尿毒症ApoE基因敲除小鼠加速发展的动脉粥样硬化与体内T细胞(Treg/Teff)平衡的关系

目的建立尿毒症apoE-/-小鼠的动物模型,探讨模型鼠主动脉加速发展的动脉粥样硬化与体内T细胞(Treg/Teff)平衡的关系。方法选用C57BL/6J遗传背景的apoE-/-鼠为研究对象,通过右肾皮质电凝加左肾切除术建立尿毒症apoE-/-鼠模型,对照apoE-/鼠行假手术。造模后2周检测肾功能判断造模是否成功。造模后10周采血检测肾功、血清总胆固醇;应用ELISA法检测血清TGF-β1及IFN-γ浓度;应用流式细胞术检测脾脏CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞比率;应用实时荧光定量PCR法检测主动脉组织中Foxp3及IFN-γ mRNA的表达;收集主动脉根部行冰冻切片油红O染色计算斑块相对面积。分析肾功能指标与Treg数量的相关性。结果造模后肾功能检测显示造模成功。造模后10周与对照组apoE-/鼠相比:尿毒症apoE-/-鼠主动脉根部动脉粥样硬化斑块相对面积显著提高,脾脏Treg细胞比率下降,血清TGF-β1浓度降低及IFN-γ、总胆固醇浓度升高,主动脉Foxp3 mRNA表达下调及IFN-γ mRNA表达上调。肾功能指标与Treg数量呈显著负相关。结论成功地建立了尿毒症apoE-/-小鼠模型。模...     

橙皮素抗apoE-/-小鼠动脉粥样硬化作用及其机制

目的探讨橙皮素抗apoE-/-小鼠动脉粥样硬化作用及其机制。方法40只8周龄apoE-/-小鼠随机分为4组,即普通饮食组(NC)、动脉粥样硬化高脂饮食组(WD)、橙皮素高剂量(100 mg/kg)组(H-HES)、橙皮素低剂量(50 mg/kg)组(L-HES),各10只。采用灌胃方式给予橙皮素,根据每只小鼠体质量给予不同的剂量,12周后处死小鼠前眶静脉采血,全自动生化分析仪检测血清三酰甘油、总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇和高密度脂蛋白胆固醇浓度,并采用ELISA试剂盒检测apoE-/-小鼠血清中肿瘤坏死因子(TNF-α)和单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)的浓度,麻醉小鼠后左心室灌注多聚甲醛固定,主动脉树油红O染色观察斑块百分比,同时取材主动脉窦采用免疫荧光技术观察斑块巨噬细胞的浸润情况。结果与NC组比较,WD组、H-HES组及L-HES组apoE-/-小鼠血清TC、TG、LDL-C浓度显著升高,HDL-C显著降低(P<0.05),且H-HES及L-HES组TC、TG、LDL-C的水平显著低于WD组(P<0.05)。高脂高胆固醇饲料喂养12周后,WD组的主动脉树动脉粥样硬化病变非常显著,其主动脉树的AS斑块面积百分比为(0.1430±0.0604),而H-HES组、L-HES组的主动脉树AS的面积百分比分别为(0.0404±0.0175)、(0.0252±0.0195),与WD组相比,H-HES组、L-HES组主动脉树AS病变显著减轻,差异有统计学意义(P<0.05)。WD组的主动脉窦动脉粥样硬化斑块部位巨噬细胞浸润增加,经过橙皮素12周治疗后,H-HES和L-HES组主动脉窦斑块部位CD68巨噬细胞浸润减少(P<0.05)。WD组apoE-/-小鼠血清MCP-1和TNF-α的浓度分别为(807.33±122.46)、(9.87±1.75)μg/L高于H-HES及L-HES组的(365.83±66.31)、(6.34±0.65)μg/L及(405.74±46.21)、(9.48±0.82)μg/L,差异有统计学意义(P<0.05)。结论橙皮素有明显的调脂降血脂作用,同时具有抗动脉粥样硬化效果,其主要通过抗炎发挥药理作用。     

