醒脑静注射液对急性脑梗死血瘀证患者外周血单个核细胞T－bet／GATA－3平衡的影响

目的：探讨醒脑静注射液对急性脑梗死（ ACI）血瘀证患者外周血单个核细胞（ PBMC）） T－bet／GA-TA－3平衡的影响。方法70例患者分为观察组及对照组，每组35例。对照组用常规治疗，观察组在常规治疗基础上加醒脑静注射液。疗程均为14 d，观察两组患者治疗前后用改良Barthel指数（ MBI），检测治疗前及治疗后PBMC T－bet和GATA－3 mRNA的表达。结果两组治疗前T－bet mRNA、GATA－3 mRNA和MBI比较差异无统计学意义（P＞0.05）；治疗14 d后两组患者MBI与治疗前比较，差异均有统计学意义（P＜0.05）。观察组患者T－bet、T－bet／GATA－3在治疗后14 d均明显低于对照组（P＜0.05），GATA－3以及MBI明显高于对照组（P＜0.05，P＜0.01）。结论醒脑静注射液明显调控ACI血瘀证患者T－bet／GATA－3平衡，对日常生活能力具有较好的改善作用。     

慢性乙型肝炎患者PBMCs中ROG、GATA3和T-bet mRNA水平及其意义

目的探讨慢性乙型肝炎患者外周血单个核细胞（PBMC）中转录因子ROG、GATA3和T-bet mRNA水平变化及意义。方
法收集135例慢性乙型肝炎患者（轻度45例、中度42例、重度48例）和15例健康志愿者（正常对照组）的外周血,分离单个核细
胞,提取总RNA,用实时定量PCR的方法检测ROG、GATA3和T-bet mRNA水平。应用SPSS16.0软件进行统计分析。结果慢
性乙型肝炎轻度、中度组和重度组患者外周血PBMCs中T-bet mRNA表达水平均明显高于健康对照组人群,组内比较差异均具
有统计学意义（P<0.05）。慢性乙型肝炎重度组患者外周血PBMCs中ROG mRNA表达水平明显高于健康对照组人群、轻度组
和中度组患者,差异均有统计学意义（P<0.05）。而轻度组、中度组患者和健康对照组比较差异均无统计学意义（P>0.05）。慢性
乙型肝炎中度组和重度组患者外周血PBMCs中GATA3 mRNA表达水平明显高于健康对照组人群和轻度组患者,差异均具有
统计学意义（P<0.05）;而轻度组和健康对照、中度组患者和重度组比较差异均无统计学意义（P>0.05）。慢性乙型肝炎轻度、中
度组和重度组患者T-bet/GATA3比值明显高于健康对照组人群,差异均具有统计学意义（P<0.05）;但3组之间比较差异无统计
学意义（P>0.05）。ROG表达水平与GATA3和T-bet/GATA3比值均无相关性（P>0.05）。结论ROG、GATA3和T-bet 在慢性乙
型肝炎患者外周血PBMCs中表达水平上调,并参与疾病的发生和疾病进展。ROG在纠正和维持Th1/Th2的新平衡状态过程中
起重要作用。
     

大鼠肺纤维化转录因子T—bet／GATA3的表达及其与相关细胞因子的关系

目的探讨大鼠肺纤维化时转录因子T—bet／GATA3的表达及与细胞因子IFN-γ、IL-12、IL-4的相关性。方法腹腔注射博莱霉素（BLM）制作大鼠肺纤维化动物模型。将40只雄性SD大鼠随机均分为对照组、BLM1周组（BLM1组）、BLM2周组（BLM2）及BLM4周组（BLM4组）。病理半定量评估各组大鼠肺组织纤维化的程度,并检测其外周血单个核细胞转录因子T—bet／GATA3mRNA的表达及血清细胞因子IFN—γ、IL-12、1L-4的含量。结果（1）BLM1组肺组织病理改变以肺泡炎为主,BLM2组兼有肺泡炎和纤维化病变,BLM4组以肺纤维化为主。病理半定量分析BLM1组与BLM4组差异有统计学意义（P〈0.01）,BLM2组与BLM1组及BLM4组比较亦有统计学意义（均P〈0.05）。（2）半定量RT—PCR法显示各BLM组大鼠T—bet基因的表达均低于对照组而GATA3基因的表达则高于对照组（均P〈0.01）。（3）各BLM组血清IFN—γ及IL-12含量均显著低于对照组而IL-4含量均高于对照组（均P〈0．01）。结论BLM致大鼠肺纤维化时血清IFN—γ及IL-12含量下降,IL-4含量升高,呈Th2细胞因子优势型变化。BLM致大鼠肺纤维化时转录因子T—bet表达减少,GATA3表达增加,T—bet／GATA3的改变参与了Th1/Th2的失衡,与肺纤维化的发生有关。     

