耐药乳腺癌细胞株MCF-7/ADR中microRNA的分析

目的 本研究通检测乳腺癌细胞株MCF-7及其阿霉索耐药株MCF-7/ADR的microRNA的表达差异,探讨microRNA与乳腺癌化疗耐药的关系.方法 MTT法检测MCF-7/ADR相对于其亲本细胞MCF-7的耐药性和耐药倍数;microRNA芯片和RT-PCR的方法比较阿霉素耐药细胞株MCF-7/ADR与其对应的MCF-7乳腺癌细胞株microRNA表达差异.结果 乳腺癌的阿霉素耐药株MCF-7/ADR相对于其亲本细胞系MCF-7对阿霉素的耐药倍数为33.2倍.microRNA芯片的结果显示耐药株MCF-7/ADR与亲本细胞系MCF-7比较有16个microRNA高表达,20个microRNA低表达:RT-PCR的结果进一步证实mir-221、mir222、mir-130a、mir-155在MCF-7/ADR中显著上调.而mir200a、mir-200b、mir-200c、mir-421在MCF-7/ADR中显著下调.结论 MCF-7/ADR与MCF-7的microRNA的表达存在着差异,提示mieroRNA参与乳腺癌化疗耐药,为进一步研究microRNA在乳腺癌耐药机制中的作用打下基础.     

千金藤碱对结肠癌细胞5-氟尿嘧啶耐药性的逆转作用和对HO-1和NQO1表达的影响

目的:探讨千金藤碱(Cepharanthine,CEP)逆转人结肠癌耐药细胞株Lovo/5-FU对5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-FU)的耐药性以及对HO-1和NQO1表达的影响.方法:采用药物浓度梯度递增法诱导建立结肠癌耐药细胞亚系LoVo/5-FU;用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测千金藤碱和化疗药物对结肠癌细胞的细胞毒性;RT-PCR和Western blot技术检测NQO1和HO-1基因的mRNA和蛋白表达水平.结果:LoVo/5-FU细胞对包括5-FU在内的4种化疗药物产生耐药性,其中对5-FU耐药性最高,是LoVo细胞的18.82倍;千金藤碱对LoVo和LoVo/5-FU细胞增殖均有抑制作用,其浓度超过20-25 μg·mL-1时最为明显,但是对2种细胞的抑制效果无明显差别(P＞0.05);千金藤碱(2.5-10.0 μg·mL-1)可降低LoVo/5-FU细胞5-FU的IC50值(P＜0.05-0.01),在此浓度范围内,IC50值降低的程度与剂量成正相关;LoVo/5-FU细胞中HO-1和NQO1的mRNA和蛋白表达水平明显高于LoVo细胞(P＜0.05-0.01),10.0 μg·mL-1千金藤碱与5-FU联合处理后,LoVo/5-FU细胞中两个基因的表达水平明显降低(P ＜0.05-0.01).结论:千金藤碱可抑制结肠癌细胞增殖,增加结肠癌耐药细胞株Lovo/5-FU对5-FU的敏感性,原因可能与其抑制结肠癌细胞中HO-1和NQO1的表达水平有关.     

PACS在中枢神经系统影像学教学中的应用

目的:检测乳腺癌蒽环类药物耐药细胞株中微小RNA(microRNA,miRNA)的表达差异,探讨miRNA与乳腺癌化疗耐药的关系.方法:miRNA芯片检测乳腺癌蒽环类药物(阿霉素)耐药细胞MCF-7/ADM和其亲本细胞MCF-7的miRNA表达谱,找出差异表达的miRNA,并利用实时荧光RT-PCR法对miRNA芯片结...     

