靶向SDF-1通过调控肿瘤相关巨噬细胞亚型增强结直肠癌化疗敏感性的作用

探究靶向基质细胞衍生因子-1（SDF-1）调控肿瘤相关巨噬细胞（TAMs）亚型转化增强结直肠癌（CRC）化疗敏感性的作用。方法 使用PMA和IL-4体外诱导THP-1细胞为TAMs细胞,流式细胞仪检测M1/M2型特异表面标志物CD86和CD206表达;使用5 μg/mL SDF-1抑制剂AMD3100处理TAMs细胞24 h,实时荧光定量PCR（qRT-PCR）和蛋白质免疫印迹（Western blot）检测SDF-1表达,qRT-PCR检测iNOS、TNF-α、TGF-β及Arg-1表达;建立人结直肠癌细胞LoVo和TAMs细胞共培养体系,并使用不同浓度0、0.5、5、50、500 μmol/L奥沙利铂处理LoVo细胞,具体分组包括空白对照组、奥沙利铂组、TAMs+奥沙利铂组、AMD3100+TAMs+奥沙利铂组,CCK-8法检测LoVo细胞存活率;构建动物结直肠癌移植瘤模型,待肿瘤长出后选择肿瘤大小为100 mm3的12只裸鼠,按随机数字表法分为对照组、奥沙利铂组、AMD3100+奥沙利铂组,每组4只,奥沙利铂组腹腔注射8 mg/kg奥沙利铂,AMD3100+奥沙利铂组腹腔注射5 mg/kg SDF-1抑制剂AMD3100和8 mg/kg奥沙利铂,对照组注射等体积生理盐水,每日一次,持续18 d,首次给药后的第0、3、6、9、12、15、18 d测量裸鼠肿瘤体积,18 d解剖取肿瘤组织并称重,制备肿瘤组织单细胞悬液,流式细胞仪分选M1/M2型巨噬细胞,免疫组织化学染色检测iNOS和Arg-1表达。结果 体外成功诱导获得TAMs细胞,经过SDF-1抑制剂AMD3100处理后,TAMs细胞中SDF-1在mRNA和蛋白上的表达水平均下调,iNOS、TNF-α的mRNA相对表达量升高,TGF-β、Arg-1的 mRNA相对表达量降低（P＜0.01）;0.5、5、50、500 μmol/L奥沙利铂处理后LoVo细胞存活率下降,与TAMs共培养再经过奥沙利铂处理后LoVo细胞存活率升高,而与SDF-1抑制剂AMD3100处理的TAMs共培养再经过奥沙利铂处理后LoVo细胞存活率则下降（P＜0.01）;经过奥沙利铂处理的移植瘤裸鼠肿瘤组织生长减缓,肿瘤重量减小,经过SDF-1抑制剂AMD3100和奥沙利铂联合处理的移植瘤裸鼠肿瘤组织生长进一步减缓,肿瘤重量减小,同时,肿瘤组织中F4/80+CD11c+表达增加,iNOS表达增加,F4/80+CD206+表达减少,Arg-1表达也减少。结论 通过SDF-1抑制剂AMD3100靶向SDF-1可在体外、体内增强结直肠癌的化疗敏感性,其作用机制可能与调控肿瘤相关巨噬细胞M1/M2亚型转化相关     

托吡酯对戊四氮点燃大鼠海马胶质原纤维酸性蛋白表达的影响

目的:观察托吡酯(TPM)对戊四氮点燃大鼠海马胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)表达的影响,以探讨胶质增生在癫(癎)发病机制中的作用.方法:将成年健康雄性SD大鼠40只,随机分为4组,每组10只,模型组、高剂量 TPM组、低剂量 TPM组和对照组.模型组胃灌入生理盐水10 mL/kg 1 h后腹腔注射10 g/L戊四氮35 mg/kg;高、低剂量 TPM组分别胃灌注10 g/L TPM 100 mg/kg、40 mg/kg 1 h后腹腔注射戊四氮,剂量同模型组;对照组按10 mL/kg和3.5 mL/kg分别胃灌注和腹腔注射生理盐水.实验第2周和第4周时,每组各选取5只大鼠处死,去海马,采用免疫组织化学化方法检测海马GFAP蛋白的表达.结果:第2 周和第4周时,模型组、高剂量 TPM组、低剂量 TPM组GFAP蛋白阳性细胞数均较对照组增高(P<0.05),高、低剂量 TPM组阳性细胞数小于模型组(P<0.05),高、低剂量TPM组间差异无统计学意义(P>0.05).4周时,模型组、高剂量 TPM组、低剂量 TPM组GFAP蛋白阳性细胞数高于2周时的水平(P<0.05).结论:GFAP参与了癫(癎)的病理过程.托吡酯可抑制大鼠海马GFAP的表达.     