系统性红斑狼疮患者Th1／Th2相关转录因子的基因表达

目的：探讨转录因子对T细胞分化的影响及它们和细胞因子在系统性红斑狼疮（SEE）发病机制中的作用。方法：利用实时荧光定量PCR技术检测SLE患者、正常人外周血单核细胞（PBMC）中T—bet和GATA-3 mRNA表达状况;用ELISA检测SLE患者、正常人血清中IL-10和TGF-β水平。结果：SLE患者T—bet mRNA表达低于正常人,差异具有显著性（P〈0．05）;SLE患者GATA-3mRNA表达明显高于正常人,具有统计学差异（P〈0．05）。SLE患者IL-10明显高于正常人,差异具有统计学意义（P〈0．05）;SLE患者TGF-8与正常人差异无统计学意义（P〉0．05）。结论：SLE患者Th1／Th2免疫不平衡占优势,调节Th1细胞的转录因子T—bet表达降低。调节Th2细胞的转录因子GATA-3表达升高,细胞因子IL-10水平升高,TGF—β没有明显变化。     

变应性鼻炎患者外周血T—bet及CD19／CD23对标准化变应原体内刺激的反应

目的探讨变应性鼻炎（allergic rhinitis,AR）患者经体内螨变应原刺激后T-bet和CD19／CD23的变化。方法采取15例健康人和60例接受标准化螨变应原疫苗的体内特异性免疫治疗（SIT）达1年的AR患者外周血,用逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）分析SIT前后1年外周血单核细胞（PBMC）中的T—bet mRNA表达变化情况。另外用流式细胞术（FCM）检测患者CD19／CD23水平SIT前后1年变化情况。结果24例AR患者SIT前后PBMC中T—bet表达水平分别为（0．44±0．14）和（0．49±0．09）,差异有统计学意义（t=2．324,P〈0．05）。在对照组,该比值为（0．59±0．09）,显著高于AR患者（P〈0．01）。对照组和AR组CD19／CD23水平分别是（5．99±2．44）％和（13．53±5．41）％,P〈0．05。42例单纯AR患者和合并有哮喘的18例AR患者的T—bet表达水平分别是（0．49±0．12）和（0．33±0．09）,两组CD19／CD23水平分别是（12．32±5．71）％和（16．34±3．32）％,t值分别为5．411和3．407,P均〈0．01;T—bet与CD23存在负相关（r=-0．260,P〈0．05）。经SIT后,CD23水平显著下降（t=2．334,P〈0．05）。经SIT后,T—betmRNA表达显著上调（t=-2．324,P〈0．05）。结论T—bet在AR患者PBMC中的表达均下调;AR患者经SIT后,可以看到T—bet表达的上调和CD23水平的下降。T—bet对变应原体外反应低下,而对体内小剂量变应原刺激产生保护性的Th1型免疫反应。对变应性鼻炎SIT机理的新认识认为,转录因子水平是通过Th1优势来纠正Th1／Th2失衡,而这种方式是以Th1型特异性相关转录因子的上调表达介导的。     

