川芎嗪对大鼠肝纤维化转化生长因子-β1/Smads信号通路的影响

目的研究川芎嗪对实验性大鼠肝纤维化的治疗作用,并探讨其对转化生长因子(TGF)-β_1/Smads信号通路可能的影响。方法80只雄性SD大鼠,随机挑选70只予皮下注射40%四氯化碳,其余10只作为正常对照组(N组),8周后造模组中随机处死16只(M组)并证实肝纤维化形成,其余肝纤维化大鼠随机分成2组,分别予以川芎嗪腹腔注射(T组,80mg·kg~(-1)·d~(-1))和0.9%氯化钠溶液腹腔注射(R组),疗程为8周。实验结束所有大鼠采血后处死,分别行苏木精-伊红(H-E)染色,采用纤维化半定量计分系统评估肝纤维化程度,Masson染色评估肝组织中胶原纤维百分比,荧光定量聚含酶链反应检测肝组织内TGFβ_1、Smad3和Smad7表达。结果①T组大鼠肝纤维化程度和肝组织中胶原面积密度分别为7.8±2.5和11.68±2.26,较R组的10.2±2.8和18.84±2.74明显减轻(P值分别<0.05、0.01)。②M组大鼠肝组织中TGF-β_1、Smad3的相对表达分别为1.54±0.08和1.62±0.03,较N组的0.78±0.15和0.88±0.17明显升高(P值均<0.01),M组Smad7相对表达为0.88±0.11,显著低于N组的1.31±0.02(P<0.01)。③T组肝组织TGF-β_1、Smad3分别1.02±0.09和1.07±0.01,均显著低于M组(P值均<0.01),而Smad7为1.15±0.01,显著高于M组(P<0.01)。结论川芎嗪具有明显的逆转肝纤维化作用,其机制可能与其降低TGF-β_1的表达以及改善Smad3与Smad7之间的失衡有关。     

复方红景天对肝纤维化大鼠肝组织Na+/Ca2+泵、TGF-β1 mRNA表达的影响

目的: 探索复方红景天抗实验性大鼠肝纤维化的疗效与可能的分子机制. 方法: 用CCl4皮下注射法诱导SD大鼠肝纤维化模型,同时给予复方红景天颗粒口服进行干预性治疗,观察大鼠血清Ⅲ型前胶原、Ⅳ型胶原、透明质酸含量及肝组织Na /Ca2 泵、TGF-β1,Ⅰ型前胶原α1 mRNA表达水平、肝组织病理学变化. 结果: 与模型组相比,复方红景天可明显降低大鼠血清PCⅢ(μg/L)(164.25±45.68 vs 265.54±98.21), CⅣ(96.73±14.68 vs 159.67±29.64), HA(289.35±75.68 vs 455.79±113.55)水平,(q=4.26,4.94,3.68,均为P<0.05);复方红景天可抑制NCX,TGF-β1,α1(Ⅰ) mRNA表达(半定量积分分别为1.50±0.19 vs 2.45±0.31,1.06±0.12 vs 2.47±0.37, 1.26±0.17 vs 2.50±0.40,q值分别为3.52,3.93,4.04,均为P<0.05). 肝组织纤维沉积明显减少(肝纤维化积分为2.43±0.70 vs 3.53±0.68,q=3.69,P<0.05). NCX, TGF-β1 mRNA表达与PCⅢ, CⅣ, HA, α1(Ⅰ) mRNA及肝组织的纤维化积分呈正相关,相关系数r分别为0.52, 0.49, 0.56, 0.48, 0.60及0.47, 0.61, 0.56, 0.49, 0.51(均为P<0.05). 结论: 复方红景天良好的抗肝纤维化作用,其分子机制可能与抑制NCX及TGF-β1 mRNA表达从而减少胶原纤维合成有关.     