基因芯片检测apoE基因敲除小鼠动脉粥样硬化相关基因的表达节律

目的利用基因芯片筛选apoE-/-动脉粥样硬化小鼠心脏与主动脉内膜中可能受到生物钟调控的动脉粥样硬化基因,并研究其表达情况。方法采用apoE-/-小鼠建立动脉粥样硬化模型,以同品系C57BL/6J小鼠作为对照;使用动脉粥样硬化基因芯片检测在ZT0与ZT12处死的两种小鼠心脏与主动脉内膜中113个动脉粥样硬化相关基因的表达情况;应用Real-time PCR检测在心脏与主动脉内膜中表达均发生改变的ACE与MMP3的昼夜表达节律。结果饲以高脂膳食（含0.15%的胆固醇和21%的脂肪）4周的apoE-/-小鼠主动脉粥样斑块形成;apoE-/-动脉粥样硬化小鼠血清胆固醇与低密度脂蛋白明显高于对照组C57BL/6J小鼠,高密度脂蛋白则明显低于对照组;基因芯片结果显示apoE-/-动脉粥样硬化小鼠与C57BL/6J小鼠心脏与主动脉内膜动脉粥样硬化相关基因表达有较大差异,apoE-/-小鼠心脏与主动脉内膜分别有6个及10个基因在两个时间点表达均下调,此外,心脏与主动脉内膜中分别有15及12个原本在C57BL/6J小鼠表达随时间改变的基因在apoE-/-小鼠中不再随时间改变;Real-time PCR结果显示ACE与MMP3在对照组C57BL/6J小鼠心脏中具有昼夜节律,但在apoE-/-动脉粥样硬化小鼠中,这种表达节律消失,且表达水平降低。结论动脉粥样硬化相关基因表达节律发生改变,这可能在动脉粥样硬化的病理过程中发挥了重要作用,对其机制的研究对我们更好地认识这种心血管疾病将具有重要意义。     

CD4+IL-9+T细胞在实验性动脉粥样硬化中的作用

目的 探讨CD4+IL-9+T细胞(Th9)在载脂蛋白E基因敲除(ApoE-/-)小鼠动脉粥样硬化模型中表达变化及意义.方法 8周龄ApoE-/-小鼠高脂饮食饲养,同周龄C57BL/6对照小鼠普通饮食饲养,至32周龄后,测定血清中血脂含量;小鼠心脏主动脉根部石蜡切片,常规HE染色,观察动脉粥样硬化斑块的组织学特点;流式细胞术检测脾脏Th9细胞表达;ELISA法测定血清白介素(IL)-9和氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)的浓度.结果 32周龄时,ApoE-/-小鼠血脂水平升高,主动脉根部出现明显脂质斑块,其脾脏Th9细胞表达率、血清IL-9和 ox-LDL浓度均明显高于同周龄C57BL/6小鼠(P<0.01).Th9表达率、IL-9浓度与ox-LDL浓度均呈显著正相关性(P<0.01).结论 Th9细胞及其分泌的IL-9在动脉粥样硬化发生中发挥重要作用,Th9细胞可成为动脉粥样硬化发病机制研究和干预治疗的重要靶点.     