人肝癌BEL-7402/5-FU多药耐药细胞株的建立及其生物学特性观察

目的:建立人肝癌BEL-7402/5-FU多药耐药细胞株。方法:采用体外低浓度梯度递增联合大剂量间断冲击的诱导方法建立5-FU获得性BEL-7402/5-FU多药耐药细胞株。MTT法检测耐药细胞株对多种化疗药物的交叉耐药性。观察其细胞形态学、生长曲线、倍增时间、平板克隆形成率、贴壁率、细胞周期分布、染色体核型以及裸鼠致瘤性。流式细胞术检测阿霉素在亲本及耐药细胞株内的积聚量。免疫细胞化学法检测胸苷酸合酶在耐药细胞内的表达。结果:成功建立人肝癌BEL-7402/5-FU多药耐药细胞株模型。该耐药细胞对阿霉素、长春新碱、奥沙利铂及甲氨蝶呤均有不同程度的交叉耐药性,但对羟基喜树碱仍较敏感。体外培养见细胞趋向群集性生长。耐药细胞株倍增时间较亲本细胞株长,克隆形成率则较亲本细胞株低,差异有统计学意义。耐药细胞贴壁率在23、h明显低于亲本细胞株,其G0/G1期细胞分布比率较低而S期比率明显增加。阿霉素在耐药细胞株内的积聚量低于亲本细胞株,耐药细胞株胸苷酸合酶的蛋白表达量较亲本细胞株明显增强。结论:人肝癌BEL-7402/5-FU多药耐药细胞株可以成为研究5-FU获得性耐药机制及开展多药耐药逆转剂筛选较好的体外模型。     

Runt相关转录因子3在人结肠癌HCT-116/5-FU耐药细胞株中的表达及其与耐药的相关性

目的 建立耐5-氟尿嘧啶(5-FU)的人结肠癌细胞株HCT-116/5-FU,初步探讨Runt相关转录因子3(RUNX3)与结直肠癌耐药的关系。方法 采用低浓度梯度递增联合大剂量间断冲击法建立人结肠癌耐药细胞株HCT-116/5-FU,CCK-8法检测5-FU对亲本株HCT-116及耐药株HCT-116/5-FU的半数抑制浓度(IC₅₀值),绘制细胞生长曲线,计算细胞群体倍增时间(TD);qRT-PCR和Western blot法检测亲本株HCT-116细胞及耐药株HCT-116/5-FU细胞中RUNX3、P糖蛋白(P-gp)、多药耐药相关蛋白1(MRP1)和肺耐药蛋白(LRP)的mRNA和蛋白表达。采用siRNA技术敲低HCT-116细胞中RUNX3的表达,分为RUNX3敲低组(si-RUNX3-1组、si-RUNX3-2组)和阴性对照组(si-NC组),qRT-PCR和Western blot法分别在mRNA水平和蛋白水平验证RUNX3的敲低效率;CCK-8法测定si-RUNX3组和si-NC组的IC₅₀值,Western blot法测定两组中P-gp、MRP1和LRP的表达情况。结果 成功构建稳定的人结肠癌耐药细胞株HCT-116/5-FU,耐药倍数为7.7倍;HCT-116/5-FU耐药细胞株群体TD较HCT-116亲本株明显延长(P<0.001),耐药细胞群体TD是亲本细胞的1.38倍(P=0.002),耐药株细胞形态发生变化。耐药细胞HCT-116/5-FU的RUNX3 mRNA表达水平较亲本细胞株HCT-116明显降低(P=0.048),P-gp(P=0.008)、MRP1(P=0.001)和LRP mRNA(P=0.001)表达水平较亲本细胞株HCT-116明显升高;耐药细胞HCT-116/5-FU的RUNX3蛋白质相对表达量较亲本细胞株HCT-116明显降低(P<0.001),P-gp、MRP1、LRP蛋白的相对表达量较亲本细胞株明显升高(P均<0.001)。成功构建了RUNX3低表达的HCT-116细胞模型,si-RUNX3-1组RUNX3 mRNA的表达与si-NC组相比差异无统计学意义(P=0.064),si-RUNX3-2组明显低于si-NC组(P=0.034);si-RUNX3-1组和si-RUNX3-2组RUNX3蛋白的表达量均明显低于si-NC组(P均<0.001),si-RUNX3-2组的敲低效率更高。选用si-RUNX3-2组完成后续实验,si-RUNX3组的IC₅₀值较si-NC组明显升高,下调RUNX3的表达能明显降低HCT-116细胞对5-FU的敏感性(P<0.001);si-RUNX3组的P-gp、MRP1和LRP蛋白相对表达量均明显高于si-NC组(P均<0.001)。结论 RUNX3表达下调能降低人结肠癌HCT-116细胞对5-FU的敏感性,可能与RUNX3表达的降低上调P-gp、MRP1和LRP等耐药蛋白表达,从而增加细胞的耐药性有关。     