软肝冲剂对免疫性肝纤维化大鼠血清TGFβ1和Ⅰ、Ⅲ型胶原水平的影响

目的:研究软肝冲剂对免疫性肝纤维化大鼠转化生长因子β1(TGFβ1)和Ⅰ、Ⅲ型胶原水平的影响,以探讨软肝冲剂促进肝细胞再生及阻止肝纤维化、肝硬化形成的作用机制.方法:复制免疫性肝纤维化动物模型,采用Rennard方法检测大鼠血清TGFβ1和Ⅰ、Ⅲ型胶原水平及肝脏组织羟脯氨酸含量.结果:模型组大鼠血清TGFβ1和Ⅰ、Ⅲ型胶原水平及肝脏组织羟脯氨酸含量明显增加,与正常对照组比较,差异有显著性(P<0.01);中药软肝冲剂和西药秋水仙碱能明显降低免疫性肝纤维化大鼠血清TGFβ1和Ⅰ、Ⅲ型胶原水平及肝脏组织羟脯氨酸含量,与模型组比较,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01),且中药高剂量组优于中药低剂量组和西药秋水仙碱组(P<0.05或P<0.01);中药低剂量组与西药秋水仙碱组比较,差异无显著性(P>0.05).结论:软肝冲剂能明显降低免疫性肝纤维化大鼠血清TGFβ1和Ⅰ、Ⅲ型胶原水平,以促进肝细胞再生,抑制肝纤维化、肝硬化的形成.     

缬沙坦对肝纤维化大鼠TGF-β1及其Ⅱ型受体mRNA与Smad3、Smad7表达的影响

目的　观察缬沙坦抗大鼠肝纤维化的疗效及作用机制。方法　将 80只Wistar大鼠随机分为 5组 ,每组 16只大鼠 ,A组为正常对照组 ,B、D组为肝纤维化模型组 ,C、E组为缬沙坦治疗组。B、C、D和E组大鼠均给四氯化碳 8W诱导肝纤维化 ,C、E组大鼠分别于第 1、4W予以缬沙坦灌胃治疗。A、B、C组大鼠于第 8W处死 ,D、E组大鼠于第 12W处死。结果　与模型组比较 ,治疗组肝内TGFβ1与TGFRⅡmRNA以及Smad3表达明显降低 ,而Smad7的表达增加 ,Smad3的免疫阳性反应信号主要位于纤维间隔中的细胞浆 ,Smad7则主要在肝细胞浆表达。大鼠肝组织TGFβ1与TGFRⅡmRNA、Smad3与Smad7在C组与E组表达比较差异有显著性 (P <0 .0 5 ) ,而B组与D组TGFβ1与TGFRⅡmRNA、Smad3与Smad7比较差异无显著性。结论　缬沙坦减轻肝脏损伤及纤维化程度的机制与抑制肝内TGFβ1与TGFRⅡmRNA及Smad3表达 ,促进Smad7表达有关。     

γ干扰素对实验性肝纤维化大鼠Smad3 mRNA的影响

目的初步探讨γ干扰素抗纤维化的分子机制。方法SD大鼠70只,模型对照组和γ干扰素治疗组注射40?l4油剂按0.3ml/100g皮下注射,2次/周,另设正常对照组大鼠10只。γ干扰素治疗组造模同时肌内注射γ干扰素0.2MU/kg,1次/日,模型对照组及正常对照组肌内注射生理盐水,连续干预12周。第12周末处死所有大鼠。取肝脏标本行常规苏木素-伊红和胶原染色,在光镜观察肝组织炎症活动度和肝纤维化情况并进行评分;实时荧光定量PCR方法检测大鼠肝脏Smad3mRNA的表达。结果肝组织炎症活动度和肝纤维化评分显示γ干扰素治疗组大鼠炎症程度、肝纤维化程度与模型对照组大鼠的肝组织炎症程度、肝纤维化程度比较显著改善(P<0.01,P<0.01)。荧光定量RT-PCR检测显示:与正常对照组Smad3mR-NA相比,模型对照组大鼠肝脏中Smad3mRNA表达显著增加(P<0.01);与模型对照组相比,γ干扰素组大鼠肝脏组织中Smad3mRNA表达明显减少(P<0.05)。结论γ干扰素抗实验性肝纤维化作用与下调Smad3mRNA来实现。干预转化生长因子β1信号转导过程是γ干扰素抗肝纤维化的机制之一。     