血管软化丸调控miRNA-467b抗动脉粥样硬化的作用与初步机制研究

目的 探讨中药复方血管软化丸通过miRNA-467b靶向脂蛋白脂肪酶（lipoprotein lipase,LPL）调控巨噬细胞,减少白细胞介素（interleukin,IL）-6,IL-1β、肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α,TNF-α）和单核细胞趋化蛋白-1（monocyte chemoattractant protein-1,MCP-1）等炎症因子分泌和巨噬细胞脂质蓄积,从而发挥抗动脉粥样硬化的作用与初步机制。方法 将RAW264.7巨噬细胞随机分为5组,即对照组、模型组、miR-467b mimic组、中药高剂量含药血清组、中药低剂量含药血清组;经干预后,采用RT-PCR检测巨噬细胞中pri-miR-467b和LPL mRNA表达;采用高效液相色谱法检测巨噬细胞内胆固醇水平。连续4周高脂饲料（含脂肪21%、胆固醇0.15%）饲养ApoE-/-小鼠复制动脉粥样硬化模型,模型复制成功后,中药高、低剂量组每日分别灌胃血管软化丸86.4、21.6 g/kg,连续给药12周;对照组、模型组每日灌胃0.9%生理盐水86.4 g/kg 。采用免疫组织化学法检测主动脉LPL蛋白表达水平,RT-PCR检测主动脉pri-miR-467b和LPL mRNA表达水平;采用ELISA法检测血清IL-6、IL-1β、TNF-α、MCP-1水平。结果 与对照组比较,模型组巨噬细胞pri-miR-467b mRNA表达水平和巨噬细胞内游离胆固醇（free cholesterol,FC）水平均明显降低（P＜0.05）,巨噬细胞内LPL mRNA及其蛋白表达水平以及总胆固醇（total cholesterol,TC）、胆固醇酯（cholesterol ester,CE）水平均明显升高（P＜0.05）。血管软化丸能够无剂量依赖性地升高巨噬细胞pri-miR-467b mRNA表达水平和巨噬细胞内FC水平（P＜0.05）,降低巨噬细胞中LPL mRNA及其蛋白表达水平以及TC、CE水平（P＜0.05）。血管软化丸能够升高主动脉pri-miR-467b mRNA表达水平（P＜0.05）,降低主动脉中LPL mRNA及其蛋白表达水平以及血清中IL-6、IL-1β、TNF-α、 MCP-1水平（P＜0.05）。结论 血管软化丸抑制动脉粥样硬化斑块形成的作用机制可能与调控miRNA-467b靶向LPL调控巨噬细胞,减少IL-6、IL-1β、TNF-α、MCP-1等炎症因子分泌和巨噬细胞脂质蓄积相关。     

巨细胞病毒感染加重载脂蛋白E基因敲除小鼠动脉粥样硬化

目的本研究以载脂蛋白E基因敲除(apolipoprotein-E knockout,apoE-/-)小鼠为研究对象,给予低剂量的小鼠巨细胞病毒(murine cytomegalovirus,MCMV),以期了解在模拟人体内潜伏感染状态下病毒对动脉粥样硬化形态学方面的影响,以及凝集素样氧化型低密度脂蛋白受体-1(lectin-like ox-LDL receptor-1,LOX-1)基因的表达变化,以探讨MCMV在动脉粥样硬化形成及发展过程中所起的作用。方法采用随机数字表法将32只高脂饮食apoE-/-小鼠随机分为2组,其中1组经腹腔感染MCMV,分别在感染后14周、18周和24周截取主动脉;另1组不感染MCMV。通过HE染色观察2组动物主动脉粥样硬化病变的面积、数目、分级和内膜/中膜比值,实时定量PCR(real-time PCR)检测动脉壁和唾液腺中的MCMV含量以及LOX-1基因表达量的变化。结果研究显示在慢性潜伏感染阶段,MCMV感染明显加重apoE-/-小鼠动脉粥样硬化病变面积;但随感染时间的延长,该作用逐步减弱。小鼠动脉壁中没有MCMV mRNA的表达。血浆MCMV抗体含量、唾液腺MCMV DNA含量和动脉粥样硬化病变程度没有相关性。感染后14周,病毒组LOX-1mRNA含量较对照组明显增高。结论在慢性潜伏感染阶段,MCMV感染可以明显加重apoE-/-小鼠主动脉AS病变,并使重度AS病变提前出现,但在血管壁局部并无MCMV活动性感染的证据。MCMV感染后可增加动脉壁LOX-1基因表达,LOX-1的高表达可能是MCMV加重动脉粥样硬化形成的途径之一。     