半枝莲氯仿极性部位逆转人结肠癌HCT-8/5-FU耐药性研究

目的探讨半枝莲逆转人结肠癌细胞株HCT-8/5-FU耐药性的最有效部位。方法用5-FU干预HCT-8及HCT-8/5-FU细胞株,检测耐药性;用半枝莲4个极性部位分别干预HCT-8和HCT-8/5-FU细胞株,筛选最有效的抑癌部位;并用其联合5-FU干预HCT-8/5FU细胞株,观察该最有效部位对其逆转5-FU耐药性的影响。结果两株细胞比较,HCT-8/5-FU对5-FU耐药性强,其耐药指数为183.99;半枝莲的氯仿提取物（ECSB）对两株细胞的活力具有最显著的抑制作用;ECSB联合5-FU用药显示ECSB可增强HCT-8/5-FU细胞对5-FU的敏感性。结论 ECSB是逆转人结肠癌5-FU耐药细胞株的最有效部位,提示半枝莲逆转人结肠癌细胞的耐药性是其治疗结肠癌的重要机制之一。     

人肝癌多药耐药细胞中ERK5的表达

目的 检测人肝癌多药耐药细胞(hepG2/ADM和BEL-7402/5-FU)及亲本细胞(hepG和BEL-7402)中ERK5的表达,探讨其对肝癌细胞多药耐药的影响.方法 MTT法测定人肝癌多药耐药细胞株多种化疗药物的交叉耐药性,实时荧光定量PCR检测ERK5在人肝癌多药耐药细胞及亲本细胞中mRNA水平的表达,western-blotting检测ERK5蛋白水平的表达.结果 hepG2/ADM对ADM、5-FU 、CDDP的耐药指数分别为12.34、5.74、3.81;BEL-7402/ 5-FU对5-FU、VCR、OHP、MTX和ADM的耐药指数分别为15.32、10.08、5.85、6.74和3.26.与亲本细胞相比较,在hepG2/ADM细胞中ERK5 mRNA和蛋白表达均升高,而在BEL-7402/5-FU细胞中ERK5 mRNA表达降低,ERK5蛋白表达升高.结论 ERK5的表达与人肝癌多药耐药的发生密切相关,为逆转治疗肝癌细胞多药耐药研究提供了新思路.     

原发性肝癌术后早期复发密切相关microRNA的筛选及应用

【目的】 利用microRNA芯片技术分析比较两组不同复发倾向肝癌患者的miRNA表达谱,并在更大样品的基础上进行实验验证?【方法】收集10例原发性肝癌组织标本根据术后复发情况分2组:早期复发组与非早期复发组,运用microRNA芯片技术筛选出差异表达显著的microRNAs?结合文献报道,选择mir-144?mir-502-3p作为其他82例肝癌组织标本qReal-time PCR验证的检测指标?并利用生物信息学方法预测其靶基因?【结果】本研究共筛选获得7个差异表达的microRNAs?与非早期复发组相比,在早期复发组中有4个表达上调,3个表达下调?qReal-time PCR验证与microRNA芯片筛选的结果一致?生物信息学方法预测miR-144靶基因可能为Rb1,miR-502-3p靶基因可能为SET?【结论】 microRNA芯片筛选的mir-144?mir-451?mir-486-5p?mir-602?mir-551b?mir-96?mir-502-3p与原发性肝癌术后早期复发密切相关?     

衣霉素逆转CD147介导的结肠癌细胞株SW620/5-FU耐药性的实验研究

目的:探讨衣霉素对结肠癌5-氟尿嘧啶(5-FU)耐药细胞株(SW620/5-FU)耐药性的逆转作用及机制。方法:采用药物浓度梯度递增法诱导建立结肠癌耐药细胞株SW620/5-FU;MTT法检测细胞药物敏感性变化;流式细胞术和Lection blot检测N-糖链结构差异;Western blot检测糖蛋白CD147 N-糖基化水平。进一步采用衣霉素作用于SW620/5-FU,观察细胞耐药性状的改变。结果:成功建立结肠癌耐药细胞株SW620/5-FU,其细胞表面N-糖链合成增加,高糖基化CD147表达上升;衣霉素可阻断SW620/5-FU细胞中CD147 N-糖链合成,实现其5-FU耐药性的逆转。结论:衣霉素通过抑制N-糖链合成从而逆转CD147介导的结肠癌细胞株SW620/5-FU的耐药性。     

肝细胞癌组织中microRNA表达谱研究

目的 检测人肝癌组织和对应的肝硬化组织microRNA表达的差异谱,为研究microRNA在肝细胞癌变机制中的作用提供实验基础.方法 Trizol法提取25例配对的肝癌和肝硬化组织总RNA,microRNA芯片分析肝癌和肝硬化组织中差异表达microRNA,实时定量PCR验证芯片的结果 .结果 肝癌与肝硬化组织间差异表达的microRNA共12个,其中3个表达上调,9个表达下调.实时荧光定量PCR结果 与芯片一致.结论 肝癌和肝硬化组织存在差异表达的microRNA,这些上调和下调表达的microRNA可能参与了肝癌的发生.     