芹菜素对人前列腺癌裸鼠移植瘤Bax和Bcl-2表达的影响

目的：探讨芹菜素对人前列腺癌PC-3细胞裸鼠移植瘤凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2表达的影响。方法：通过皮下种植PC-3细胞建立人前列腺癌裸鼠移植瘤模型,成瘤后随机分为4组：对照组（DMSO＋NS,0.2 mL/d）、芹菜素低剂量组（12.5 mg.kg-1.d-1）、芹菜素中剂量组（25 mg.kg-1.d-1）、芹菜素高剂量组（50 mg.kg-1.d-1）,每组6只,每日腹腔注射1次,共28次。应用免疫组织化学法检测裸鼠移植瘤组织凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2的表达变化。结果：免疫组织化学法结果显示,芹菜素中、高剂量组能促进Bax蛋白的表达,抑制Bcl-2蛋白的表达,两组与对照组和低剂量组相比差异有统计学意义（P〈0.05）。但芹菜素低剂量组Bax和Bcl-2蛋白的表达和对照组相比差异无统计学意义（P〉0.05）。结论：中、高剂量组芹菜素能上调前列腺癌裸鼠移植瘤Bax蛋白的表达,下调Bcl-2蛋白的表达。     

持续小剂量化疗对人肺腺癌A549细胞裸鼠移植瘤VEGF-C及其受体Flt-4表达的影响

目的探讨持续小剂量(LDM)化疗对肺腺癌A549细胞荷瘤裸鼠肿瘤组织中血管内皮生长因子-C(VEGF-C)/fms-样酪氨酸激酶-4(Flt-4)轴的影响及其机制。方法将人肺腺癌A549细胞接种于18只裸鼠皮下,建立荷瘤动物模型,以随机数字表法将其分为最大耐受剂量(MTD)组(CTX 100mg.kg-1腹腔注射,隔日1次,连续3次;n=6)、LDM组(CTX 20mg.kg-1.d-1腹腔注射,n=6)和对照组(0.1mL生理盐水腹腔注射,1次/d;n=6)。治疗21d后脱颈处死裸鼠,取皮下肿瘤组织,采用免疫组织化学链霉素抗生物素蛋白-过氧化物酶(SP)法及逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)分别检测肿瘤组织中VEGF-C、Flt-4的蛋白及mRNA表达。结果 LDM组裸鼠肿瘤组织VEGF-C、Flt-4蛋白及mRNA的表达水平均显著低于MTD组和对照组(P<0.05)。结论 LDM化疗可能通过降低肿瘤组织VEGF-C、Flt-4的表达而减少肺腺癌A549荷瘤裸鼠肿瘤的淋巴转移。     

海藻玉壶汤对Hep3B肝癌裸鼠肝功能及CyclinD1、Bax蛋白表达的影响

目的:观察海藻玉壶汤对人肝癌移植瘤裸鼠的抗癌作用,以及对肝功能指标血清丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase,ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(aspartic transaminase,AST)和细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、细胞凋亡调控基Bax蛋白表达的影响。方法:30只BALB/c裸鼠皮下接种Hep3B细胞,建立肝癌异位移植瘤模型,分为模型组(9 g·L~(-1)氯化钠溶液灌胃),阳性对照组(盐酸多柔比星腹腔注射),海藻玉壶汤高剂量组、中剂量组、低剂量组(海藻玉壶汤灌胃)。治疗21 d后,称量小鼠体质量,取肿瘤组织测瘤质量、常规HE染色;免疫组织化学检测肿瘤组织CyclinD1、Bax;生化分析仪检测血清ALT、AST。结果:各组小鼠体质量比较,差异无统计学意义(P0.05)。海藻玉壶汤高剂量组、中剂量组、低剂量组与模型组比较,移植瘤瘤质量较低,差异具有统计学意义(P0.05)。HE染色观察肿瘤组织病理学可见治疗组不同程度肿瘤细胞灶性坏死,胞核固缩深染。免疫组织化学可见海藻玉壶汤各组CyclinD1蛋白阳性表达下降(P0.05),Bax蛋白阳性表达增强(P0.05)。结论:海藻玉壶汤可剂量依赖性地抑制裸鼠Hep3B移植瘤生长,一定程度上保护肝功能,并通过影响细胞周期和凋亡发挥抗肿瘤作用。     