慢性肾功能不全通过下调ABCA1表达影响巨噬细胞内胆固醇含量

目的 探讨慢性肾功能不全患者巨噬细胞内胆固醇含量的变化及ATP结合盒受体A1(ATP binding cassette transporter-A1,ABCA1)的表达情况.方法 选取2010年8月至2012年3月重庆医科大学第一附属医院住院的慢性肾功能不全(chronic renal failure,CRF)患者30例和健康对照组20例.分离外周血单核细胞诱导贴壁巨噬化,油红O染色鉴定,应用酶法测定巨噬细胞内胆固醇含量,应用real-time PCR与Western blot方法测定细胞ABCA1的mRNA及蛋白表达.结果 慢性肾功能不全患者巨噬细胞内胆固醇含量明显高于健康对照组(P＜0.01),ABCA1在慢性肾功能不全患者巨噬细胞中的mRNA与蛋白表达显著低于健康对照组(P＜0.01).结论 慢性肾功能不全患者巨噬细胞的胆固醇含量明显增加,胆固醇含量增加与慢性肾功能不全患者ABCA1的表达下调有关.     

真核起始因子4E对小鼠动脉粥样硬化发生、发展的炎症调节作用*

目的 探讨真核起始因子4E（eIF4E）在小鼠动脉粥样硬化发生、发展过程中的炎症调节作用。方法 分别用200?ng/μl脂多糖（LPS）和20?ng/μl白细胞介素-4（IL-4）诱导RAW264.7细胞12?h后提取mRNA,24?h后提取蛋白,采用实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）和Western blotting检测eIF4E mRNA和蛋白在M1型和M2型巨噬细胞中的表达变化。复制ApoE-/-动脉粥样硬化小鼠模型,检测小鼠腹主动脉eIF4E mRNA和蛋白表达变化;组织免疫荧光检测eIF4E在主动脉根部中分别与M1型和M2型巨噬细胞中的共表达。结果 M1型巨噬细胞eIF4E mRNA和蛋白表达高于M2型巨噬细胞（P?<0.05）。在ApoE-/- 小鼠动脉粥样硬化模型中,ApoE-/-小鼠腹主动脉eIF4E mRNA和蛋白表达高于C57BL/6J小鼠（P?<0.05）;eIF4E与CD86的共定位表达高于eIF4E与CD206的共定位表达。结论 eIF4E在动脉粥样硬化的发展过程中主要在M1型巨噬细胞中起作用,进而对动脉粥样硬化产生影响。     

麝香保心丸对小鼠动脉粥样硬化的作用及机制研究

目的探究麝香保心丸在载脂蛋白E(ApoE)敲除小鼠中的抗动脉粥样硬化作用及其作用机制。方法2019年9月—2020年8月于武汉科技大学实验动物中心进行实验。ApoE基因敲除雄性小鼠60只,按照随机数字表法分为2组,各30只。干预组小鼠予麝香保心丸(25 mg/kg)研沫+生理盐水灌胃,对照组予生理盐水(与干预组等体积)灌胃。2组小鼠均高脂饲养20周后处死,取主动脉树及主动脉窦染色,比较2组小鼠主动脉树及主动脉窦部斑块面积,取血液检测血清三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平,免疫荧光法及PCR法检测小鼠主动脉组织白介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达水平,PCR及Western-blot法检测小鼠主动脉组织肝细胞X受体-α(LXRα)、LXRβ、ATP结合盒转运蛋白A1(ABCA1)、ABCG1表达水平。结果干预组小鼠主动脉树及主动脉窦部斑块面积均低于对照组(t/P=3.021/0.019、3.238/0.001);血清TG、TC、LDL-C水平均低于对照组(t=5.074、6.327、4.492,P均<0.001),而HDL-C水平高于对照组(t/P=3.138/0.001)。干预组小鼠主动脉组织IL-6及TNF-αmRNA水平明显低于对照组(t/P=3.027/0.017、2.478/0.019),主动脉组织LXRα、LXRβ、ABCA1、ABCG1 mRNA均高于对照组(t=5.276、6.137、4.565、5.136,P均<0.01)。结论麝香保心丸通过抑制炎性反应和促进胆固醇流出,可达到抗动脉粥样硬化的目的。     

