热休克胶质瘤源exosomes分离鉴定及相关蛋白组成的研究

目的验证胶质瘤细胞可分泌exosomes,探讨热休克对胶质瘤细胞分泌的exosomes产量及相关蛋白的影响,为进一步研究增强exosomes免疫活性及体外实验提供理论依据.方法采用差速离心法结合超滤及蔗糖密度梯度离心纯化得到胶质瘤细胞分泌的Exosomes和经热休克处理后胶质瘤细胞分泌exosomes(Heat shocked Exosomes,HS-Exo),电镜观察两组exosomes形态.westerrn-blot鉴定HSP70及ICAM-1表达.结果胶质瘤细胞及经热休克处理后均可分泌exosomes,直径约30-100nm,电镜形态无明显差别.经westerrn-blot检测热休克处理的细胞的HSP70及ICAM-1表达量增加,为进一步提高exosomes的免疫活性提供理论基础.     

热应激小鼠肝癌细胞(H22)源Exosomes的抗肿瘤免疫机制

 目的 制备小鼠肝癌细胞（H₂₂）源Exosomes及热应激小鼠肝癌细胞（H₂₂）源HS-Exo （heat stressed Exosomes,HS-Exo）,研究其对小鼠可能的抗肿瘤免疫机制。方法 用超速分级离心和蔗糖密度梯度离心纯化获得Exosomes及HS-Exo,透射电镜观察其形态。以Exosomes为对照,观察HS-Exo的蛋白组分、产量及其激发宿主抗肝癌免疫应答效应,用Western blot方法检测两者所含有的相关蛋白情况。用MTT法检测免疫小鼠脾细胞增殖和脾淋巴细胞的细胞毒活性。用免疫组化法检测经两者免疫后小鼠肿瘤组织中CD4+、CD8+淋巴细胞浸润情况。结果 HS-Exo与Exosomes形态相似,HS-Exo所含的重要免疫蛋白表达增加（P<0.05）,用HS-Exo免疫小鼠后比用Exosomes免疫小鼠能更有效地抑制肿瘤生长,更好地诱导淋巴细胞增殖,更显著增强小鼠脾淋巴细胞的细胞毒活性以及更明显的肿瘤治疗作用（P<0.05）。结论 热应激制备HS-Exo的方法具有可行性,HS-Exo比Exosomes具有更强的免疫活性和肿瘤治疗作用。     

K562细胞分泌的exosome的免疫电镜研究

目的:通过免疫电镜方法观察K562细胞分泌的exosome,探讨其潜在的临床应用价值. 方法:采用离心超滤和蔗糖密度梯度离心等方法分离出K562细胞释放的exosome,经透射电镜观察其超微结构. 采用固相免疫电镜法(SPIEM)制备exosome的HSP70,ICAM-1及ABL免疫电镜标本. 结果:K562细胞分泌的exosome为直径50～100 nm的膜性微囊结构,圆形或椭圆形,腔内为低电子密度成分. 经抗HSP70,ICAM-1和ABL抗体-胶体金免疫电镜标记,囊外膜及腔内可见点状﹑颗粒状电子致密物沉积. 结论:离心超滤和蔗糖密度梯度离心法纯化小量exosome方法可行,K562细胞分泌的exosome表达HSP70,ICAM-1和ABL蛋白,具备免疫原性.     

白花蛇舌草对H22肝癌细胞热休克蛋白70表达的影响

【目的】观察H22肝癌细胞热休克蛋白70(HSP70)表达及清热解毒中药白花蛇舌草对其表达的影响。【方法】以培养的H22肝癌细胞腹腔接种于小鼠使小鼠致瘤,然后将荷瘤小鼠分为模型组、白花蛇舌草组(剂量为25 g/kg)、党参对照组(剂量为25 g/kg)及热休克处理组共4组。采用免疫组化标记法检测各组活体腹水H22肝癌细胞HSP70的表达情况。【结果】白花蛇舌草组及热休克处理组H22肝癌细胞HSP70的表达显著性高于模型组(P<0.05或P<0.01);党参对照组H22肝癌细胞的HSP70表达与模型组比较无显著性差异(P>0.05)。【结论】白花蛇舌草可能通过诱导H22肝癌细胞HSP70表达,增强其免疫原性而发挥抗肿瘤作用。     