PD －1／PD －L1在自身免疫性肝炎患者外周血T 淋巴细胞中的表达及意义

目的：探讨自身免疫性肝炎（AIH）患者外周血T淋巴细胞表面程序性死亡因子－1（PD－1）／程序性死亡因子配体－1（PD－L1）的表达及其临床意义。方法流式细胞术分析31例AIH患者及18例健康对照者外周血CD4＋和CD8＋T淋巴细胞表面PD－1和PD－L1的表达率,并检测其中24例活动期AIH患者经临床治疗4、12周后PD－1／PD－L1的表达。结果 AIH患者外周血CD4＋及CD8＋T淋巴细胞表面PD－1的表达率分别是（18.3±8.5）％和（13.0±9.0）％,PD－L1的表达率分别是（24.5±12.3）％和（11.2±7.0）％,显著高于健康对照者（P＜0.01）;不同性别及不同分组间比较差异无统计学意义（P＞0.05）;对24例活动期AIH患者接受临床治疗4、12周,T淋巴细胞表面PD－1／PD－L1的表达率均有所降低,但与治疗前比较差异无统计学意义（ P＞0.05）;PD－1＋／CD4＋表达率与碱性磷酸酶水平呈负相关（r＝－0.48,P＜0.05）,PD－1＋／CD8＋表达率与ALT、AST水平均呈正相关（r＝0.42,P＜0.05;r＝0.41,P＜0.05）,与其余临床指标无显著相关性。结论 AIH患者外周血PD－1／PD－L1共刺激分子表达存在异常,与病情活动及临床治疗存在一定程度的相关性,但尚不能成为判断疾病发展及预后的分子靶标。     

Tim3在再生障碍性贫血和骨髓增生异常综合征鉴别诊断中的意义

目的：探究T细胞免疫球蛋白黏液素（T cell immunoglobulin and mucin,Tim）3在再生障碍性贫血（aplastic anemia,AA）和骨髓增生异常综合征（myelodysplastic syndrome,MDS）鉴别诊断中的意义。方法：流式细胞术检测24例AA患者、20例MDS患者和17例健康对照者外周血单个核细胞（peripheral blood mononuclear cells,PBMC）中CD4+Tim1+和CD4+Tim3+细胞比例。实时荧光定量PCR检测AA、MDS患者和健康对照者PBMC中Tim3 mRNA和S型凝集素半乳糖凝集素9（galectin?9,Gal?9）mRNA表达水平。结果：健康对照者、AA和MDS患者PBMC中CD4+Tim1+细胞比例差异无统计学意义;MDS患者的CD4+Tim3+细胞比例明显高于AA患者和健康对照者（P < 0.05）;高危组MDS患者CD4+Tim3+细胞比例明显高于低中危组MDS患者（P < 0.01）和健康对照者（P < 0.05）;健康对照者、AA和MDS患者的Tim3 mRNA和Gal?9 mRNA水平差异无统计学意义。结论：MDS患者Tim3表达水平明显高于AA患者,并与疾病危险度有关,提示Tim3可能参与MDS的发病,并可能成为临床鉴别AA与MDS的标志物。     

慢性乙型肝炎病毒感染者外周血单个核细胞中T-bet、GATA3和FoxP3 mRNA的表达及其意义

摘 要］ 目的：检测慢性乙型肝炎病毒感染者外周血单个核细胞(PBMCs)中T-bet、GATA3和FoxP3 mRNA的表达水平,探讨其对慢性HBV感染者病情转归的影响。方法：选择86例住院患者,根据慢性乙型肝炎防治指南诊断标准,共分为4组,包括慢性乙型肝炎（CHB）中度组患者33例、CHB重度组患者21例、重型肝炎组患者16例和乙型肝炎肝硬化组患者16例,另选取健康者10名作为对照组。采用RT-PCR法检测外周血单个核细胞T-bet、GATA3和FoxP3 mRNA的表达水平。结果：CHB中度、CHB重度、重型肝炎、肝硬化组患者和对照组研究对象PBMCs中T-bet的表达水平分别为0.597±0.094、0.724±0.071、0.860±0.060、0.528±0.059和0.514±0.071;CHB重度及重型肝炎组患者T-bet表达水平均高于对照组（P<0.05）;CHB中度组患者T-bet表达水平低于CHB重度组患者（P<0.05）;CHB重度组患者T-bet表达水平低于重型肝炎组患者（P<0.05）。CHB中度、CHB重度、重型肝炎、肝硬化组患者和对照组GATA3的表达水平分别为0.966±0.037、0.973±0.021、0.725±0.028、0.759±0.037和0.535±0.028;各组患者GATA3表达水平均高于对照组（P<0.05）;重型肝炎组患者GATA3表达水平低于CHB中、重度组患者（P<0.05）。CHB中度、CHB重度、重型肝炎、肝硬化组患者和对照组FoxP3的表达水平分别为0.935±0.034、0.919±0.047、0.804±0.021、0.984±0.060和0.772±0.083,除重型肝炎组患者外其他各组患者FoxP3表达水平均较对照组显著升高（P<0.05）;重型肝炎组患者FoxP3表达水平低于其他各组（P<0.05）。CHB中度、CHB重度、重型肝炎、肝硬化组患者和健康对照组T-bet/GATA3的表达分别为0.618±0.100、0.744±0.072、1.187±0.082、0.697±0.078和0.963±0.133,各组比值与健康对照组比较差异均有统计学意义（P<0.05）,CHB中度组患者T-bet/GATA3比值低于CHB重度组和重型肝炎组（P<0.05）;重型肝炎组患者T-bet/GATA3比值高于其他各组（P<0.05）。结论：随着肝病炎症的加剧,T-bet与GATA3的表达呈反方向变化,慢性HBV感染患者T-bet/GATA3比值与 FoxP3 mRNA表达呈显著负相关关系。     