不同剂量虫草对肝纤维化小鼠肝脏TGF-β1、Smad3的影响

目的明确不同剂量冬虫夏草对四氯化碳小鼠肝纤维化的作用及对TGF-β1mRNA、Smad3蛋白表达的影响。方法四氯化碳(CCl4)皮下注射复制BALB/c小鼠肝纤维化模型,虫草组在造模同时予以不同剂量虫草煎剂,直至造模结束。HE染色观察肝组织炎症,天狼猩红染色观察肝脏胶原沉积,生化法测定肝组织羟脯氨酸(Hyp)含量,免疫组化测定Smad3在肝脏内的表达,RT-PCR测定TGF-β1mRNA在肝脏内的表达。结果与正常小鼠比较,肝纤维化小鼠肝脏肝静脉与汇管区周围肝细胞明显脂肪变性,肝脏胶原沉积,可见纤维间隔形成,肝脏Hyp含量、TGF-β1mRNA、Smad3蛋白表达量均显著增加。与模型组比较,虫草组肝脏炎症与胶原沉积减轻,TGF-β1mRNA、Smad3蛋白表达量明显降低,以虫草高剂量组为明显。结论肝纤维化BALB/c小鼠的肝脏TGF-β1mRNA、Smad3蛋白表达明显上升,虫草制剂有良好的抗肝纤维化作用,高剂量虫草有着更好的抗肝纤维化作用,其作用机制与下调Smad3蛋白及TGF-β1mRNA表达有关。     

肝纤维化大鼠肝组织Na+/Ca2+泵mRNA表达

目的: 了解肝纤维化大鼠肝组织Na /Ca2 泵(Na /Ca2 exchanger,NCX) mRNA表达状况,探讨其与肝纤维化程度的关系及意义.方法: CCl4 sc法诱导大鼠肝纤维化,观察肝组织NCX及α1(Ⅰ) mRNA表达水平,检测血清HA,CⅣ,PCⅢ,血清肝纤维化相关酶 (β-NAG,MAO,ALD)、肝组织羟脯氨酸(hydroxyproline,Hyp)含量及肝组织病理学变化,分析其相关性与临床意义.结果: 20只正常大鼠肝组织NCX mRNA表达除1只弱阳性外,其余均为阴性,半定量积分仅为(0.10±0.00);而30只模型组大鼠全部呈阳性,半定量积分显著增加(P<0.05).与正常组比较,模型组大鼠血清HA[(455.79±113.55) vs (112.41±45.62) μg/L],CⅣ,[(159.62±29.64) vs (35.69±9.68) μg/L],PCⅢ [(265.54±98.21) vs (89.99±10.85) μg/L]明显增高(均为P<0.01);β-NAG,MAO,ALD活性显著增加(分别增加2.20,2.14,1.57倍,P<0.01),模型组大鼠NCX mRNA表达与α1(Ⅰ) mRNA表达水平、肝组织Hyp含量、血清HA,CⅣ,PCⅢ水平、肝组织纤维化积分均呈正相关,相关系数r分别为 0.48, 0.64, 0.52, 0.49, 0.56, 0.60(均为P<0.05).结论: 肝纤维化大鼠肝组织NCX mRNA表达明显增强,与胶原代谢水平及肝脏组织病理学变化呈正相关,有望作为判断肝纤维化的有用指标,值得进一步研究.     