硫酸右旋糖酐抑制人胃癌腹腔种植转移及其对缺氧诱导因子-1α表达的影响

目的 探讨硫酸右旋糖酐(DS)是否可抑制胃癌腹腔种植转移及其对缺氧诱导因子-1α(Hif-1α)表达的影响.方法 裸鼠72只分为两大组,对照组32只,实验组40只,培养BGC-823胃癌细胞,腹腔注射建立裸鼠腹腔种植转移动物模型.注射胃癌细胞1d后,对照组注射生理盐水1 mL,实验组注射0.3％DS 1 mL.于1、3、7、14d时剖腹观察胃癌细胞腹腔种植转移情况,采用逆转录PCR(RT-PCR)及免疫组织化学检测缺氧诱导因子(Hif-1α) mRNA及蛋白的表达.结果 第7、14天实验组瘤结节数明显少于对照组.经RT-PCR及免疫组织化学检测,第3、7、14天实验组Hif-1α mRNA及蛋白的表达明显低于对照组(P＜0.05).结论 DS可以抑制胃癌的腹腔种植转移,DS可能是通过下调Hif-1α的表达来抑制胃癌的腹腔种植转移.     

抑制NF-κB活性可减轻CCl4诱导的小鼠急性肝损伤

目的研究核因子-κB(nuclear factor kappa B,NF-κB)活性抑制剂对CCl4诱导急性肝损伤小鼠肝组织中细胞间黏附分子-1(intercellular ashesion molecule-1,ICAM-1)表达及肝功能的影响.方法30只雄性昆明小鼠(28±2.2)g随机分为3组,即正常对照组、急性肝损伤模型组和NF-κB活性抑制剂组.正常对照组腹腔注射生理盐水0.1 mL/10 g,实验组腹腔注射0.1?l4 0.1 mL/10 g,NF-κB活性抑制剂组于腹腔注射0.1?l4 0.1mL/10 g前15 min腹腔注射脯氨酸二硫代氨基甲酸酯(prothiocarbamates DTC,ProDTC 150μg/10 g)1次,其后1次/d,共5次.结果模型组ALT、AST及MDA较正常组显著升高(P ＜0.01),SOD降低明显(P＜0.01).在正常组中肝脏无NF-κB、ICAM-1表达,肝损伤模型组中NF-κB有较强表达,ICAM 1在肝细胞坏死区强表达.NF-κB抑制剂组ALT、AST及MDA较模型组显著降低,NF-κB、ICAM 1表达均较肝损伤组减弱,肝组织坏死程度较轻.结论 NF-κB在CCl4诱导小鼠急性肝损伤中表达明显增强,NF-κB抑制剂可减少NF-κB及ICAM-1表达并减轻肝损伤程度.     

双氢青蒿素干预结直肠癌模型动物肿瘤生长的实验研究

[目的]观察双氢青蒿素(DHA)对结直肠癌模型动物肿瘤生长的影响.[方法]选用SPF级BALB/c裸鼠,背部皮下接种结直肠癌LoVo细胞悬液复制结直肠癌模型;造模成功裸鼠随机分成5组:模型对照组,5-Fu组(腹腔注射5-Fu 20 nag·kg-1·d-1,共5d),DHA高、中、低剂量组(分别按120、60、30mg·kg-1·d-1剂量灌胃给药).14 d后,检测活体肿瘤及解剖剥离后裸瘤体积、平均瘤体质量、肿瘤生长速率和抑瘤率.[结果]治疗后DHA各给药组及5一Fu组活体肿瘤的体积及肿瘤生长速率均减少,与模型组比较差异有显著性意义(P<0.01);5-FU组及DHA高、中剂量组的裸瘤体积显著小于模型组(P<0.05或P<0.01);各给药组瘤体质量显著低于模型组(均P<0.05);DHA高、中剂量组的抑瘤率显著高于5-FU组(P<0.05),但DHA低剂量组抑癌率显著低于5-FU组(P<0.05).[结论]DHA对结直肠癌模型动物肿瘤生长具有一定的抑制作用.     

