改进的瑞氏染色法对人与小鼠淋巴细胞自发凋亡形态的鉴定及其意义

目的以人和小鼠淋巴细胞为研究对象，建立一种在光学显微镜下快速而特异识别凋亡淋巴细胞的染色方法，为淋巴细胞凋亡的研究提供一种简便易行的实验方法。方法收集人或小鼠淋巴细胞制成细胞涂片，晾干，滴加瑞氏染液染1min，再于瑞氏染液上滴加等量的PBS，混匀，染1～2min，水洗晾干后用中性树胶封片，镜检。实验设立实验组（经体外培养的淋巴细胞）和对照组（未经体外培养的新鲜淋巴细胞），动态观察体外淋巴细胞自发凋亡情况。结果人和小鼠淋巴细胞形态基本相似，实验组可见不同程度的细胞凋亡，光镜下细胞呈典型凋亡特征改变：凋亡早期细胞形态不规则，体积变大，然后核染色质边聚、浓缩、细胞核固缩呈半球形、环形、月牙形等，继而细胞裂解成细胞质膜包绕的核碎片，即形成凋亡小体，凋亡细胞体积缩小，而对照组的凋亡细胞偶见。与人淋巴细胞相比较，小鼠淋巴细胞更易发生凋亡。结论本法将瑞氏染色法进行改进，省去了甲醇固定细胞步骤及调整了染色条件等，对淋巴细胞进行染色，在光学显微镜下识别凋亡细胞，具有特异性高，染色方法简便、快速，成本低廉等优点，易于在实验研究和临床推广应用。     

催乳素保护人B淋巴细胞免其凋亡的实验研究

目的:研究人催乳素(PRL)在B淋巴母细胞系IM-9细胞凋亡中的保护作用。方法:在地塞米松诱导IM-9细胞凋亡的实验体系中加入PRL(10ng/ml),DNA琼脂糖凝胶电泳观察PRL对地塞米松诱导IM-9细胞凋亡的保护。结果:地塞米松组诱导的IM-9细胞在48h后出现细胞凋亡,DNA琼脂糖凝胶电泳显示有大量小分子DNA片段形成,呈典型的细胞凋亡DNA梯形带,地塞米松-PRL组的IM-9细胞的DNA经电泳后未出现凋亡的DNA条带。结论:地塞米松能诱导IM-9细胞的凋亡,PRL能保护IM-9细胞,免其凋亡。     

体外联合培养条件下小鼠睾丸足细胞诱导成熟T淋巴细胞凋亡

目的 :探讨体外联合培养条件下睾丸足细胞能否诱导 T淋巴细胞凋亡。方法 :用 TU NEL 标记、核酸电泳、电镜、流式细胞术检测对照组 (T淋巴细胞 )、A组 (T淋巴细胞 +培养睾丸足细胞 2 4h培养基上清 )、B组 (T淋巴细胞 +睾丸足细胞 )等 3组中小鼠成熟 T淋巴细胞的凋亡及其数量的变化。结果 :3组 T淋巴细胞在电镜下均可见细胞染色质浓集 ,核固缩裂解 ,凋亡小体形成 ;TUNEL 标记见部分细胞核染色呈深蓝色 ;核酸电泳出现典型 DNA梯状带 ;流式细胞术检测 A,B两组 T淋巴细胞凋亡量均明显高于对照组 (P<0 .0 1) ,B组 T淋巴细胞凋亡数量显著高于 A组 (P<0 .0 1)。 结论 :体外培养条件下小鼠睾丸足细胞能够诱导成熟 T淋巴细胞凋亡。     