肾癌细胞来源exosome的制备和免疫相关蛋白组成的初步研究

目的:分离纯化肾癌细胞分泌的exosome,检测exosome免疫相关蛋白的组成,探讨其潜在的临床应用价值.方法:体外培养人肾癌细胞株Rc-2.用超滤和蔗糖重水密度梯度超速离心法分离纯化exosome,透射电镜观察其形态,Western blot检测其免疫相关蛋白的组成.结果:用超滤和蔗糖重水密度梯度超速离心法成功分离出exosome.透射电镜下exosome为类圆碟形,具有双层膜结构,直径30-100 nm.exosome表达肾癌特异性抗原G250、热休克蛋白70(Heat shock protein70,HsP70)和细胞间粘附分子(Intercellular Adhesion Molecule-1,ICAM-1).结论:超滤和蔗糖重水密度梯度超速离心法可以分离纯化肾癌细胞分泌的exosome,exosome表达免疫相关蛋白G250、HSP70、ICAM-l.其负载肾癌特异性抗原,具有免疫原性,可望成为治疗肾癌的新疫苗.     

热休克小鼠肝癌细胞(H_(22))源Exosomes的体内抗肝癌作用研究

目的:在荷瘤 BALB/c 小鼠观察热休克小鼠肝癌细胞(H_(22))源 Exosomes(HS-Exo) 激发宿主抗肝癌免疫应答的效应.方法:用自行分离纯化的小鼠肝癌细胞 H_(22) 源 Exosomes 及 HS-Exo 免疫小鼠,然后给小鼠皮下接种 H_(22) 肿瘤细胞,观察肿瘤的生长状况.用MTT法检测小鼠脾细胞增殖情况和细胞毒活性;用免疫组织化学法检测肿瘤组织中CD_4~+、CD_8~+T淋巴细胞浸润情况.BALB/c 小鼠皮下接种 H_(22) 细胞,肿瘤长至可触及大小后,分别注射Exosomes及HS-Exo进行治疗,观察各组肿瘤大小及其小鼠存活期.结果:与对照组 Exosomes 相比,HS-Exo 能使肿瘤出现时间延迟,肿瘤生长缓慢(P<0.05);更能促进脾淋巴细胞增殖并增强其细胞毒活性(P<0.05),能更有效的诱导 CD_4~+ 和 CD_8~+T 细胞活化(P<0.05);更为显著的抑制了小鼠的肿瘤生长(P<0.05).结论:HS-Exo 具有更强的免疫活性,能更好的诱导小鼠抗 H_(22) 肝癌作用,有针对亲本细胞的免疫保护作用,并且具有更为显著的肿瘤治疗作用.     

三氧化二砷诱导小鼠肝癌细胞H22外泌exosome及相关机制研究

目的 探讨三氧化二砷在小鼠肝癌细胞H22外泌exosome中的影响. 方法 MTT法筛选二氧化二砷的合适药物浓度;密度梯度离心和超速离心法提纯exosome,Bradford法对exosome总蛋白进行定量分析;Western blot检测影响小囊泡vesicle分泌的复合体SNARE的重要组成及凋节蛋白Syntaxin的表达;结合钙荧光探针Fura-2、荧光倒置定量显微镜测定细胞内游离钙的相对浓度.结果维持小鼠肝癌细胞H<22>90%存活48 h的药物浓度为1.25 μmmol/L;药物作用前后,细胞数为5×104ml-1的H22细胞常规培养48 h所得细胞悬液200 ml,经密度梯度离心和超速离心所得exosome的总蛋白浓度分别为(0.85±0.13)、(0.96±0.10)mg/ml,差异具有统计学意义(P<0.05);三氧化:砷作用前后,H22细胞均有Syntaxin蛋白表达,三氧化二砷处理后,其表达明显增加(P<0.05). 结论 SNARE复合体假说也适用于小鼠肝癌细胞H22的exosome外泌过程,三氧化二砷在exosome的外泌过程中有一定的促进作用.     