凋亡相关蛋白 PDCD5在 Graves′病患者中的表达

目的：通过检测凋亡相关蛋白 PDCD5在 Graves′病（GD）患者外周血单个核细胞（PBMC）中的表达情况,探讨程序性死亡因子5（PDCD5）与 GD 发生发展之间的关系。方法采用 Western blot 方法测定50例 GD患者和30例健康对照者 PBMC 中 PDCD5的蛋白表达。结果与健康对照者比较,PDCD5蛋白在 GD 患者 PBMC中的阳性表达率和表达水平均升高,其中 PDCD5的表达水平差异有统计学意义（P ＜0．05）,且 GD 患者高 T3水平（T3≥4 ng／mL）者 PDCD5蛋白的表达显著高于低 T3水平（T3＜4 ng ／mL）者（P ＜0．05）。结论PDCD5在 GD 患者 PBMC 中表达升高,并且随着病情加重表达逐渐增加,提示 PDCD5可能与 GD 淋巴细胞凋亡异常有关,参与了GD 的发病过程。     

Th1、Th2、Th17 细胞变化及环境因素与习惯性流产的关系研究

目的 探讨Th1、Th2和Th17细胞的变化、转录因子T-bet、GATA-3和STAT-3 mRNA的表达及环境因素与习惯性流产的关系.方法 选取2011年6月～2012年9月河南省开封市妇产医院就诊的50例习惯性流产非孕期患者作为病例组（HA组）,同期某社区50例正常非孕妇女为健康对照组（NNP组）,分别抽取抗凝静脉血5 mL,应用聚多糖密度梯度离心法分离外周血单个核细胞（PBMC）,采用流式细胞仪检测三种亚群细胞的比例,酶联免疫吸附法（ELISA）检测IFN-γ、IL-4和IL-17的含量,实时荧光定量PCR检测T-bet 、GATA-3和STAT-3 mRNA的表达.同时进行环境因素问卷调查,比较两组各环境因素的差异.结果 ①HA组患者Th1、Th17细胞百分比[（11.66±3.45）％、（3.65±0.75）％]均明显高于NNP组[（7.05±1.83）％、（0.72±0.11）％],差异有统计学意义（P＜0.05）,Th2细胞的百分比[（1.15±0.33）％]低于NNP组[（3.59±0.62）％],差异有统计学意义（P＜0.05）.②HA组IFN-γ和IL-17在的含量分别为（1163.27±45.25）μg/L和（162.26±25.28）μg/L,明显高于NNP组[（736.25±44.32）、（57.45±11.26） μg/L],差异有统计学意义（P＜0.05）,而IL-4的含量[（118.45±26.75） μg/L]低于NNP组[（220.45±24.63）μg/L],差异有统计学意义（P＜0.05）.③与NNP组比较,HA组T-bet和STAT-3 mRNA表达均明显升高,而GATA-3 mRNA的表达明显降低,差异均有统计学意义（均P＜ 0.05）.④HA组BMI≥24.0 kg/m2者所占比例为58％,明显高于NNP组（28％）,差异有统计学意义（P＜0.05）.结论 习惯性流产患者IFN-γ、IL-17的水平较高,而IL-4的水平较低,提示习惯性流产患者体内存在T细胞亚群分化失衡,且此种失衡可能与转录因子T-bet、GATA-3和STAT-3 mRNA的调控有关,同时肥胖可增加习惯性流产发生的可能性.     