四肽AC-DEVD-CHO对硫芥诱导淋巴细胞凋亡的干预作用

目的 探讨caspase-3活性在硫芥诱导淋巴细胞凋亡中的变化和其四肽抑制剂AC-DEVD-CHO对细胞凋亡的干预作用。方法 荧光分光光度法检测caspase-3活性变化，琼脂糖凝胶电泳和流式细胞仪分别检测DNA ladder，细胞凋亡率。结果 硫芥可诱导淋巴细胞caspase-3活性升高，其多肽抑制剂可部分阻断细胞凋亡，主要表现在抑制剂作用下DNA ladder。现象减弱，细胞凋亡百分数下降。结论 硫芥通过激活caspase-3诱导淋巴细胞凋亡，其多肽抑制剂对淋巴细胞凋亡具有干预作用。     

硒对紫外线诱导HLF细胞凋亡的保护作用

目的：探讨紫外线诱导人HLF细胞凋亡时DNA降解特点，以及硒对紫外线诱导细胞凋亡的保护作用。方法：紫外线分别照射体外培养的人肺成纤维细胞3min和5min，同时添加亚硒酸钠（8ng/ml），设立对照组。利用吖啶橙荧光染料染色鉴定凋亡细胞，利用琼脂糖凝胶电泳检测DNA ladder。结果：紫外线可以诱导人肺成纤维细胞（28代）凋亡，作用存在时间效应关系。紫外线诱导人肺成纤维细胞凋亡时，未出现典型的DNA ladder现象。硒对于紫外线诱导的细胞凋亡有显著的抑制作用。结论：DNA ladder不能作为细胞凋亡的唯一的标志，紫外线诱导的细胞凋亡与DNA ladder的出现并不总是一致的。硒具有拮抗紫外线诱导的细胞凋亡作用。     

地塞米松对大鼠肝脾细胞凋亡的影响

目的探讨地塞米松对大鼠肝脾等器官淋巴细胞的影响和对机体免疫抑制作用的机制。方法将20只Wistar大鼠随机分成两组,每组10只,实验组每天腹腔注射地塞米松3 mg/(kg.d),3 d后称大鼠体重、脾湿重、肝湿重。用流式细胞仪分析Annexin V/PI双染后脾细胞的凋亡率。结果实验组体重、脾湿重明显减轻(P<0.001),肝重改变不明显(P=0.75),脾细胞的凋亡率为(34.9±5.8)%,较对照组的凋亡率(0.71±0.09)%显著高(P<0.01)。结论地塞米松促进大量淋巴细胞凋亡是其抑制机体的免疫功能的一种重要机制。     

肿瘤抑素诱导喉癌Hep-2细胞凋亡的实验研究

目的探讨肿瘤抑素对体外培养的人喉癌Hep-2细胞系凋亡的影响。方法用MTT法和台盼蓝染色法观察肿瘤抑素对喉癌Hep-2细胞生长的抑制作用。实验分为对照组和治疗组．光镜、电镜观察细胞形态及超微结构变化，采用DNA琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡的梯形条带，TUNEL标记法检测细胞凋亡情况。结果随着肿瘤抑素浓度的增加喉癌Hep-2细胞的存活率下降。在相同浓度下。随着时间延长存活细胞逐渐减少。电镜观察治疗组细胞出现明显凋亡，琼脂糖电泳结果可见治疗组产生了特征性的DNA梯形条带，TUNEL标记法也证实治疗组可见明显的棕黄色凋亡细胞。结论肿瘤抑素通过诱导凋亡对体外培养的人喉癌Hep-2细胞系产生杀伤作用。     

维生素C对紫外线诱导HLF细胞凋亡的保护作用

目的 探讨紫外线诱导人HLF细胞凋亡对DNA降解特点，以维生素C对紫外线诱导细胞凋亡的保护作用。方法 紫外线（UVB）分别照射体外培养的人肺成纤维细胞3min和5min，同时添加维生素C（50μmol/L）。设立对照组。利用吖啶荧光染料染色鉴定凋亡细胞，利用琼脂糖凝胶电泳检测DNA ladder。结果 紫外线可以诱导人肺成纤维细胞凋亡，作用存在时间效应关系。紫外线诱导人肺成纤维细胞凋亡时，未出现典型的DNA ladder现象。维生素C对于紫外线诱导的细胞凋亡有显著的抑制作用。结论 DNAladder不能作为细胞凋亡的唯一的标志，紫外线诱导的细胞凋亡与DNA ladder的出现并不总是一致的。维生素C具有拮抗紫外线诱导的细胞凋亡作用。     