内镜下局部注射治疗晚期胃癌的临床研究

目的：探讨内镜下局部注射治疗晚期胃癌的临床疗效。方法：选择40例晚期胃癌患者,随机分为观察组和对照组,观察组用内镜下局部注射化疗,对照组用静脉化疗,比较两组疗效和不良反应。结果：观察组治疗总有效率为80%,对照组治疗总有效率为45%,两组比较有显著性差异（P〈0.05）;两组恶心呕吐、骨髓抑制和脱发的发生率比较有显著性差异（P〈0.05）,而腹泻发生率比较无显著性差异（P〉0.05）。结论：内镜下局部注射治疗晚期胃癌疗效显著,而且不良反应较少,适合在临床推广应用。     

沙利度胺对腹腔转移伴腹水的晚期胃腺癌治疗研究

目的：探讨沙利度胺治疗腹腔转移伴腹水的晚期胃腺癌的疗效及其可能机制。方法：选择胃腺癌66例,经腹水细胞学证实为恶性腹腔积液,随机分为对照组和实验组,对照组采用顺铂和5-FU腹腔灌注,而实验组在上述腹腔灌注的基础上加用沙利度胺400 mg口服,每晚1次。治疗第2天即开始询问饮食、夜间睡眠情况、消化道症状（恶心呕吐、腹痛、腹泻）和便秘及止痛药使用情况,称体重连同放出腹水量并作记录。4周后同上法放净腹水并观察记录,两次均留取10 ml置于-70℃冰箱中冷藏行指标检测。结果：①对照组和实验组治疗前后腹水中TNF-α、VEGF和IL-6的浓度及腹水量比较,对照组和实验组治疗前分别为（97.13±10.85）ng/L、（468.46±39.52）ng/L、（53.42±17.78）ng/L、（967.00±67.52）ml和（98.53±11.34）ng/L、（483.46±37.54）ng/L、（51.76±17.21）ng/L、（946.00±71.64）ml,对照组和实验组治疗后分别为（89.87±8.94）ng/L、（396.40±35.76）ng/L、（49.74±15.42）ng/L、（769.00±53.79）ml和（59.34±7.62）ng/L、（214.81±23.72）ng/L、（32.63±19.20）ng/L、（575.00±43.79）ml,VEGF、TNF-α、IL-6检测指标及腹水量两组治疗前比较差异无统计学意义（P〉0.05）,治疗后比较差异有统计学意义,TNF-α、VEGF、IL-6和腹水量P值分别为〈0.05、〈0.01、〈0.05和〈0.05。②两组在饮食增加、夜间睡眠改善、降低消化道症状、体重增加和镇痛药减少方面比较差异有统计学意义,P值分别为〈0.01、〈0.05、〈0.05、〈0.05、〈0.05。结论：加用沙利度胺口服治疗腹腔转移伴腹水的晚期胃腺癌能使腹水减少并提高生活质量。     

丝裂霉素C、5-氟尿嘧啶、顺铂序贯腔内注入治疗肺癌胸腔积液临床分析

胸腔积液是肺癌患常见并发症之一，约占8％～15％，我院对48例肺癌大量胸腔积液患分别应用序贯腔内注入与单一药物腔内注入各治疗24例，并行疗效与不良作用比较，报告如下。     

胎盘植入予5-FU治疗体会

目的总结临床中胎盘植入的资料，为临床治疗提供参考。方法分析2003～2007年我院发生胎盘植入的病例的治疗情况。结果经治疗后未发生1例晚期产后出血及子宫切除，超声检查提示宫腔无高回声光团，血β-HCG追踪最晚的一月达正常。结论用5-FU治疗胎盘植入未见明显副反应，是一种比较安全、有效的保守治疗方法。     

