧核苷酸对急性髓细胞白血病的细胞株ＨＬ－６０的作用。方法：采用台盼蓝排斥法进行药物敏感试验,流式细胞仪测定凋亡细胞含量。结果：端粒酶反义寡聚脱氧核苷酸对ＨＬ－６０细胞有生长抑制作用,作用具有序列特异性及剂量依赖性。流式细胞仪检测到凋亡峰,含量为２８．８％,无关寡聚核苷酸片段无此作用。结论：端粒酶对维持白血病细胞的生长可能起十分重要的作用,它有可能成为白血病治疗的新靶点。     

抗氧化中药对蛋白质非酶糖基化反应的影响

目的　观察中药胡黄连和贯叶连翘对体外蛋白质非酶糖基化反应的影响 ,评价其抗氧化作用与非酶糖基化反应的关系。分析它们治疗糖尿病并发症的可能性。方法　将牛血清白蛋白和葡萄糖在体外共同孵育建立体外蛋白非酶糖基化反应体系 ,并将反应液分成对照组和不同的药物浓度组 ,在 37℃孵厢中孵育 6 0d ,以激发波长 (EX) 370nm/发射波长(EM) 4 4 0nm测定各组荧光值。结果　不同浓度的胡黄连和贯叶连翘以剂量依赖方式明显抑制AGEs的形成。结论　胡黄连和贯叶连翘可以抑制蛋白质的非酶糖基化 ,可能与其抗氧化作用有关。      

霍乱毒素对不同细胞株增殖效应的影响

以霍乱毒素(CTX)为探针,以不同细胞株体外增殖和细胞内cAMP水平为观察指标,探讨霍乱毒素对不同细胞株体外增殖的影响。结果表明,CTX对淋巴细胞的增殖抑制作用随细胞不同而异,CTX(1mg/L)可显著升高Daudi、K562细胞内cAMP水平(均为P<0.05),并对上述细胞的增殖具有显著抑制作用(均为P<0.05);对CTLL细胞cAMP水平影响,但可显著抑制CTLL细胞的增殖(P<0.01);而对HL-60细胞的增殖和细胞内cAMP水平均无明显影响。     

卟啉胆固醇酯对癌细胞膜流动性的影响及其代谢热谱的研究

用荧光偏振技术研究了卟啉胆固醇酯对人何杰金淋巴瘤细胞(Daudi 细胞)和人早幼粒细胞性白血病细胞(HL-60 细胞)膜流动性的影响;用微量量热法测定了 HL-60 细胞与卟啉胆固醇酯作用后的代谢热谱。结果表明:卟啉胆固醇酯能明显降低癌细胞膜的流动性;对癌细胞的生长有强抑制作用,不同的酯其抑制方式不同。     

维拉帕米对肝星状细胞增殖的抑制作用

目的：观察维拉帕米对体外培养的人肝星状细胞（hepatic stellate cells,Hscs）增殖的影响。方法：用不同浓度的维拉帕米对HSCs进行处理,CCK-8试剂盒（cell Counting Kit-8）检测细胞增殖抑制率,HE染色观察细胞形态超微结构的变化。结果：维拉帕米可抑制HSCs的增殖,且有剂量相关性,其IC50值为0．15±0．01μmol／ml;HE染色可见维拉帕米组出现不同程度的细胞体积变小、核浓缩深染等凋亡形态改变。结论：维拉帕米可抑制HSCs的活化增殖,诱导其凋亡。     

芹菜素对雄性大鼠睾丸间质细胞作用机制的研究

目的 研究芹菜素对大鼠睾丸间质细胞(Leydig cells)的作用机制。方法 应用Perooll不连续密度梯度法分离培养大鼠睾丸问质细胞，观察芹菜素对间质细胞睾酮生成的影响。应用MTT方法和流式细胞术观察芹菜素对间质细胞增殖及凋亡的影响。结果 芹菜素作用于大鼠睾丸间质细胞时，以剂量依赖方式使原代培养的大鼠睾丸间质细胞睾酮的分泌量明显减少。MTT及FCM分析显示芹菜素能促进间质细胞凋亡及抑制增殖。结论 芹菜素能不同程度抑制大鼠睾丸间质细胞分泌睾酮并促进睾丸间质细胞凋亡及抑制其增殖。     