绞股蓝总皂苷调节THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞胆固醇平衡的作用机制

[目的]通过体外实验研究绞股蓝总皂苷调节THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞胆固醇平衡的作用机制。[方法]采用体外培养人THP-1巨噬细胞,以氧化低密度脂蛋白(Oxidized low density lipoprotein,ox-LDL)诱导THP-1巨噬细胞泡沫化为模型,用绞股蓝总皂苷进行干预。通过油红O染色观察细胞内脂质堆积情况和酶比色法定量检测细胞内总胆固醇(TC)和胆固醇酯(CE)的变化,并利用RT-PCR方法检测CD36、ABCA1、LXR-α、PPAR-α受体mRNA表达。[结果]与ox-LDL诱导组相比,绞股蓝总皂苷组(GPS组)巨噬细胞的油红O染色阳性细胞数和细胞内脂质含量均显著减少,同时CD36受体mRNA表达明显降低,而ABCA1、LXR-α、PPAR-α受体mRNA表达明显升高。[结论]绞股蓝总皂苷可抑制ox-LDL诱导的THP-1巨噬细胞泡沫化,降低细胞内脂质积累,促进细胞内的脂质向细胞外转运,有利于防止泡沫细胞的形成及动脉粥样硬化的进程。该作用可能与绞股蓝总皂苷下调巨噬细胞CD36受体表达,上调巨噬细胞ABCA1、LXR-α、PPAR-α受体表达从而减弱巨噬细胞对ox-LDL的摄取和促进...     

抗β2GPI抗体促进巨噬细胞摄取oxLDL加速动脉粥样硬化进展

目的：研究抗β2糖蛋白Ⅰ(β2GPⅠ)抗体在apoE基因敲除(apoE^-/-)小鼠巨噬细胞摄取功能及动脉粥样硬化之间的关系。方法：将雄性apoE^-/-小鼠随机分为抗β2GPI抗体组和模型组,每组8只,均给予高脂饲料喂养8周,其中,抗β2GPI抗体组小鼠腹腔注射抗β2GPI抗体,模型组小鼠腹腔注射同等剂量0.9%氯化钠溶液稀释的同源对照IgG抗体。8周后解剖小鼠,分离小鼠主动脉根组织,行Movat染色、免疫组织化学染色,观察主动脉根部动脉粥样硬化斑块的病理组织学特点;Western blotting检测主动脉斑块中内质网应激和巨噬细胞的标志蛋白表达;腹腔巨噬细胞体外培养,抗β2GPI抗体组和模型组分别加入氧化型低密度脂蛋白(oxLDL)+抗β2GPI抗体、oxLDL刺激24 h,观察巨噬细胞摄取oxLDL情况。结果：Movat染色显示,抗β2GPI抗体组小鼠主动脉斑块增多,斑块面积较大,胶原纤维、平滑肌纤维含量均减少,与模型组相比差异有统计学意义(P<0.05～P<0.01)。免疫组织化学染色显示,抗β2GPI抗体组小鼠主动脉根部斑...     