前凋亡因子Bim在地塞米松诱导小鼠胸腺细胞凋亡中的作用

目的 研究前凋亡因子Bim在地塞米松诱导小鼠胸腺细胞凋亡中的作用. 方法体外培养BALB/c小鼠胸腺细胞,终浓度1 μmol/L地塞米松诱导细胞,透射电镜、AnnexinV/PI双染流式细胞术、DNA凝胶电泳检测细胞凋亡;RT-PCR半定量法分析1 μmol/L地塞米松作用不同时间以及不同浓度地塞米松作用1 h小鼠胸腺细胞Bim mRNA表达. 结果①1 μmol/L地塞米松作用4 h小鼠胸腺细胞出现特征性DNA梯状条带和细胞凋亡典型形态特征,流式细胞术检测显示在不同时间点(2 h,4 h,8 h)实验组细胞凋亡率较对照高;②1 μmol/L地塞米松作用1/2 h后小鼠胸腺细胞Bim mRNA三个异构体表达即明显升高,以BimL最为明显,其中BimL、BimEL mRNA表达在1 h达高峰,较对照组高峰前移11 h,且各时间点(0 h、24 h除外)表达水平与同时点对照组相比差异具有统计学意义(P＜0.05);BimS mRNA表达高峰较对照组提前4 h,但各时间点表达水平与同时点对照组相比差异无统计学意义(P＞0.05);③不同浓度(0,10-2,10-1,1,10 μmol/L)地塞米松作用胸腺细胞1 h时,其活细胞率和凋亡细胞百分率在不同浓度组间的差异无统计学意义,而Bim mRNA表达随地塞米松终浓度增加而升高,也以BimL mRNA表达增高最明显. 结论 Bim参与了地塞米松诱导的小鼠胸腺细胞凋亡过程,Bim三个异构体中以BimL作用为主;Bim mRNA表达发生在细胞凋亡早期,其表达水平随作用时间变化,并在一定地塞米松浓度范围内呈剂量依赖性.     

鱼金抑制乙型流感病毒诱导细胞凋亡研究

目的探讨鱼金注射液阻断乙型流感病毒诱导狗肾传代细胞（Madin-Darby canine kidney，MDCK）凋亡。方法采用瑞氏染色法光镜下观察细胞形态变化、原位末端标记术测定细胞凋亡率。结果病毒感染组MDCK细胞凋亡百分率显著高于其他组（P〈0.001）；试验组、药物对照和细胞对照组比较无差异（P〉0．05）；原位末端标记组细胞凋亡显著高于瑞氏组（P〈0．01）。结论该研究提示乙型流感病毒可诱导MDCK细胞凋亡，而鱼金能阻断乙型流感病毒诱导MDCK细胞凋亡。     

Detection of cell apoptosis by MTT assay.]

OBJECTIVE: To study the feasibility of using MTT assay to detect cell apoptosis. METHODS: K562 cells were grown in RPMI 1640 medium supplemented with 10% calf serum and 4 micromol/L arsenic trioxide. Apoptosis was induced in the cultured cells by As2O3, and the cells were detected with optical microscope, DNA gel electrophoresis and MTT staining respectively. RESULT: MTT staining could also accurately detect cell apoptosis, by which the apoptotic cells were easily distinguished from normal cells and dead cells. CONCLUSION: MTT staining is simple, convenient and practical for detecting cell apoptosis.     