转录因子GATA3对变应性鼻炎大鼠白细胞介素4和白细胞介素5的调控作用

目的探讨转录因子GATA3对变应性鼻炎大鼠白细胞介素4和白细胞介素5的调控作用。方珐取Wistar大鼠32只。随机平均分为A组（对照组）和B组（实验组），B组采用卵清蛋白、氢氧化铝建立大鼠AR模型。通过免疫组化和酶联免疫吸附试验，第30天取鼻腔灌洗液测定白细胞介素4和白细胞介素5浓度；黏膜切片观察鼻腔组织病理学改变及转录因子GATA3的表达。结果B组大鼠鼻腔灌洗液中IL-4、IL-5水平分别为（90．5±18．8）pg／mL和（59．6±11．4）pg／mL，明显高于A组（3．8±1．5）pg／mL、（10．8±2．0）pg／mL，差异具有统计学意义（P值均〈0．01）。B组大鼠鼻腔黏膜充血、水肿，黏膜层增厚，并有嗜酸细胞为主的炎性细胞浸润。免疫组织化学显示，B组鼻腔黏膜中GATA3表达增加，且与细胞因子IL-4、IL-5水平之间存在相关性。结论变应性鼻炎大鼠鼻黏膜GATA3表达增高与IL-4、IL-5上调有关。     

NLRP3炎性体相关分子表达与老年2型糖尿病的关系

目的研究核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3（NLRP3）炎性体相关分子表达与老年2型糖尿病（T2DM）的关系。方法采用ELISA法测定30例老年T2DM患者、30例健康体检者（对照组）血浆中IL-1β、IL-18和IL-37水平,分别采用定量聚合酶链反应（PCR）技术和ELISA技术检测糖尿病患者单核细胞来源的巨噬细胞（MDM）表达NLPR3、凋亡相关斑点样蛋白（ASC）和IL-1βmRNA水平及葡萄糖诱导MDM分泌IL-1β和TNF-琢的水平。结果老年T2DM患者血浆中的IL-1β和IL-18水平均显著高于对照组,差异均有统计学意义（均P＜0.05）;而IL-37无统计学差异;T2DM患者MDM中NLPR3、ASC和IL-1βmRNA表达水平均显著高于对照组,差异均有统计学意义（均P＜0.05）;且经葡萄糖刺激后IL-1β、TNF-琢水平显著高于对照组,差异有统计学意义（均P＜0.05）。结论NLRP3炎性体相关分子的表达与炎性体活化可能参与老年T2DM的炎症反应过程。     

程序性死亡因子5在Graves病和桥本甲状腺炎中表达的初步研究

目的探讨促凋亡基因PDCD5 mRNA在初诊Graves病（GD）和桥本甲状腺炎（HT）患者外周血单个核细胞（PBMC）中的表达。方法半定量RT-PCR法测定50例GD和30例HT患者PBMC中PDCD5 mRNA表达的阳性率和表达水平。结果GD和HT患者PBMC中PDCD5 mRNA表达的阳性率和表达水平均高于正常对照组,其中HT患者PDCD5 mRNA表达的阳性率显著高于正常对照组（P〈0.05）,GD、HT、正常对照三组间PDCD5 mRNA表达水平差异有统计学意义（P〈0.01）,HT组PDCD5 mRNA表达水平显著高于GD组（P〈0.01）。患者PDCD5 mRNA表达水平与甲状腺微粒体抗体（TM-Ab）、甲状腺球蛋白抗体（TG-Ab）呈显著正相关（P〈0.01）,与血清T4水平及｜lgTSH｜呈显著负相关（P〈0.05）。结论PDCD5 mRNA在GD和HT患者PBMC中表达升高,可能与GD和HT淋巴细胞凋亡异常有关。     