黄芪甲甙在Balb/C小鼠CVB3病毒性心肌炎中抗凋亡作用的机制

目的 观察黄芪甲甙对Balb/C小鼠CVB3病毒性心肌炎心肌细胞凋亡的影响,探讨黄芪甲甙抗心肌细胞凋亡的可能机制.方法 Balb/C小鼠50只随机分5组(每组10只).空白对照组:腹腔无菌注射不含病毒的Eagle's培养基0.1 mL,在腹腔注射病毒培养基30 min后,以生理盐水0.1 mL灌胃,共7天;病毒性心肌炎对照组:小鼠每只腹腔注射0.1 mL内含1×105TCID50 CVB3 的Eagle's培养基,在腹腔注射含病毒的Eagle's培养基30 min后,以生理盐水0.1 mL灌胃,共7天;黄芪甲甙低、中、高剂量干预组:在腹腔注射病毒30 min后,用黄芪甲甙[具体剂量分别为0.07、0.2、0.6 mg/(kg·d)]0.1 mL灌胃,共7天.采用缺口末端标记法(TUNEL)检测心肌凋亡细胞,免疫组织化学检测Bcl-2、Bax蛋白的表达,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测Bcl-2、Bax基因的表达,并利用图像分析系统测量平均光密度值进行半定量分析.结果 与空白对照组比较,病毒性心肌炎对照组心肌细胞凋亡发生率增高;抑制凋亡因子Bcl-2基因及蛋白表达下降,而促进凋亡因子Bax基因及蛋白表达增强,Bcl-2/Bax mRNA比值降低.与病毒性心肌炎对照组比较,黄芪甲甙高剂量干预组能降低CVB3病毒性心肌炎心肌细胞的凋亡指数,Bcl-2基因及蛋白水平表达增强,Bax基因及蛋白水平表达下降.结论 黄芪甲甙在Balb/C小鼠CVB3病毒性心肌炎中抗凋亡作用机制可能是促进了抑制凋亡基因Bcl-2表达,抑制了促凋亡Bax基因表达.     

黄芪甲甙对病毒性心肌炎小鼠心肌中TLIA表达的影响及意义

目的:观察黄芪甲甙干预的病毒性心肌炎(viral myocarditis,VMC)小鼠中TL1A表达的影响,探讨黄芪甲甙治疗VMC的作用机制.方法:取Balb/c小鼠100只,随机分成6组.非感染小鼠腹腔无菌注射不含病毒的Eagle's培养液0.1 mL,分为正常对照组10只,以羧甲基纤维素钠0.1 mL灌胃7d;高剂量对照组10只,9％黄芪甲甙0.1 mL灌胃7d;余80只小鼠以腹腔无菌注射0.1 mL内含1×10250％组织感染率(TCID50)柯萨奇病毒B3 (Coxsachievirus B3,CVB3)的Eagle's培养液制作VMC模型.VMC小鼠随机分为心肌炎对照组和低、中、高剂量干预组,分别以生理盐水和1％,3％,9％黄芪甲甙[分别为0.07,0.2,0.6 g/(kg.d)]0.1 mL灌胃7d(每组20只).14d后处死全部小鼠并取其心脏.采用RT-PCR及免疫组织化学分别检测心肌TL1A mRNA及蛋白表达水平.结果:正常对照组和高剂量对照组无小鼠死亡,心肌炎对照组有大量小鼠死亡,死亡率为45％(9/20),低、中、高剂量干预组小鼠死亡率分别为30％(6/20),25％(5/20),10％(2/20),高剂量干预组小鼠死亡率较心肌炎对照组明显降低(P＜0.05),而低、中剂量干预组小鼠死亡率与心肌炎对照组比较,差异无统计学意义(P＞0.05);正常对照组和高剂量对照组心肌未见任何病理改变,然而两组心肌中均有一定量的TL1A mRNA及蛋白表达,两组比较差异无统计学意义(P＞0.05),心肌炎对照组TL1A mRNA及蛋白表达水平明显增加,与正常对照组比较,差异有统计学意义(P＜0.01),心肌炎小鼠经不同剂量黄芪甲甙干预后,与对照组相比,在高剂量干预组显著下降(P＜0.01),而低、中剂量黄芪甲甙对心肌炎小鼠TL1A mRNA、蛋白表达水平以及心肌病变积分无明显影响(P＞0.05).结论:黄芪甲甙治疗VMC可能通过抑制炎症介质、降低TL1A的表达而起作用.     