己烯雌酚诱导人T细胞肿瘤Jurkat细胞系凋亡中转录因子Oct-1的表达

建立丙型肝炎病毒包膜区基因的真核表达载体,并通过对其序列分析阐明其作为基因接种的可能性。方法：经常规 ＲＴ－ＰＣＲ法从 ＨＣＶ ＲＮＡ阳性病人的血清中扩增出 ＨＣＶ Ｅ１区的基因片段,经 ＥｃｏＲ Ⅰ和Ｘｂａ Ⅰ双酶切后将其克隆到真核表达载体 ＰｃＤＮＡ３中,阳性克隆经 Ｓｍａ Ⅰ和 Ｘｂａ Ⅰ双酶切鉴定;用双脱氧终止法测序,同时利用计算机软件对其推定的氨基酸序列进行分析。结果：ＲＴ－ＰＣＲ扩增产物经酶切过夜后与经过同样双酶切的真核表达载体 ＰｃＤＮＡ３连接,阳性克隆经 Ｓｍａ Ⅰ和 Ｘｂａ Ⅰ酶切后产生了预期大小的 １４４ ｂｐ的片段。测序后其核苷酸序列与已经报道的ＨＣＶⅠ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ型的同源性分别为７２．８％、９３．２５％、６１．９６％和５６．４４％;其推定的氨基酸序列的同源性分别为 ７７． ３％、９５． ７％、５４ ６％和 ５１． ３５％;与已经报道的中国株的同源性为 ９５． ０６％和９３． ２５％;属 ＨＣＶ Ⅱ型;经计算机辅助分析表明该片段内含有４个可能的糖基化位点, ｌ个跨膜区,其氨基端为信号肽序列,在跨膜区的两端分别含有２个和１个抗原决定簇,而每一个抗原决定簇内均含有１个糖基化位点,该片段内还含有 ２个 Ｔ细胞识别位点。 结论：     

VP-16诱导前列腺癌细胞PC-3凋亡的研究

为研究ＶＰ－１６对雄激素非依赖性前列腺癌细胞ＰＣ－３凋亡的诱导作用,应用ＨＥ染色观察细胞的形态学改变,以ＤＮＡ凝胶电泳和流式细胞术（ＦＣＭ）分析细胞凋亡和细胞周期分布,同时应用３Ｈ－ＴｄＲ掺入法研究ＶＰ－１６对ＰＣ－３细胞ＤＮＡ合成的影响。结果表明,（１）凋亡的ＰＣ－３细胞呈明显的形态学改变;（２）ＤＮＡ断裂呈梯形变化;（３）ＰＣ－３细胞凋亡率随ＶＰ－１６作用浓度增加和时间延长逐渐增高;（４）ＶＰ－１６能够明显抑制ＰＣ－３细胞ＤＮＡ的合成。提示ＶＰ－１６可诱导前列腺肿瘤细胞凋亡。     

Antineoplastic mechanism of Octreotide actionin human hepatoma

Objectives To investigate whether apoptosis can be induced by Octreotide in human hepatoma cells in vitro and elucidate the antineoplastic mechanism of Octreotide in hepat oma. Methods A cultured human hepatoma cell line, BEL-7402, was exposed to Octreotide and ap optosis was evaluated by cytochemical staining (Hochesst 33 258), transmiss ion electron microscopy, agarose gel electrophoresis and flow cytometry (FCM).Results After exposure to 0.2 μg/ml Octreotide, apoptosis with nuclear chromatin cond ensation as well as fragmentation, cell shrinkage and the formation of apoptotic bodies was observed using cytochemical staining and transmission electron micros copy. A DNA ladder in agarose gel electrophoresis was also displayed. FCM show ed that the apoptotic cell number rose with an increase in the concentration of Octreotide (0-2 μg/ml). There was a positive correlation between Octreotide concentration and apoptotic rate in BEL-7402 cells (r=0.809, P&lt;0.05) .Conclusion Apoptosis in human hepatoma cells can be induced by Octreotide, which may be rel ated to the mechanism of antineoplastic action ofOctreotide in hepatoma.     