GATA3在乳腺癌组织中的表达及其临床意义

目的 检测转录因子GATA3在乳腺癌组织中的表达情况,分析其在不同乳腺癌分子亚型中的意义.方法 应用免疫组化Maxvision法检测2015年1月至2017年3月安庆市立医院手术切除的60例原发性乳腺癌、15例乳腺腺病和9例转移性或浸润性乳腺癌病理标本中GATA3的表达水平,分析其与乳腺癌分子分型、临床病理特征以及预后的关系.结果 GATA3在乳腺腺病的腺腔中100％ (15/15)表达,在原发性乳腺癌组织中的阳性率为76.67％ (40/60),在Luminal A型、Luminal B型、Her-2过表达型和三阴型4个分子亚型中,三阴型乳腺癌的表达率仅为0.071％ (1/14),低于其他3种分子亚型,差异有统计学意义(P＜0.05).在原发性乳腺癌中,GATA3表达与乳腺癌患者的年龄、淋巴结转移、肿瘤的大小无关(P＞0.05),与乳腺癌分子分型有关(P＜0.05).结论 GATA3在乳腺癌中高表达,但在三阴型乳腺癌中低表达.     

乙肝患者外周血单个核细胞FOXP3 mRNA表达检测方法的建立及应用

目的:比较乙肝患者与健康人外周血单个核细胞(PBMC)中 FOXP3 mRNA表达水平差异. 方法:利用实时荧光定量RT-PCR的方法检测25例慢性乙肝患者以及11名健康人PBMC中FOXP3 mRNA的水平. 结果:乙肝患者PBMC中FOXP3 mRNA的表达水平高于健康对照组,差异具有统计学意义(P＜0.01),且与血清中的病毒含量呈正相关(r=0.70,P＜0.01),而与谷丙转氨酶(ALT)水平无关(r=0.06,P＞0.05). 结论:慢性乙肝患者FOXP3表达水平可能是HBV感染持续的一个因素.     

肝硬化患者血清中基质金属蛋白酶-3、 基质金属蛋白组织抑制因子-1 水平与肝硬化进程的研 究简

目的 探讨肝硬化患者血清中的基质金属蛋白酶-3（MMP-3）和基质金属蛋白组织抑制因子-1 （TIMP-1）值对于肝硬化进程的影响.方法 分析台州恩泽医疗集团路桥医院2011年1月～2012年6月收治的30例乙型肝炎后肝硬化代偿期患者（代偿组）及30例失代偿期患者（失代偿组）的临床资料,30名健康者作为正常对照组.采用BAS-ELISA法测定MMP-3的血清含量,同时采用ELISA双抗体夹心法测定TIMP-3的浓度;计算TIMP-1/MMP-3的比值.对比两组患者的MMP-3、TIMP-1的临床指标的异同.结果 ①代偿组患者血清MMP-3水平[（20.32±3.10） ng/mL]显著高于正常对照组血清MMP-3水平[（17.45±2.30）ng/mL],差异有统计学意义（P＜ 0.05）;代偿组患者血清TIMP-1水平[（1.72±0.40）ng/mL]显著高于正常对照组[（1.49±0.30）ng/mL],差异有统计学意义（P＜0.05）;代偿组TIMP-1/MMP-3值为（0.088±0.010）,比正常对照组TIMP-1/MMP-3值（0.086±0.010）有所升高,但差异无统计学意义（P＞0.05）.②失代偿组患者血清MMP-3水平[（22.73±5.20）ng/mL]显著高于正常对照组[（17.45±2.30）ng/mL],差异有统计学意义（P＜0.05）;失代偿组患者血清TIMP-1水平[（2.24±0.30）ng/mL]显著高于正常对照组[（1.49±0.30）ng/mL],差异有统计学意义（P＜0.05）;失代偿组患者TIMP-1/MMP-3值为（0.103±0.020）,显著高于正常对照组（0.086±0.010）,差异有统计学意义（P＜0.05）.③失代偿组患者血清中MMP-3水平显著高于代偿组患者,差异有统计学意义（P＜0.05）;失代偿组患者血清TIMP-1水平显著高于代偿组患者,差异有统计学意义（P＜0.05）;失代偿组患者TIMP-1/MMP-3值显著高于代偿组患者,差异有统计学意义（P＜ 0.05）.结论 代偿期肝硬化患者MMP-3以及TIMP-1皆显著升高,TIMP-1/MMP-3比值有升高趋势.失代偿期肝硬化患者MMP-3以及TIMP-1皆显著升高,TIMP-1/MMP-3比值显著升高.MMP-3/TIMP-1的比值与TIMP-1的表达与肝硬化程度有关.     