热休克预处理对严重烫伤大鼠胃黏膜热休克蛋白60、70及iNOS表达的影响

目的 观察热休克预处理对严重烫伤大鼠胃黏膜热休克蛋白(heat shock protein ,HSP)(HSP60、HSP70)和诱生型一氧化氮合酶(induced nitric oxidase synthase,iNOS)表达的影响,探讨热休克预处理对严重烫伤大鼠胃黏膜的保护作用机制.方法 将Wistar大鼠分为烫伤组及热休克预处理后烫伤组2个大组,观察不同处理组大鼠胃黏膜损伤指数(ulcer index,UI)变化.同时应用RT-PCR技术检测各组大鼠胃黏膜HSP70 mRNA表达,免疫组化染色分析胃黏膜组织中HSP60 、HSP70、iNOS表达变化.结果 正常大鼠严重烫伤后iNOS表达显著增强,胃黏膜损害明显,热休克预处理能显著减轻大鼠严重烫伤后急性胃黏膜损害;与烫伤组比较,经热休克预处理后再烫伤大鼠胃黏膜HSP60 和HSP70基因表达水平升高(P＜0.05),尤以HSP70为甚(P＜0.01),而iNOS表达受抑(P＜0.01).结论 热休克预处理对大鼠严重烫伤后急性胃黏膜损害具有保护作用,其保护机制可能与HSP60、70诱导表达增强及iNOS表达受抑等机制有关.     

热休克蛋白与肿瘤的关系

热休克蛋白(heatshockprotein，HSP)是广泛存在于生物界(从原核生物到真核生物)中具有高度保守性质的蛋白质，在应激状态下可以被诱导表达，故又称为应激蛋白llJ。根据同源程度及分子量大小可分为HSP110、HSP90、HSP70和HSP60、小分子HSP(22～23如)以及泛素等几个家族。热休克蛋白在细胞生长、发育、分化、基因转录等功能方面发     

小鼠S180肉瘤肿瘤模型生长规律及热休克蛋白的表达

目的：研究Balb／C小鼠S180肉瘤细胞接种后肿瘤发生及生长规律以及不同热休克蛋白(heat shock protein，HSP)在小鼠S180肉瘤细胞中的表达，为HSP的分离、纯化及免疫治疗提供可用的动物模型。方法：三组不同剂量S180肉瘤细胞(10万个、100万个、500万个)于Balb／C小鼠背部皮下接种，观察肿瘤发生率、肿瘤组织生长规律、小鼠生存时间，取部分肉瘤细胞进行热休克处理后进行免疫组化观察。结果：S180肉瘤细胞接种Balb／C小鼠的肿瘤发生率为100％，不同剂量的肿瘤生存期限差异有显著性意义，肿瘤大小无显著差异；对HSP的免疫组化观察表明：HSP60、70、90α、grp94均为阳性表达，其中HSP60、grp94强阳性，热休克处理后HSP70阳性增强，HSP90α阳性减弱。结论：Balb／C小鼠S180肉瘤为观察HSP表达及提取、纯化提供稳定的动物肿瘤模型，还可用于进行HSP疫苗治疗肿瘤的实验研究。     

经络腧穴理论的形成与发展

从<脉书·十一脉><黄帝内经>等文献人手,梳理了血气、经络、腧穴理论的形成与发展,简要介绍了四肢部的基本腧穴、躯体部要穴,以及腧穴配伍的基本要义.     

教考合一与教考分离的统一——医学基础课综合性考试模式初探

考试是检验教学效果的有效方法,是教学过程中不可缺少的环节。多年来,人们对考试改革不断进行探索,总结出不同的考试模式,例如教考合一与教考分离就是2种完全不同的考试模式。通过对比2种考试模式的优势与劣势,提出适合医学基础课的综合性考试模式。     

神经病学与神经解剖学优化整合的评价与分析

目的评价神经病学与神经解剖学优化整合教学法的教学效果,寻找存在的问题及解决对策,为今后的神经病学教学改革提供参考。方法采用问卷调查、访谈的方式,分析神经病学教改后的教学效果、对学生学习态度的影响、教学中存在的不足。结果教改班的教学效果、对学生学习态度的改善优于非教改班(P<0.01)。结论神经病学与神经解剖学优化整合的教学改革效果显著,达到了预期的目的。     