单核细胞增多型李氏忒菌诱导小鼠胸腺细胞凋亡

The murine thymocyte apoptosis induced by Listeria monocytogenes(LM) was detected with morphology, FCM, and DNA electrophoresis. The results were that LM elicited typical morphological changes of thymocyte apoptosis; the typical apoptosis peak was displayed with FCM, and typical "ladder pattern" with agarose gel electrophoresis. The apoptotic cells were found at 8 h after the mice had infected LM and reached climax at 48 h. The thymus weight significantly reduced at 16 h, and reached the lowest at 48 h after the mice had infected LM. The percentage of apoptotic cells was raised with the increasing of LM. These results suggest that LM induces thymocyte apoptosis in dose- and time-dependent manner.     

单核细胞增多型李氏忒菌诱导小鼠胸腺细胞凋亡

以流式细胞仪 (FCM)分析 ,DNA琼脂糖凝胶电泳分析及细胞形态学改变为指标 ,研究单核细胞增多型李氏忒菌 (LM)感染对小鼠胸腺细胞凋亡的诱导作用。结果发现 ,LM能诱导小鼠胸腺细胞产生典型的细胞凋亡形态学改变 ;FCM分析显示特征性的凋亡峰 ;琼脂糖凝胶电泳分析显示胸腺细胞出现典型的DNA“梯状带” ;胸腺细胞凋亡于LM(5× 10 5CFU)感染后 8h出现 ,48h达高峰 ;胸腺萎缩于LM感染后 16h出现 ,48h达最低水平 ;胸腺细胞凋亡百分率随LM感染剂量增加而增高。提示 ,LM以时间和剂量依赖方式诱导小鼠胸腺细胞凋亡。     

抗人DR5单克隆抗体(mDRA-6)对Jurkat细胞作用研究

目的:观察抗肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)的死亡受体5(DR5)单克隆抗体—mDRA-6对Jurkat细胞的凋亡作用。方法:制备抗人DR5单抗-mDRA-6;检测Jurkat细胞表面DR5表达率;荧光显微镜下观察mDRA-6作用下Jurkat细胞形态变化;MTT法计算mDRA-6对Jurkat细胞存活的影响;FITC-AnnexinⅤ及PI双染流式细胞仪检测mDRA-6对Jurkat细胞凋亡率影响;琼脂糖凝胶电泳检测mDRA-6对Jurkat细胞DNA片段化的作用。结果:Jurkat细胞表面DR5表达率为94.8%;mDRA-6使Jurkat细胞染色质边集、断裂,细胞出芽,凋亡小体形成;MTT法显示mDRA-6具有明显的Jurkat细胞杀伤作用,1.563 mg/L的mDRA-6可使Jurkat细胞死亡60.50%;AnnexinⅤ及PI双染显示0.3mg/L的mDRA-6作用10 h,Jurkat细胞凋亡率达43.22%;10 mg/L mDRA-6作用HL-60细胞3h,DNA琼脂糖凝胶电泳显示明显的“梯形”条带。结论:抗DR5单抗-mDRA-6能够诱导Jurkat细胞凋亡。     

沙眼衣原体感染细胞抗凋亡及Bim的表达

目的:研究沙眼衣原体(D血清型)感染的Hela229细胞Bim蛋白质的表达及抵抗凋亡的情况。方法:Western-blot检测沙眼衣原体感染和未感染的Hela229细胞Bim蛋白质的表达水平。凋亡诱导剂etoposide作用Hela229细胞后,琼脂糖凝胶电泳检测DNA Ladder带;流式细胞仪检测凋亡率。结果:Hela229细胞在未感染沙眼衣原体时可检测到Bim的表达;在感染24小时、48小时后均未检测到Bim的表达。经etoposide作用后,未感染的Hela229细胞检测到DNALadder带;流式细胞仪检测的凋亡率为90.64%。感染24小时的Hela229细胞,未检测到DNA Ladder带;凋亡率为11.50%,与未感染的Hela229细胞诱导后的凋亡率比较有统计学意义(P<0.05)。结论:沙眼衣原体感染的Hela229细胞Bim蛋白质的表达下降;并能抵抗etoposide诱导的细胞凋亡。