骨形态发生蛋白-7对人肝星状细胞转化生长因子β信号转导的影响

目的 通过体外细胞实验,观察骨形态发生蛋白-7(bone morphogenetic protein-7,BMP-7)对转化生长因子β1(transforming growth factorβ1 ,TGFβ1)处理的人肝星状细胞(hepatic stellate cell,HSC)增殖,活化及TGFβ信号转导的影响,探索BMP-7抗肝纤维化的机制.方法 以不同浓度(80、40、20 ng/ml)BMP-7及TGFβ1(5 ng/ml)处理人肝星状细胞LX-2,CCK8法检测LX-2增殖,免疫化学染色法观察α-平滑肌动蛋白(α-SMA)与Ⅰ型胶原的表达,RT-PCR检测TGFβⅠ、Ⅱ型受体mRNA,Smad3、Smad7 mRNA的表达.结果 经TGFβ1刺激后,LX-2增殖能力无明显改变.BMP-7(80、40、20 ng/ml)处理后,LX-2细胞增殖均被抑制,抑制率分别为28.9%、19.6%、10.5%(P<0.01).TGFβ1处理组与细胞对照组比较,LX-2表达α-SMA 和Ⅰ型胶原增加(P<0.01),加入BMP-7(20、40、80 ng/ml)处理48 h后可抑制细胞活化和胶原表达,抑制作用随处理浓度增强而增强(P<0.01, P<0.05).5 ng/ml TGFβ1处理48 h后,TβRⅠ、TβRⅡ、Smad3 mRNA表达增加(P<0.01),Smad7 mRNA表达减少(P<0.01).BMP-7可减少Smad3 mRNA表达(P<0.01),增加Smad7 mRNA表达(P<0.01, P<0.05),但对TβR mRNA的表达影响不显著(P>0.05).结论 BMP-7可抑制肝星状细胞的增殖和活化,减少Ⅰ型胶原的表达,其机制可能为抑制TGFβ/Smad通路中Smad3 mRNA表达,增加Smad7 mRNA表达,从而拮抗TGFβ1的促纤维化作用.     

疏肝健脾活血方对大鼠肝星状细胞TGF-β1Smads信号通路的影响

目的探讨疏肝健脾活血方含药血清对活化的大鼠肝星状细胞(HSC)的转化因子β1(TGF-β1)/Smads信号通路相关基因表达的影响。方法利用病毒转染得到沉默Smad4基因(Smad4 RNAi)的HSCs-T6细胞株(Smad4 RNAi HSCs-T6)。HSCs-T6细胞株随机分为空白对照组、TGF-β1模型组、TGF-β1+含药血清组;Smad4 RNAi HSCs-T6细胞株随机分为Smad4 RNAi组、Smad4RNAi+TGF-β1模型组、Smad4 RNAi+TGF-β1+含药血清组。各组干预后酶联免疫吸附法(ELISA)检测大鼠肝星状细胞Ⅰ型胶原含量;实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)检测HSC-T6细胞Smad2、Smad3、Smad4、Smad7 mRNA相对表达量。结果 TGF-β1促进HSC的I型胶原表达[(40.88±5.49)pg/mL比(26.42±3.33)pg/mL,P0.05]及Smad2、Smad3、Smad7表达[TGF-β1模型组:(1.51±0.10)、(1.27±0.21)、(3.76±0.59);空白对照组:(1.07±0.10)、(1.00±0.09)、(1.00±0.09),P0.05],含药血清干预下HSC的I型胶原表达下调[(26.40±3.30)pg/mL比(40.88±5.49)pg/mL,P0.05]及Smad2、Smad3、Smad4、Smad7表达下调[TGF-β1+含药血清组:(0.31±0.02)、(0.16±0.09)、(0.31±0.30)、(0.38±0.30);TGF-β1模型组:(1.51±0.10)、(1.27±0.21)、(1.28±0.26)、(3.76±0.59),P0.05],沉默Smads4基因后得到相同结果(P0.05)。结论疏肝健脾活血方在离体条件下可以延缓肝纤维化的进程,其机制可能与阻断TGF-β1/Smads信号通路有关。     