载脂蛋白嵌合模拟肽通过NF-κB途径抑制ox-LDL诱导的巨噬细胞炎症反应

目的：探讨载脂蛋白嵌合模拟肽Ac-hE-18A-NH2对氧化型低密度脂蛋白(oxidized LDL,ox-LDL)刺激下巨噬细
胞肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)表达的影响及其作用机制。方法：Ox-LDL刺激RAW264.7巨噬细胞,
给予不同浓度的模拟肽Ac-hE-18A-NH2(1~100 μg/mL)干预,收集细胞,测定巨噬细胞TNF-α的分泌和mRNA表达水平。
Western印迹检测ATP结合盒转运蛋白A1(ATP-binding cassette transporter A1,ABCA1)及P-IκB蛋白浓度。EMSA检测核因
子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)活性。结果：Ox-LDL刺激使RAW264.7巨噬细胞TNF-α 分泌和mRNA表达明显增强,细
胞内胆固醇蓄积,促进IκB磷酸化,并激活NF-κB。Ac-hE-18A-NH2浓度依赖性地降低TNF-α 分泌及mRNA表达,上调
ABCA1 mRNA和蛋白的表达,减少细胞内胆固醇含量,抑制NF-κB活化,并抑制IκB磷酸化。相同的实验条件下及作
用浓度,D-4F对于TNF-α 分泌的抑制作用不如Ac-hE-18A-NH2。结论：Ac-hE-18A-NH2能抑制ox-LDL诱导的RAW264.7
巨噬细胞TNF-α分泌和mRNA表达,IκB/NF-κB-TNF-α信号通路是其中作用途径之一。Ac-hE-18A-NH2的抗炎作用优于
apoA-I模拟肽D-4F。     

不同月龄和血脂水平ApoE基因敲除小鼠体内类固醇激素合成急性调节蛋白的表达

 目的 检测不同月龄和不同血脂水平载脂蛋白E敲除小鼠体内类固醇激素合成急性调节蛋白（steroidogenic acute regulatory protein,StAR）的表达水平。方法 实验分别选取雄性和雌性1天龄新生鼠、1月龄、3月龄及5月龄载脂蛋白E敲除小鼠（apoE-/-）及对照C57BL/6J小鼠,每组6只,共16组。利用试剂盒检测不同年龄小鼠的血脂水平。利用实时定量RT-PCR及Western blot方法检测不同年龄和血脂水平下,小鼠肝脏中StAR基因和蛋白的表达。结果 相比同年龄同性别的正常对照小鼠,载脂蛋白E敲除小鼠血清中含较高水平的低密度脂蛋白（LDL）和较低水平的高密度脂蛋白（HDL）。在对照小鼠中,StAR基因和蛋白表达水平随月龄增加逐渐下降;但是在载脂蛋白E敲除小鼠体内,因为血脂水平的提高,StAR基因和蛋白表达水平呈现先增高后降低的趋势。结论 StAR通过调节脂质代谢,可作为一个有效调节动脉粥样硬化以及其他心血管疾病的调节因子。     

阿托伐他汀影响C57BL/6J小鼠主动脉粥样硬化的机制

目的:探讨阿托伐他汀对C57BL/6J小鼠动脉粥样硬化的影响机制。方法:将24只雄性C57BL/6J小鼠随机分为对照组、模型组和药物干预组。12周后酶法和免疫比浊法检测血清甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)和apoA-I;HE染色观察主动脉病理形态学改变;高效液相色谱法检测动脉壁胆固醇含量;PepTag@Assay法检测蛋白激酶C活性变化;Westernblot检测动脉壁CD36蛋白表达。结果:相较于模型组,阿托伐他汀可以显著下调血清总胆固醇和LDL胆固醇水平,上调血清apoA-I水平,抑制胆固醇在血管壁的蓄积,降低内膜/中膜厚度比,下调动脉壁蛋白激酶C活性和CD36蛋白表达,有效地抑制了动脉粥样硬化的发展。结论:阿托伐他汀可能是通过抑制胆固醇合成、下调蛋白激酶C活性和CD36蛋白表达而发挥降脂、消斑、改善动脉壁功能的作用。     