胃癌患者外周血DPD活性与5-FU化疗不良反应的关系

目的 探讨胃癌患者外周血二氢嘧啶脱氢酶(DPD)活性与临床病理特征及5-FU为主化疗不良反应的关系.方法 采用高效液相色谱技术检测66例胃癌患者化疗前外周血中二氢尿嘧啶(UH2)与尿嘧啶(U)的比值代表二氢嘧啶脱氢酶活性,所有患者行FOLFOX4方案化疗,化疗后评价不良反应.结果 胃癌患者外周血DPD活性呈正态分布,与患者性别、年龄、发病部位、Borrmann分型、分化程度、浸润深度及肿瘤大小、是否有淋巴结转移等临床病理特征均无相关性,但与5-FU为主化疗引起的恶心呕吐、骨髓抑制、腹泻及口腔黏膜炎呈负相关.结论 胃癌患者外周血DPD活性检测可以作为预测5-FU为主化疗不良反应的简便方法.     

5-FU与DDP腹腔灌注治疗晚期卵巢癌的临床比较

目的观察5-FU持续小剂量灌注与DDP常规灌注的疗效。方法38个晚期卵巢癌病人随机分为2组,19例采用腹腔留置管,5-FU250mgd1～14,对照组采用单次穿刺法,DDP50mg/m^2,2组均配合使用等剂量的吉西他滨静脉化疗,每3周1疗程。结果试验组有效率84.2%,对照组有效率68.4%,试验组优于对照组,且毒副反应可耐受。结论5-FU持续小剂量腹腔灌注化疗可能有很好的应用前景,值得进一步探讨。     

电子镇痛泵持续输注5-FU在消化道肿瘤中应用

多年来，5-氟尿嘧啶（5-FU）作为胃肠道肿瘤化疗的主要药物之一，在临床上广为应用。5-FU半衰期短，为周期特异性药物，故具有时间依赖性，长时间使用效果优于短时间应用，通常需持续96—120h。我科2007年12月-2009年12月为60例胃肠道肿瘤患者使用电子镇痛泵持续输注5-FU，在应用方便、安全和减少胃肠道不良反应方面取得良好的效果，现报道如下。     

紫杉醇加醛氢叶酸、5-FU双周疗法治疗CAF方案耐药晚期乳腺癌临床观察

目的 研究紫杉醇加醛氢叶酸、（5-FU）48h持续静脉滴注双周疗法治疗CAF方案耐药的晚期乳腺癌临床应用价值。方法 80例晚期乳腺癌患者经过CAF治疗化疗无效,接受紫杉醇加醛氢叶酸、5-FU方案化疗,紫杉醇95mg／m^2,静脉滴注,d1;LV200mg d1,静脉滴注,随后5-FU 3g／m^2,加入输液泵中静脉持续滴注48h,两周为1个周期;至少治疗4个周期。结果 80例中CR9例,PR26例,SD32例,PD13例,总有效率43．8％（35／80）。中位缓解期8个月（2—27个月）,中位生存期16．7个月（3—34个月）。紫杉醇加醛氢叶酸、（5-FU）48h持续静脉滴注方案对乳腺癌软组织、肺、胸膜、骨、肝转移的有效率分别为46．7％（21／45）、38．5％（5／13）、31.3％（5／16）、40％（4／10）和20％（2／10）。结论 紫杉醇加醛氢叶酸、（5-FU）48h持续静脉滴注双周疗法治疗CAF方案耐药的晚期乳腺癌疗效好,毒副反应低,是治疗CAF方案耐药的晚期乳腺癌较理想的方案之一。     

雷公藤甲素增强5-FU对肝癌细胞SMMC7721诱导凋亡作用的实验研究

目的 观察雷公藤甲素(triptolide,TPL)、5-FU对肝癌细胞SMMC 7721增殖及凋亡的影响;探讨TPL能否增强5-FU对SMMC 7721细胞的诱导凋亡作用.方法 SMMC 7721细胞置于RPMI-1640培养液+10%胎牛血清中培养;MTT法测定5-FU、TPL对SMMC 7721细胞的增殖抑制效果...     

内镜下局部注射药物治疗晚期食管、胃癌性狭窄38例

目的:探讨内镜下局部注射治疗晚期食管、胃癌性狭窄的临床疗效。方法:选择38例晚期食管、胃癌患者,且出现上消化道完全及不完全梗阻症状,用内镜下局部注射化疗。结果:总有效率为92.1%。结论:内镜下局部注射治疗晚期食道、胃癌性狭窄疗效满意,而且不良反应较少,提高了生活质量,并延长了生命。