高山红景天对肝纤维化大鼠Smad3 mRNA表达的影响

目的目前国内外尚缺乏理想的抗肝纤维化药物。为科学研制新型、高效、安全的抗肝纤维化药物,观察单方生药高山红景天对实验性肝纤维化大鼠的治疗效果,并探讨其作用机制。方法用四氯化碳诱导大鼠肝纤维化模型,将实验动物随机分为正常对照组、模型组、秋水仙碱组、红景天高剂量组、红景天低剂量组。除正常对照组外,其余4组均用四氯化碳诱发肝纤维化。各组于造模第8周末处死动物,分别用放射免疫法检测血清层黏连蛋白(laminin,LN),Ⅲ型前胶原(pro-collagen typeⅢ,PCⅢ),透明质酸(hyaluronic acid,HA)及Ⅳ型胶原(collagen typeⅣpeptide,CⅣ);RT-PCR检测肝组织Smad3mRNA的表达;作HE染色和胶原纤维特殊染色行肝组织病理形态学观察及电镜观察各组大鼠肝超微结构。结果与模型组大鼠比较,经该中药治疗,大鼠血清中LN、PCⅢ、HA、CⅣ水平明显降低(P<0.01);大鼠肝组织内Smad3mRNA表达明显下降(P<0.01);病理学检测大鼠肝组织病理学检测红景天高剂量组改善显著。结论高山红景天高剂量组能有效地抑制肝纤维化的发展,可能是通过下调肝组织内Smad3mRNA表达,降低肝细胞外基质(extracellular matrix,ECM)的分泌而达到的。     

肝纤维化中丹参素对TGFβ1/Smads/ERK信号通路的影响及其相互关系

目的探讨肝纤维化过程中转化生长因子β1(transforming growth factorβ,TGFβ1)/Smads/细胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinase,ERK)通路的相互作用。方法体外分离培养大鼠肝星状细胞(hepatic stellatecell,HSC),MTT法筛选丹参素最适浓度;以最适浓度丹参素及ERK阻断剂(PD98059)作用于经TGFβ1处理的HSC,CCK-8法检测各组HSC增殖;免疫细胞化学染色法检测各组HSC内α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle sctin,α-SMA)及Ⅰ、Ⅲ型胶原表达;RT-PCR检测各组HSC的Smad2、Smad3、Smad7 mRNA表达量;Western blot法检测各组Smad2/3、ERK1/2蛋白磷酸化及Smad7蛋白水平。结果 0.062 5～0.25 mmol/L的丹参素可有效抑制HSC增殖,作为最适处理浓度;PD98059(100μmol/L)可抑制TGFβ1诱导的HSC增殖,丹参素剂量依赖性抑制TGFβ1诱导的HSC增殖(P<0.01);TGFβ1促进细胞内α-SMA及Ⅰ、Ⅲ型胶原表达,PD98059及丹参素降低TGFβ1诱导的α-SMA及Ⅰ、Ⅲ型胶原水平;PD98059可拮抗TGFβ1诱导的Smad2、Smad3、Smad7 mRNA的表达(P<0.05,P<0.01),丹参素下调Smad2、Smad3 mRNA水平,但上调Smad7 mRNA水平(P<0.01);PD98059及丹参素抑制TGFβ1诱导的Smad2/3、ERK1/2蛋白磷酸化(P<0.01),但对TGFβ1诱导的Smad7蛋白表达上调有不同效应(P<0.01)。结论 TGFβ1上调Smad2、Smad3 mRNA表达及蛋白磷酸化,进而诱导HSC增殖、活化及胶原合成,ERK通路可能参与HSC中TGFβ1诱导Smad基因表达及蛋白磷酸化过程。丹参素对TGFβ1/Smad/ERK信号通路具有抑制效应。     

结缔组织生长因子在大鼠肝纤维化发生中的作用机制初探

目的:研究结缔组织生长因子(CTGF)在大鼠肝纤维化形成中的作用机制。方法:雄性SD大鼠32只,体重250~300g,皮下注射四氯化碳(CC l4)制备大鼠肝纤维化模型,分别于注射后1、4、8周处理动物,采用免疫组化、RT-PCR、W estern b lot等方法对肝组织中CTGF的表达进行检测。结果:免疫组化、W estern b lot结果显示,CC l4注射诱导后,大鼠肝组织中CTGF的表达较正常对照明显增强,且CC l4注射1、4、8周组肝组织中CTGF的表达强度呈明显递增趋势。CTGF主要表达于肝星状细胞胞质中。RT-PCR检测结果显示CTGF mRNA的表达与其蛋白质水平的改变相一致。结论:CTGF作为一种致纤维化因子,其过表达促进肝星状细胞的活化增殖及细胞外基质的形成,从而促进大鼠肝纤维化的发生、发展。     