蒿甲醚联合依托泊苷对小细胞肺癌细胞株H446增殖及侵袭的抑制作用

探讨蒿甲醚与依托泊苷联用对小细胞肺癌细胞H446增殖及侵袭能力的抑制作用。采用MTT法检测蒿甲醚、依托泊苷单用及联合作用对H446细胞增殖的影响;采用Annexin V/PI荧光双染法检测蒿甲醚、依托泊苷单用及联合作用对H446细胞凋亡的影响;采用PI单染法检测蒿甲醚、依托泊苷单用及联合作用对H446细胞周期分布的影响。采用基质胶侵袭实验检测蒿甲醚、依托泊苷单用及联合作用对H446侵袭能力的影响。结果表明,蒿甲醚、依托泊苷单用以及联合使用均能有效抑制H446的增殖,且呈剂量依赖性,两药联用具有协同作用。蒿甲醚单用不能明显促进细胞凋亡,但与依托泊苷(300 nmol/L)联用72 h可以比较明显促进H446凋亡,具有统计学意义(P<0.05)。蒿甲醚单用对H446的细胞周期没有显著影响,联合作用48 h对细胞周期G₂期阻滞主要是依托泊苷的作用。单用蒿甲醚、依托泊苷以及二者联合使用都能显著抑制H446的侵袭能力。     

FTY720对胆管癌细胞系QBC939增殖及侵袭的影响

目的：探讨FTY720对体外培养QBC939细胞系增殖及侵袭的影响。方法：体外培养QBC939细胞系,将其分为对照组、FTY720不同浓度给药组。通过MTT法、流式细胞仪检测周期和凋亡、细胞侵袭等实验观察FTY720对QBC939细胞系增殖及侵袭的影响。结果：当FTY720浓度为2400 ng/ml时,体外培养的QBC939细胞系的增殖受到明显抑制,抑制率为65．4％（ P〈0．05）;流式细胞仪检测提示QBC939细胞系被阻滞于G1期,并促进其发生凋亡;侵袭实验显示FTY720可以明显抑制QBC939细胞系的侵袭,当FTY720浓度为2400 ng/ml时,侵袭抑制率可达80％。结论：FTY720可抑制体外培养QBC939细胞系的增殖,诱导该肿瘤细胞凋亡,并且抑制其侵袭。     

芹菜素对大鼠生精细胞凋亡作用的影响

目的研究芹菜素对大鼠生精细胞凋亡的影响。方法应用percoll不连续密度梯度分离培养大鼠睾丸生精细胞,应用流式细胞术观察芹菜素对生精细胞凋亡的影响。结果芹菜素作用于大鼠生精细胞,FCM分析显示芹菜素能促进生精细胞凋亡,并呈剂量依赖方式。结论芹菜素能呈剂量依赖式促进睾丸生精细胞凋亡。     

酒精对神经前体细胞增殖的抑制作用

目的：探索体外贴壁培养神经前体细胞方法，分析酒精对神经前体细胞增殖的影响。方法：从孕13d胎鼠大脑皮层分离神经前体细胞，贴壁培养5d后用Nestin抗体鉴定神经前体细胞，BrdU抗体确定神经前体细胞的增殖能力；加入不同浓度酒精作用24h后，用BrdU掺入和MTT检测方法分析不同浓度酒精对神经前体细胞增殖的抑制作用。结果：贴壁培养5d的神经前体细胞纯度达97%，均保持增殖能力；25～50mmol/L浓度的酒精能显著抑制神经前体细胞增殖，并呈剂量依赖效应。结论：体外贴壁培养5d的神经前体细胞绝大多数保持未分化状态，并有增殖能力；低、中浓度的酒精对神经前体细胞增殖具有抑制作用。     

Modulatory Effects of EPA and DHA on Proliferation and Apoptosis of Pancreatic Cancer Cells

In order to investigate the effects of eicosapentaenoic acid （EPA） and docosahexaenoic acid （DHA） on the proliferation, apoptosis of pancreatic cancer cell line SW1990 cells and the expression of cyclin E mRNA, the SW1990 cells were treated with different concentrations of EPA or DHA （20, 40, 60 μg/mL） for 0, 12, 24, 36 and 48 h respectively. By using MTF method, the inhibitory effects of EPA or DHA on the cell growth were assayed. Real time PCR was used to detect the expression changes of cyclin E mRNA after the SW1990 cells were treated with 40μg/mL EPA or DHA for different time. Flow cytometry was used to test the changes of apoptostic rate in the SW1990 cells treated with different concentrations of EPA or DHA for 24 h. The results showed that EPA and DHA could inhibit the growth of SW1990 cells in a time- and concentration-dependent manner （P〈0.01）. EPA or DHA could also significantly inhibit the expression of cyclin E mRNA in a time-dependent manner （P〈0.05）. EPA or DHA could induce the apoptosis of SW1990 cells in a concentration-dependent manner （P〈0.01）. It was concluded that ω-3 fatty acid could inhibit the proliferation of pancreatic cancer cell line SW1990 cells and promote their apoptosis. The down-regulation of the cyclin E expression by ω-3 fatty acid might be one of the mechanisms for its anti-tumor effect on pancreatic cancer.