抗病毒治疗对慢性 HBV 感染者外周血中 PD －1和PD －L1的影响及其与血清 HBV －DNA 的关系

目的：探讨两种给药方案对慢性HBV感染者外周血中T淋巴细胞表面PD－1及其主要配体PD－L1的影响,以及其与血清HBV－DNA的关系。方法71例慢性HBV感染者按HBV－DNA载量不同分为＜3 lgIU／mL、3～6 lgIU／mL和＞6 lgIU／mL 3组,进入疗程后按照给药不同分为：拉米夫定组（LAM组）23例,拉米夫定＋阿德福韦酯联合治疗组（LAM＋ADV组）48例,分别于治疗的0、12和24周时,采用流式细胞仪检测患者外周血中CD4＋和CD8＋T细胞表面PD－1、PD－L1的表达,ELISA法检测外周血中γ－干扰素（ IFN－γ）的表达,同时检测HBV－DNA、肝功能、HBV血清学标志物等,并设立正常对照组26例。结果不同HBV－DNA载量患者的外周血中CD4＋和CD8＋T细胞表面PD－1、PD－L1的表达均明显高于正常对照组（ P＜0．05）,且与HBV－DNA载量呈正相关（P＜0．05）,而IFN－γ水平均明显低于正常对照组（P＜0．05）;抗病毒治疗后,两种治疗方案组患者的PD－1、PD－L1表达均有明显下降,除LAM组的CD4＋PD－L1＋外其他CD4＋和CD8＋T细胞表面的PD－1、PD－L1在治疗前与治疗12周和治疗24周均差异有统计学意义（ P＜0．05）,其中LAM＋ADV组在降低的速度和幅度上均明显优于LAM组（P＜0．05）;IFN－γ的表达逐渐升高,至治疗24周时升至（24．55±5．81）pg／mL,明显高于治疗前（13．97±4．13）pg／mL（P＜0．05）,但两治疗组间差异无统计学意义（P＞0．05）。结论慢性乙型肝炎患者外周血中CD4＋和CD8＋T细胞表面PD－1、PD－L1的表达与HBV－DNA载量呈正相关,抑制HBV的复制可以有效地降低负性调控因子PD－1、PD－L1的表达;LAM＋ADV联合治疗方案对PD－1、PD－L1降低的速度和幅度明显优于LAM的单一用药,更易提高T淋巴细胞的活性。     