愈肝颗粒抗肝纤维化及其对Smad4、Smad7影响的实验研究

目的观察愈肝颗粒抗实验性大鼠肝纤维化的疗效及作用机制。方法二甲基亚硝胺诱导大鼠肝纤维化模型,以愈肝颗粒浸膏灌胃进行治疗。HE染色观测肝组织病理学变化并进行肝脏炎症活动度和纤维化程度计分,免疫组化检测Smad4和Smad7在肝内的表达及分布的变化,并用图像分析软件对它们表达的阳性区域面积及光密度进行半定量分析。结果愈肝颗粒组与模型对照组比较：组织病理学显示肝脏炎症及纤维化减轻。炎症活动度和纤维化程度计分明显降低。免疫组化中Smad4表达减少,阳性染色面积（PA）及光密度值（OD）降低,Smad7表达明显增多,PA及OD值增加,P值均〈0.01。结论愈肝颗粒能明显减轻肝脏炎症、坏死及肝纤维化,其作用机制与其下调Smad4,上调Smad7,重建R-Smad/I-Smad平衡有关。     

羟尼酮可阻止大鼠肝星状细胞活化： 基于抑制TGF-β1通路蛋白的磷酸化

目的 探讨羟尼酮对CCl4诱导的大鼠肝纤维化的作用及相关机制。方法 66只雄性SD大鼠按随机数字法分为对照组10只、模型组20只、羟尼酮（100 mg/kg）组12只、羟尼酮（250 mg/kg）组12只、吡非尼酮（250 mg/kg）组12只,采用CCl4皮下注射进行肝纤维化造模,羟尼酮、吡非尼酮予以灌胃给药,处死大鼠后,留取血清检测肝功能,利用肝脏组织检测羟脯氨酸的含量,肝组织进行HE染色和Sirius Red染色,对炎症和纤维化程度进行评分。将人肝星状细胞系LX-2分组：对照组、TGF-β1组、羟尼酮组、吡非尼酮组,经过TGF-β1刺激和羟尼酮、吡非尼酮处理后,Western blot分别检测α-SMA、I型胶原蛋白和磷酸化Smad3、磷酸化p38、磷酸化Erk1/2、磷酸化Akt等磷酸化蛋白。 结果 动物实验显示羟尼酮组大鼠肝功能值有改善,肝组织羟脯氨酸含量明显减少,肝组织纤维化程度显著降低,且均具有统计学意义（P<0.05）。细胞实验发现随羟尼酮浓度的增高,ɑ-SMA和I型collagen蛋白表达水平降低;TGF-β1刺激细胞后,TGF-β信号转导通路中Smad3、P38、ERK、Akt等蛋白的磷酸化水平随着作用时间的延长而增加,但在相同作用时间下,羟尼酮组细胞TGF-β信号转导通路蛋白磷酸化的表达水平低于TGF-β1组细胞（P<0.05）。结论 羟尼酮可抑制TGF-β信号转导通路蛋白的磷酸化,从而阻止TGF-β1介导的肝星状细胞活化,可能是其缓解CCl4诱导的大鼠肝纤维化机制之一。     