析议痰瘀同源、互结、同治

目的:探讨痰瘀相关,意在梳理痰瘀知识、并强调痰瘀相关的重要性。方法:通过多角度地分析、刍议"痰瘀同源"、"痰瘀互结"、"痰瘀同治"等痰瘀经典理论的方式论述痰瘀相关。结果:痰与瘀是中医界里重要的元素,痰与瘀互结是许多疾患共同的病机,痰瘀同治是常用治法。结论:痰瘀同源、互结、同治,不但在临床上有着实用的指导意义,又能与时俱进、在探究中创新。     

载脂蛋白的结构和功能与病毒病的预防和治疗

载脂蛋白（apo）是脂蛋白的重要组成成分,其主要功能是调节酶活性,介导细胞受体与脂蛋白结合,保持脂蛋白结构的稳定性。目前已发现数十种载脂蛋白,其结构的显著特点是分子中具有多个双性alpha螺旋及Beta-折叠结构。载脂蛋白的这种双性alpha螺旋结构是其结合及转运脂质的结构基础。在HIV外壳结构中的一种糖蛋白（gP）也具有这种alpha螺旋结构。近年研究表明,载脂蛋白和由载脂蛋白组成的脂质体还具有抗肝炎病毒、抗HIV病毒、抗单纯疱疹和中和细菌内毒素的功能。以脂蛋白和载脂蛋白为主要成分构成的脂质体已成为运载抗病毒和抗肿瘤药物受体的靶向性载体。     

新生儿游泳对生长发育的影响研究

目的:探讨新生儿游泳的护理以及对生长发育的影响。方法:按照知情同意制度,选取125例实施游泳的新生儿为观察组,随机选取同期未游泳的新生儿为对照组(125例)。观察两组新生儿出生后42d头围、生长和体重的变化,比较两组生后7d、15d和28d的24h摄乳量。结果:42d后游泳组的婴儿头围、生长、体重增长明显,特别是体重增幅较大,两组统计学有明显差异;游泳组摄乳量从第7天开始均高于对照组,出生后28d更是明显增多,有显著统计学意义。结论:游泳有利于新生儿增加摄乳量,促进新生儿体格发育。     

“医信融创”教育模式的构建与实践探索

从必要性、要求及实质3个角度梳理了“医信融创”教育的内涵,并在此基础上探索“医信融创”教育的模式。“医信融创”需要遵循由“融”到“创”的逻辑主线,通过“融行-融智-融心”的过程最后走向“创新”的目的。最后以山西医科大学的实践案例证明了“医信融创”教育的必然性和可行性。     

肾膀胱病证诊治说略

介绍了肾膀胱的生理功能，叙述了中医学上3种肾膀胱病证水肿、淋证、关格的病因病机症状以及作者在临床上的治疗经验，并各附验案以供临床参考。     

卵巢子宫内膜样癌的CT、MRI诊断与病理分析

目的：探讨卵巢子宫内膜样癌（OEC）的CT、MRI表现及病理基础。方法：回顾性分析经手术病理证实的8例OEC的CT、MRI表现,并与手术和组织病理学结果进行对照分析。结果：8例OEC位于左侧5例,右侧3例。肿瘤最大径4．5～17．5cm,平均9．2cm。全部肿瘤均呈囊实性,6例形态不规则呈分叶状,2例呈圆形或卵圆形。肿瘤边界部分模糊7例,清楚1例。CT平扫：肿瘤实性成分cT值37～46Hu,平均4lHu,囊性成分cT值14～40Hu,平均25Hu;增强后肿瘤实性成分呈中等程度强化,动脉期cT值6l～77HIJ,平均66Hu,实质期cT值65～78HU,平均71HU。MR平扫：T2wI实性成分呈等信号,囊性成分呈低信号,T2wI实性成分呈稍高信号,囊性成分呈高信号,增强后肿瘤实性成分中等程度强化。8例OEC中合并子宫体内膜癌2例,其中l例经MRI检查,表现为子宫体部内膜不规则增厚,T2wI呈等信号,TnwI呈稍高信号,增强后呈中等程度强化,1例合并同侧卵巢巧克力囊肿。结论：CT、MRI能较好地反映OEC的病理特征,清晰显示肿瘤的形态、内部结构及邻近结构侵犯等情况,具有重要的定性价值,并为临床选择合理治疗方案提供依据。