PCSK9 siRNA对THP-1源性巨噬细胞CD36?SR-A1及SR-B1表达的影响

目的:研究前蛋白转换酶枯草溶菌素9(PCSK9) siRNA对THP-1源性巨噬细胞CD36?SR-A1及SR-B1表达的影响?方法:以THP-1源性巨噬细胞为研究对象,应用Lipofectamine 2000转染不同浓度PCSK9 siRNA进THP-1源性巨噬细胞中,RT-PCR及Western blot筛选出最有效的siRNA,再转染入THP-1源性巨噬细胞,24 h后加入ox-LDL处理24 h,采用油红O染色检测细胞内脂质蓄积情况,RT-PCR分析细胞CD36?SR-A1及SR-B1表达?结果:浓度为80 nmol/L的PCSK9 siRNA基因沉默效应最佳;油红O染色结果表明ox-LDL组细胞内脂质蓄积情况最为明显,PCSK9 siRNA转染组次之;PCSK9 siRNA转染组CD36 mRNA表达水平相对于ox-LDL组降低(P < 0.05),而ox-LDL组和PCSK9 siRNA转染组SR-A1及SR-B1 mRNA表达无明显差异?结论:PCSK9可能通过影响摄取脂质的细胞膜表面受体CD36表达,参与动脉粥样硬化的发生发展?     

脂肪因子chemerin促进巨噬泡沫细胞形成

目的观察脂肪因子chemerin是否调节巨噬泡沫细胞形成,以及对巨噬泡沫细胞CD36、ATP结合盒转运子A1(ATP-binding cassette transporter A1,ABCA1)表达和炎症因子释放的影响。方法 100nmol/L佛波酯(phorbolmyristate acetate,PMA)诱导THP-1单核细胞分化为巨噬细胞,随机分组,Chemerin不同浓度和作用时间下联合相同浓度(50μg/mL)氧化型低密度脂蛋白与THP-1源性巨噬细胞共孵育。油红O染色观察细胞内脂滴变化,Western blot和实时PCR检测CD36、ABCA1的mRNA和蛋白水平的表达。ELISA法检测培养液中炎症因子———肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor alpha,TNF-α)和白细胞介素10(interleukin-10,IL-10)的浓度,酶法检测细胞内胆固醇含量。结果Chemerin诱导巨噬细胞内脂滴蓄积,下调CD36和ABCA1mRNA及蛋白的表达,增加培养液中促炎因子TNF-α的释放而降低抗炎因子IL-10的释放,提高细胞内胆固醇的含量,且有浓度和时间依赖性。结论 Chemerin通过下调CD36和ABCA1基因的mRNA及蛋白的表达,诱导THP-1巨噬细胞内脂滴蓄积和泡沫细胞形成;ABCA1表达下调可能与促炎因子TNF-α释放增加和抗炎因子IL-10释放减少有关。     

水蛭对载脂蛋白E基因敲除鼠动脉粥样硬化斑块的影响

目的:探讨水蛭对载脂蛋白E基因敲除(apoE-/-)小鼠动脉粥样硬化(As)斑块的影响及可能机制。方法:(21±3)g雌性apoE-/-小鼠20只,12-13周龄,高脂喂养8周后随机分为对照组和水蛭用药组,第10周后改为普通饲养,对照组给予0.5%羧甲基纤维素钠(CMC-Na)悬液灌胃,用药组于混悬液中加入水蛭粉[0.2 mg/(g.d)]灌胃8周。小鼠禁食过夜后采取眼球后静脉血,测量血浆总胆固醇(TC)、甘油三脂(TG)水平,肿瘤坏死因子α(TNF-α)和对氧磷酯酶1(PON1)酶活性,处死小鼠后剖面分析胸腹主动脉As斑块面积,主动脉根部组织冰冻切片分析斑块面积、脂质含量以及血管平滑肌细胞(SMC)面积。结果:与对照组比较,水蛭组小鼠血浆TC及TNF-α水平明显下降,而TG水平和PON1酶活性并无显著改变;水蛭能明显减少主动脉As斑块面积,斑块中脂质含量减少但所占斑块比例无差异,而斑块中SMC比例显著减少。结论:水蛭粉喂食可能通过降低apoE-/-小鼠的血脂及炎症水平,进一步抑制As斑块中SMC增殖而发挥抗As的功能。     