抗黏附药物对人结肠癌细胞裸鼠肝转移模型sICAM-1表达的影响

目的　探讨术后早期给予抗黏附药物丹参、蛇毒对人结肠癌细胞裸鼠肝转移模型sICAM 1表达的影响。方法　采用Balbc/c裸鼠 2 4只 ,用保脾法建立人结肠癌细胞裸鼠肝转移模型 ,随机分为 4组 ,分别自腹腔注射生理盐水 (A组 ) ,丹参 0 .7ml/只 (B组 )、蛇毒 3.12 5× 10 2 单位 /只 (C组 )、丹参 0 .7ml和蛇毒 3.12 5× 10 2 单位 /只 (D组 )。 5周时处死小鼠 ,观察原位移植瘤生长情况、肝转移情况 ,计数各肝脏表面转移结节数 ,并经病理组织学证实。测定血清和腹水中sICAM 1的含量。肝脏表面转移结节数采用秩和检验、sICAM 1的含量采用t检验。结果　实验各组均有脾内原位移植瘤生长 ,生理盐水组、丹参加蛇毒组各有 5只裸鼠发生肝转移 (5 / 6 )、丹参、蛇毒组各有 4只裸鼠发生肝转移 (4/ 6 )。对照组血清和腹水中sICAM 1的含量均高于丹参组 (P <0 .0 1)、蛇毒组 (P <0 .0 1)及丹参加蛇毒组 (P <0 .0 1)。结论　抗黏附药物可降低血清和腹水中sICAM 1的含量 ,抗黏附治疗可能是治疗恶性肿瘤转移的一个新方向。     

健脾复方对人大肠癌移植瘤裸小鼠肿瘤生长转移的影响

目的：研究健脾复方对人大肠癌移植瘤裸小鼠生长转移的影响。方法：对60只BALB/C裸小鼠建立人大肠癌原位移植瘤模型,并按1：1：1：1：1随机分入健脾复方＋5-Fu组、健脾复方组、塞来昔布组、5-Fu组和模型对照组,分组治疗8周。观察瘤质重、瘤体积以及肿瘤转移情况,并对肝转移的预测因素进行分析。结果：健脾复方＋5-Fu组的瘤质重、瘤体积及肿瘤转移数量低于部分其他组别,差异有统计学显著性。不同的治疗方案是肝转移唯一的显著性相关因素（P=0.0022）。结论：健脾复方联合5-Fu治疗可降低大肠癌瘤质重、瘤体积和肿瘤转移数量,并且与降低肝转移显著相关。     

人结肠癌裸鼠原位移植瘤模型的建立

目的 建立人结肠癌裸鼠原位移植瘤模型.方法 使用对数生长期的人结肠癌细胞(lovo)在8只裸鼠结肠浆膜至黏膜逐层注射,以完成原位移植瘤模型的制备,同时皮下种植8只裸鼠作为对照组.分别于第4、6、8、12周各组分别处死裸鼠2只,观察原位种植肿瘤的成瘤率、生长情况、转移率和腹水出现率.结果 16只裸鼠实验期间无1只死亡,成瘤率为100%, 原位种植成瘤率为100%(8/8),区域淋巴结转移率100%(8/8),肝转移率为100%(8/8),肺脏转移率为75.0%(6/8),腹膜转移率为75.0%(6/8),腹水出现率为27.5%(3/8).皮下种植组未见转移.结论 本实验成功建立了人结肠癌裸鼠原位移植瘤模型,该模型的生物学行为与临床病程非常相似,为研究人结肠癌转移机制和干预措施提供了较为理想的动物模型.     