中药软肝饮对CCl4诱导的肝纤维化大鼠TGF-1/Smad信号通路的影响

[目的]研究中药软肝饮对CCl4诱导的大鼠肝纤维化肝脏TGF-1及Smad3,Smad7表达的影响,探讨其抗纤维化的作用机制。[方法]Wistar大鼠40只,随机分成正常对照组,模型对照组,软肝饮治疗组,鳖甲软肝片对照组,采用CCl4背部皮下注射构建肝纤维化模型,行HE和VG染色,光镜下观察肝组织肝纤维化程度。同时免疫组化SABC方法检测各组TGF-1、Smad3和Smad7的表达。[结果]与正常对照组相比,模型组TGF-1、Smad3表达明显增强,Smad7表达明显下降。经软肝饮治疗后大鼠肝脏TGF-1表达比模型组减弱。软肝饮同时下调Smad3的表达,上调Smad7的表达。另外,软肝饮组大鼠肝脏病理变化显著改善。[结论]肝炎平对大鼠肝纤维化肝脏TGF-1/Smad信号通路有明显的影响,能抑制CCl4诱导的大鼠肝纤维化,其作用机制可能为抑制TGF-1表达,下调Smad3及上调Smad7的表达。     

傣药雅盼对单侧输尿管梗阻大鼠TGF-β1/Smads信号转导通路的影响

目的 观察傣药雅盼对单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠转化生长因子(TGF)-β1/Smads信号转导通路的影响,从而探讨该药对肾间质纤维化抑制作用的可能机制.方法 120只雄性大鼠行单侧输尿管结扎建立UUO大鼠模型,生理盐水灌胃或给药28 d后收集血清检测尿素氮(BUN)、肌酐(Scr),处死大鼠,取其肾组织行HE染色和Masson染色,免疫组织化学法检测TGF-β1、Smad2、Smad7在肾组织的表达;反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测mRNA的表达;Western blot检测蛋白表达.结果 傣药雅盼各剂量组能降低大鼠BUN、Scr水平,并减轻肾小管-间质炎性细胞及肾间质纤维化程度,同时使TGF-β1、Smad2 mRNA和蛋白表达上调(P＜0.05),而Smad7 mRNA和蛋白表达下调(P＜0.05).结论 傣药雅盼备浓度组均可以在一定程度抑制Smad2 mRNA的表达,上调Smad7 mRNA的表达,通过干预TGF-β1/Smads信号转导通路抑制了TGF-β1在肾组织的表达从而对UUO大鼠肾间质纤维化.     

TGF-β1及其信号蛋白在大鼠腹膜纤维化模型腹膜组织中的表达及可能作用

目的了解TGFβ1/Smads信号蛋白在高浓度葡萄糖透析液及炎症所致大鼠腹膜纤维化模型腹膜组织中的表达及在腹膜纤维化发生中的可能作用。方法24只SD雄性大鼠(180～200g)随机分为4组,每组6只。正常对照组,大鼠不做任何处理;LPS组,LPS用生理盐水稀释为0.6mg/100ml,在第1、3、5、7日按0.6mg/kg体重腹腔注射;4.25%透析液组,大鼠给予每日腹腔注射100ml/kg体重高糖透析液;LPS+4.25%透析液组,除每日腹腔注射100ml/kg体重高糖透析液外,LPS用4.25%透析液稀释为0.6mg/100ml,在第1、3、5、7日按0.6mg/kg体重腹腔注射;于实验第28天杀检动物,取壁层和脏层腹膜组织行光镜及电镜检查。用RTPCR及间接免疫荧光、Western杂交的方法检测αSMA、TGFβ1、Smad3、Smad7、pSmad2/3、ColⅠmRNA和蛋白的表达水平。结果Masson染色显示,与正常对照组比较,4W时各组壁层腹膜组织明显增厚,有大量胶原沉积,其中LPS+4.25%透析液组厚度最为显著(vsLPS组:42μm±3μmvs35μm±4μm,P=0.007,vs4.25%透析液组,42μm±3μmvs20μm±4μm,P=0.000);与正常对照组比较,三组αSMA、ColⅠ和TGFβ1、Smad3、pSmad2/3在脏层腹膜组织中的表达水平显著上调,上述变化以LPS+4.25%透析液组改变最为显著,TGFβ1mRNA为正常对照组的2倍,Smad3mRNA为正常对照组的1.8倍;与正常对照组比较,抑制性信号蛋白Smad7mRNA和蛋白表达水平在其他三组也有不同程度的上调,但Western杂交结果显示,pSmad/Smad7蛋白比值仍明显升高;电镜结果显示,除正常对照组外,各组间皮细胞均有损伤,LPS+4.25%透析液组的间皮细胞损伤最为明显,而且胞浆中出现明显的肌丝和密体。结论TGFβ1/Smads信号蛋白的活化是高浓度葡萄糖透析液和LPS导致大鼠腹膜发生纤维化的共同作用途径。高浓度葡萄糖透析液和LPS可能协同作用通过TGFβ1/Smads通路刺激腹膜间皮细胞转分化,介导腹膜纤维化的发生。     