围着床期小鼠子宫中巨噬细胞的变化及作用

目的观察小鼠子宫中胚胎着床部位与非着床部位巨噬细胞（Macrophage, Mφ）的分布差异,探讨其在胚胎着床过程中的
作用。方法取真孕（n=30）和假孕小鼠（n=30）子宫组织,选择30只妊娠小鼠模型作为实验组,同时选择30只假孕小鼠模型作为
对照组,在围着床期取两组小鼠子宫组织,采用免疫组化技术检测子宫组织中Mφ、诱导型一氧化氮合成酶（iNOS）、白血病抑制
因子（LIF）的分布,分析比较子宫组织中胚胎着床部位和非着床部位Mφ、iNOS和LIF的分布差异及相关性。结果在小鼠子宫
组织中,观察到实验组Mφ在D4.5（雌鼠交配后次日晨阴道见栓为D0.5）前主要分布子宫内膜,D4.5后主要分布于子宫外膜,对
照组Mφ主要分布于子宫内膜;实验组iNOS在D4.5前主要分布子宫内膜,D4.5后主要见于子宫肌膜和外膜,对照组iNOS主要
位于子宫内膜,且实验组Mφ和iNOS分布呈正相关。此外,实验组LIF显著表达于子宫内膜,对照组几乎不表达,二者间有统计
学差异（P<0.05）;着床部位Mφ、iNOS和LIF明显高于非着床部位,其中Mφ、LIF比较有统计学差异（P<0.05）。结论围着床期
小鼠子宫组织中Mφ主要分布在子宫内膜及胚胎着床点,并伴有iNOS和LIF的表达,提示Mφ在胚胎着床中可能发挥重要作用。
     

口服人α干扰素转化双歧杆菌促进小鼠淋巴细胞的增殖和成熟

目的探讨人α干扰素（IFN-α）基因转化双歧杆菌口服后对小鼠免疫功能的调节作用。方法构建含人IFN-α基因的大肠杆
菌-双歧杆菌穿梭表达载体pBADX-hIFNα2b,电转化获得IFN-α基因转化双歧杆菌,收集L-阿拉伯糖诱导hIFN-α2b表达后的菌
体制备成活菌悬液,灌胃Balb/C小鼠。实验组（IFN）小鼠用0.2% L-阿拉伯糖诱导表达后的hIFN-α2b转化双歧杆菌处理,每只
按0.1 ml 1010/ml活菌灌胃;阴性对照组（NC）用等量等体积空载体pBADX转化双歧杆菌活菌灌胃;空白对照组（BC）用等体积
生理盐水灌胃。隔天灌胃1次,连续处理2周。流式细胞术检测小鼠胸腺、脾脏和血液中淋巴细胞亚群和比例,流式试剂盒检测
IFN-γ、IL-4 等免疫因子的含量。结果与NS组和BC组相比,IFN组小鼠胸腺CD3+CD8+、CD4+CD8+细胞的比例显著升高（P<
0.01）;脾脏CD3+CD4+、CD3+CD8+和CD4+CD8+细胞的比例均显著升高（P<0.01）;血液中只有CD3+CD8+细胞的比例显著升高
（P<0.01）。血液中IFN 组IFN-γ的含量比BC组和NS组显著升高（P<0.01）;此外,NS组IFN-γ的含量比BC组显著升高（P<
0.05）;三组小鼠中血液hIFN-α2b和IL-4的浓度无显著性差异（P>0.05）。结论口服hIFN-α转化的双歧杆菌促进小鼠胸腺和脾
脏淋巴细胞增殖和成熟,增高血液Th1类细胞因子水平。