三氧化二砷对人结肠癌裸鼠肝转移的抑制作用

目的 研究三氧化二砷(As2O3)对人结肠癌裸鼠肝转多的影响及其作用机制。方法 BALA/C-nu/nu裸鼠经脾脏接种人结肠腺癌LS-174T细胞建立人结肠癌裸鼠肝转移模型后，随机分为实验组和对照组，分别经尾静脉注射As2O3和生理盐水，观察各组生存期、肝转移结节的数目、大小，以及血清、腹水中癌胚抗原（CEA）的含量和转移癌细胞周期。结果 与对照组相比，As2O3可明显延长荷瘤鼠生存期，抑制肝转移，治疗组血清和腹水中CEA水平均低于对照组，转移癌细胞周期中G0/G1期比例上升，S期比例下降。结论 三氧化二砷对人结肠癌裸鼠肝转移有明显的抑制作用。     

肠胃清对人大肠癌细胞HCT8／V皮下移植瘤长春新碱耐药的逆转作用

目的：观察中药复方肠胃清口服液逆转大肠癌长春新碱耐药的作用,初步探讨其逆转耐药的作用机制。方法：建立人大肠癌耐长春新碱（VCR）细胞株HCT8／V裸鼠皮下移植瘤模型,随机分为正常对照组、VCR组、肠胃清组、肠胃清高剂量＋VCR组、肠胃清低剂量＋VCR组。治疗结束后计算瘤体抑制率;高效液相色谱法检测瘤内VCR药物浓度;流式细胞技术检测瘤内细胞周期和凋亡改变。结果：肠胃清高低剂量联合VCR的瘤体抑制率为47．47％、69．62％,明显高于单用肠胃清或VCR组;对照组VCR的含量为0．1745μg／g瘤重,而肠胃清高剂量联合VCR组的浓度为12．2236μg／g瘤重,是对照组的70．05倍;与对照组比较,药物干预后,G1期细胞明显增加,S期细胞明显低于对照组,细胞凋亡率明显增加,以肠胃清联合VCR组作用最强。结论：肠胃清逆转大肠癌移植瘤对VCR的耐药与通过增加瘤体内药物浓度、诱导细晌凋亡有关。     

趋化因子基质细胞衍生因子-1及其受体对胃癌腹膜转移潜能的影响

目的 探讨趋化因子基质细胞衍生因子-1(SDF-1)及趋化因子受体4(CXCR4)对胃癌腹膜转移潜能的影响.方法 采用逆转录多聚酶链式反应(RT-PCR)检测胃癌细胞NUGC4及间皮细胞HMrSV中CXCR4和SDF-1 mRNA的表达.采用MTT实验检测NUGC4细胞增殖能力的变化,采用间皮细胞黏附实验及间皮细胞迁移实验评价体外培养的NUGC4细胞与间皮细胞发生黏附的能力及其穿越间皮细胞发生迁移的能力.通过建立裸鼠胃癌腹膜种植瘤模型,评价NUGCA细胞腹膜肿瘤生成能力及荷瘤裸鼠生存时间的变化.结果 NUGC4细胞表达较高强度的CXCR4mRNA,而间皮细胞表达高强度的SDF-1 mRNA.抗CXCR4单抗对NUGC4细胞增殖具有显著的抑制作用(P＜0.05);SDF-1可促进NUGC4细胞与间皮细胞黏附及穿越间皮细胞发生迁移,抗CXCR4单抗处理可显著抑制NUGC4细胞的黏附及迁移能力(P＜0.05).体内实验结果显示,CXCR4拮抗剂AMD3100治疗组裸鼠的平均生存时间显著长于对照组[(43.8±2.8)vs(28.2±2.5)d,P＜0.01],瘤结节数目显著低于对照组[(64.6±8.2)vs(103±12.4),P＜0.01].结论 趋化因子SDF-1及其受体CXCR4参与胃癌腹膜转移过程,与肿瘤细胞增殖、肿瘤细胞-问皮细胞问的黏附和肿瘤细胞迁移等步骤密切相关;干扰SDF-1/CXCR4生物学轴可以作为胃癌腹膜转移的潜在治疗策略.     