加味茵芍散对肝纤维化家兔TGF-β/Smad信号通路的影响

[目的]从加味茵芍散对TGF-β/Smad信号通路影响的角度探讨该方对肝纤维化病变的作用。[方法]按0.1 ml/kg的用量腹腔注射CCl4诱导复制家兔肝纤维化模型,50只家兔随机分成模型对照组,秋水仙碱组,加味茵芍散高、中、低剂量组5组,每组10只,通过肝脏病理取材确定肝纤维化病变,同时采用实时定量逆转录-聚合酶链反应法检测TGF-β1mRNA、Smad3mRNA、Smad7mRNA等指标。[结果]与模型组相比,秋水仙碱组和加味茵芍散高、中、低剂量组家兔肝组织TGF-β1mRNA表达明显减弱,差异有统计学意义(P<0.05);加味茵芍散各剂量组、秋水仙碱组与模型组相比家兔肝组织Smad3mRNA的表达量显著性降低(P<0.05);加味茵芍散各剂量组、秋水仙碱组与模型组相比,Smad7mRNA的表达量显著升高(P<0.05)。[结论]加味茵芍散能减轻肝细胞变性,减少胶原的合成与分泌,减轻纤维组织增生,可以下调TGF-β1mRNA、Smad3mRNA的表达,提高Smad7 mRNA的表达。该方对CCl4诱导家兔肝纤维化模型具有一定保护作用,可以延缓肝纤维化的进展,其作用机制可能与调节TGF-β/Smad信号通路有关。     

鳖甲煎改良方对大鼠肝纤维化的作用及其机制研究

目的探讨鳖甲煎改良方对大鼠肝纤维化(hepatic fibrosis,HF)的作用及其机制。方法 SD雄性大鼠90只,随机分6组,每组15只,其中以40%CCl4处理(3 ml/kg)8周复制中毒肝纤维化模型(模型组),复制模型的同时分别用鳖甲煎改良方高剂量组28.4 g/(kg.d)、中剂量组14.2 g/(kg.d)、低剂量组7.1 g/(kg.d)灌胃治疗并且以复方鳖甲软肝片灌胃0.6 g/(kg.d)作阳性对照组治疗6周。以复制模型同样方式与用量于右后腿皮下注射橄榄油及生理盐水灌胃(10 ml/kg.d)作空白对照组。苏木精-伊红(HE)染色观察各组8周后肝纤维化变化程度,RT-PCR检测其转化生长因子β1(transforming growth factor beta one,TGF-β1)、Smad3及Smad7变化,免疫组化(S-P法)观测TGF-β1、smad3、smad7表达情况。结果 8周后,与模型组比较,鳖甲煎改良方高、中、低剂量组和复方鳖甲软肝片组肝小叶结构破坏明显减轻,部分肝细胞脂肪变性,炎性细胞浸润与少量胶原纤维形成;肝组织TGF-β1与Smad3的mRNA及蛋白表达显著减少(P<0.01),smad7 mRNA及蛋白表达明显增加(P<0.01)且鳖甲煎改良方高、中、低剂量组和复方鳖甲软肝片组疗效并无显著差异。结论鳖甲煎改良方能显著改善大鼠肝纤维化,其作用机制可能与鳖甲煎改良方调控TGF-β/smad信号通路有关。