毛蕊异黄酮对膀胱癌细胞凋亡和 PI3K/Akt 信号通路的影响

目的：探讨毛蕊异黄酮对膀胱癌细胞增殖、凋亡及 PI3K／Akt 信号通路的影响。方法采用0、30、60、120μmol／L 毛蕊异黄酮处理膀胱癌 T24、T739细胞,采用 MTT 法检测此两种细胞接受上述浓度处理0、24、48和72 h 后的细胞增殖情况,流式细胞术检测此两种细胞各浓度处理48 h 的细胞凋亡率,Hoechst 33258荧光染色法检测 T24细胞各浓度处理48 h 的细胞凋亡情况,Real －time PCR 检测 T24细胞各浓度处理48 h 的 Bax 的 mRNA 表达水平,Western blot 法检测 T24细胞各浓度处理48 h 的 Akt 及其磷酸化形式 p －Akt 的蛋白水平和 Bax 蛋白水平。结果毛蕊异黄酮抑制膀胱癌 T24、T739细胞增殖,并呈剂量和时间依赖性（P ＜0.05）,对 T24细胞的抑制增殖效应比 T739明显（P ＜0.05）;0、30、60、120μmol／L 毛蕊异黄酮作用48 h 后 T24细胞凋亡率分别为（2.89±1.11）％、（4.11±1.05）％、（16.92±2.67）％、（27.54±2.43）％,而 T739细胞凋亡率分别为（3.05±1.42）％、（3.99±1.52）％、（13.01±2.68）％、（19.99±3.31）％,与0μmol／L 浓度处理比较,60、120μmol／L 处理后明显升高,差异有统计学意义（P ＜0.05）,而且毛蕊异黄酮对 T24细胞的促凋亡效应比 T739细胞明显（P ＜0.05）;Ho－echst 33258荧光染色法显示随药物浓度增高,T24细胞凋亡明显增多;Real －time PCR 结果显示 T24细胞中 Bax的 mRNA 表达水平在60、120μmol ／L 处理后均明显高于0μmol／L 浓度时的表达水平（P ＜0.05）。 Western blot 法检测的 Bax 蛋白表达水平则在30、60、120μmol ／L 处理后高于0μmol ／L 浓度时的表达水平（P ＜0.05）,p －Akt／Akt 值则降低（P ＜0.05）。结论毛蕊异黄酮能抑制膀胱癌 T24细胞增殖并诱导其凋亡,其机制可能通过抑制PI3K／Akt 通路激活进而促进 Bax 表达实现。     

肝硬化和肝癌患者外周血淋巴细胞中肿瘤抑制因子 EGR －1、PTEN 的表达

目的：探讨肝硬化和肝癌患者外周血淋巴细胞中肿瘤抑制因子早期生长反应因子1（ EGR－1）、同源性磷酸酶－张力蛋白（ PTEN）的mRNA表达水平对肝硬化、肝癌诊断和鉴别诊断的价值。方法选择收治的诊断为肝癌和肝硬化的住院患者,采用实时定量反转录－聚合酶链反应（ RT－qPCR）检测患者外周血淋巴细胞中EGR－1、PTEN的mRNA表达水平;以门诊的健康体检者作为健康对照组。结果纳入患者肝癌20例（肝癌组）,肝硬化22例（肝硬化组）,健康对照者34例（健康对照组）。肝癌组EGR－1 mRNA表达明显低于健康对照组（△Ct：8.31±2.39 vs 9.61±1.60,P＝0.018）和肝硬化组（△Ct：8.31±2.39 vs 9.68±1.81,P＝0.022）,而肝硬化组和健康对照组EGR－1的mRNA表达水平差异无统计学意义（P＝0.890）;3组PTEN的mRNA表达水平比较差异均无统计学意义（ P＞0.05）。结论肝癌患者外周血淋巴细胞中EGR－1的mRNA表达水平降低,可能成为肝癌与肝硬化鉴别的辅助参考指标。     

转录因子T-bet/GATA3与过敏性哮喘免疫失衡的初步研究

目的探讨转录因子T-bet/GATA3在过敏性哮喘患者免疫失衡中的作用。方法通过实时荧光定量PCR检测47例过敏性哮喘患者外周血单个核细胞（PBMC）中T-bet/GATA3 mRNA表达情况,用流式细胞仪检测其Th1、Th2细胞数量,以20名健康者为对照。结果过敏性哮喘患者外周血淋巴细胞转录因子T-bet mRNA表达水平低于正常对照组,且Ⅲ、Ⅳ级低于Ⅰ、Ⅱ级哮喘患者（P〈0.05）;转录因子GATA-3 mRNA表达水平高于正常对照组,以Ⅲ、Ⅳ级更高（P〈0.05）。过敏性哮喘患者外周血淋巴细胞亚群Th1百分率低于正常对照组,其中Ⅲ、Ⅳ级低于Ⅰ、Ⅱ级哮喘患者（P〈0.05）;Th2细胞百分率显著高于正常对照组,Ⅲ级中度持续组与Ⅳ级重度持续组各哮喘组均显著高于Ⅰ级间歇发作组和Ⅱ级轻度持续组（P〈0.05）。T-bet/GATA3与Th1/Th2结果一致。结论过敏性哮喘患者T-bet/GATA3 mRNA表达水平与Th1/Th2比例变化一致,似乎可以成为判断其细胞免疫能力的新指标。