蟾毒灵对裸鼠人结肠癌血管新生相关VEGFA蛋白表达的影响

目的:通过实验研究观察蟾毒灵对人结肠癌血管新生的作用。方法:CCK-8法检测不同浓度蟾毒灵对人脐静脉内皮细胞增殖的影响;构建裸鼠人结肠癌移植瘤模型,随机分为对照组(0.9%生理盐水)、蟾毒灵组(1.5 mg·kg~(~(-1))·d~(-1)),药物干预4周后,观察各组裸鼠移植瘤瘤体生长情况,Western blot检测瘤体组织中血管内皮生长因子A(VEGFA)的表达。结果:蟾毒灵在2.5~320.0 ng/ml的浓度区间内,其对人脐静脉内皮细胞的生长抑制率为1.67%~95.40%,IC50为20.86 ng/ml,呈剂量依赖性。蟾毒灵组裸鼠移植瘤瘤体明显小于对照组(P0.01),蟾毒灵组瘤体中VEGFA蛋白的表达明显低于对照组(P0.05)。结论:蟾毒灵可抑制血管内皮细胞增殖,抑制裸鼠人结肠癌移植瘤瘤体的生长,其机制可能与下调VEGFA蛋白的表达有关。     

CXCR4对大鼠背根神经节中交感芽生形成的干预作用

 目的 研究CXCR4在大鼠脊神经结扎(spinal nerve ligation, SNL)后对背根神经节(dorsal root ganglion, DRG)交感芽生形成的干预作用。方法 将大鼠随机分为AMD3100(CXCR4特异抑制剂)实验组(n=16)、AMD3100对照组(n=8)、对照组(n=16)和空白对照组(n=16),对AMD3100实验组和对照组的大鼠行SNL术,术后7天内对AMD3100实验组大鼠每天给予AMD3100,术后3、5、7、10、14天(d3、d5、d7、d14)检测机械痛阈(mechanical withdrawal threshold, MWT),分别用实时PCR和Western blot检测神经生长因子(nerve growth factor, NGF)的RNA和蛋白质水平,d7和d14行免疫荧光检测DRG中交感芽生。结果 与对照组相比,AMD3100实验组大鼠在d5、d7和d14的MWT均显著缓解,抑制CXCR4后,AMD3100实验组大鼠DRG中交感芽生在d7较对照组显著减少,但在d14减少不明显,且NGF的RNA和蛋白质水平均较对照组显著降低。结论 抑制CXCR4能改善大鼠SNL术后d5～d14的疼痛行为,并能减少d7的蓝状结构数量。     

荷瘤裸鼠证候特征的研究

目的：观察SMMC-7721肝癌与SGC-7901胃癌荷瘤裸鼠证候及其差异。方法：分别在雄性BALB／c—nu裸鼠右腋下接种SMMC-7721肝癌细胞和sGC-7901胃癌细胞悬液,并设立正常对照组,采用小鼠四诊工作站平台与方法收集裸鼠四诊信息,并进行计量辨证。结果：接种第6---50天,SMMC-7721肝癌裸鼠肿瘤增长与裸鼠死亡速度较sGC-7901胃癌裸鼠速度快,第23天SMMC-7721肝癌裸鼠全部自然死亡;而至第50天,sGC-7901胃癌裸鼠生存率仍达90％（9／10）。SMMC-7721肝癌与SGC-7901胃癌荷瘤裸鼠均自发形成了常见虚证,其中SMMC-7721肝癌裸鼠证候出现早,程度重,发展快。结论：SMMC-7721肝癌与SGC-7901胃癌荷瘤裸鼠存在证候的自然发生与演变。可用以模拟临床肿瘤证候的发生与演变,用于辨证论治的实验研究。     

具有肝转移倾向的结肠癌细胞亚系的筛选与鉴定

目的 筛选人结肠癌SW480细胞中具有特定肝脏转移倾向的亚克隆,比较它与母系生物学特性的差异,为结肠癌肝转移机制的研究提供基本的实验材料.方法 采用外科原位接种、组织块细胞培养法从裸鼠体内获得SW480细胞系中具有肝脏转移倾向的亚克隆SW480/M5;体内体外实验验证它与母系细胞在生物学特性上的差异.结果 体内实验证明SW480具有广泛转移的潜能,而SW480/M5细胞只具有向肝脏转移的潜能;SW480/M5细胞原位瘤的质量较SW480细胞大且皮下瘤生长速度较快:体外实验证明SW480/M5细胞的克隆形成能力,体外增殖能力、体外运动及侵袭能力较SW480细胞强,而对FN的粘附能力较SW480细胞弱.结论 从结肠癌细胞系SW480中筛选出的细胞亚系SW480/M5转移方向明确,是结肠癌肝转移机制研究的理想细胞模型.