DTT诱导P38核转位与食管癌Eca109细胞凋亡的研究

目的探讨P38的核转位与DTT诱导的食管癌细胞凋亡的关系。方法采用DTT处理食管癌Eca109细胞，未加药组作为对照。流式细胞仪技术检测细胞凋亡率；免疫组化方法检测P38的磷酸化水平及磷酸化P38的核转位情况。结果与对照组相比，DTT处理组细胞凋亡率明显升高。免疫组化结果显示：处理组P38的磷酸化水平明显高于对照组（P〈0．01），且处理组P—P38大部分定位于核内。结论P—P38核转位参与了DTT诱导的食管癌Eca109细胞凋亡。     

DTT与顺铂诱导对食管癌Eca109细胞磷酸化P38表达的影响

目的:探讨磷酸化P38在顺铂和DTT诱导的食管癌Eca109细胞凋亡中的作用.方法:分别用DTT与顺铂诱导处理食管癌Eca109细胞,未加药组作为对照.采用流式细胞仪技术检测细胞凋亡率;用免疫组化方法检测磷酸化P38的表达情况.结果:与对照组相比,DTT处理组及顺铂处理组细胞凋亡率明显升高.免疫组化结果显示:2处理组磷酸化P38的水平均明显高于对照组(P＜0.05);DTT处理组磷酸化P38大部分位于细胞核内,而顺铂组磷酸化P38则主要弥散于细胞浆内.结论:磷酸化P38在DTT和顺铂诱导的食管癌Eca109细胞凋亡时细胞内分布不同,激活的P38可能通过不同途径参与细胞凋亡.     

P38MAPK信号通路对大鼠肝星状细胞凋亡的影响

〗［摘 要］
目的：探讨P38MAPK信号传导通路在乙醛刺激的大鼠肝星状细胞株（HSC-T6）凋亡过程中的作用及P38蛋白表达的变化,为肝纤维化的临床治疗提供依据。方法：实验设阴性对照组（HSC-T6加含10%小牛血清的DMEM培养液）、乙醛组（对照组基础上加乙醛）和实验组（乙醛组基础上加P38MAPK抑制剂SB203580,使其终浓度为4、8、16 μmol·L^-1）,流式细胞术（FCM）检测细胞凋亡率;Western blotting法检测磷酸化P38MAPK表达水平,SABC法检测caspase-3蛋白表达。结果：与对照组比较,乙醛组HSC-T6的凋亡率和caspase-3蛋白阳性表达率均降低（P<0.05或P<0.01）,P38MAPK磷酸化水平表达增高（P<0.01）。抑制剂SB203580作用后,细胞凋亡率逐渐增高(P<0.01);P38MAPK磷酸化水平降低(P<0.01);caspase-3蛋白水平升高（P<0.01）;且随剂量的增加,磷酸化水平不断降低,蛋白表达水平不断升高。结论：P38MAPK抑制剂SB203580能促使乙醛刺激的HSC-T6凋亡,且凋亡的发生可能与SB203580抑制P38MAPK的磷酸化途径和caspase-3的活化有关。     

三氧化二砷影响肝癌细胞血管内皮生长因子表达信号转导机制的初步探讨

目的：探讨三氧化二砷（As2O3）影响人肝癌细胞株HepG2表达血管内皮生长因子（VEGF）的信号转导机制。方法：体外培养肝癌细胞系HepG2,实验分为：①空白组、②对照（As2O3）组、③As2O3＋PKC阻断剂（H7）组、④As2O3＋P38阻断剂（SB203580）组、⑤As2O3＋H7＋SB203580组;半定量RT—PCR技术检测HepG2细胞VEG-FmRNA相对表达量。结果：②、③、④、⑤纽均有VEGF的表达,与①组相比差异有统计学意义（P〈0．01）,③、④组与②组相比无差异;⑤组与②组相比VEGF的表达明显降低,P〈0．05;结论：三氧化二砷可诱导HepG2细胞表达VEGFmRNA,并可能通过PKC和／或P38信号通路影响VEGFmRNA的表达。     

p38蛋白激酶对脂多糖诱导肺泡巨噬细胞NF-κB活化的调控

目的探讨p38蛋白激酶对脂多糖（LPS）诱导肺泡巨噬细胞NF-κB活化的调控机制。方法分离培养肺泡巨噬细胞。设正常对照组、LPS刺激组、SB203580（p38蛋白激酶抑制剂）＋LPS组、PDTC（NF—κB抑制剂）＋LPS组和SB203580＋PDTC＋LPS组。分别采用免疫细胞化学（SP法）和Western blot检测NF—κB、p38蛋白激酶和NF—κB抑制蛋白（I-κB）的表达。结果与正常对照组相比，LPS刺激肺泡巨噬细胞后胞核NF-κB和p38蛋白激酶染色显著增强，而I—κB的表达显著降低（均P〈0．01）。SB203580、PDTC均可显著降低LPS刺激的肺泡巨噬细胞NF-κB，p38蛋白激酶胞核染色阳性细胞的百分比，并显著增强I—κB的表达（均P〈0．05）。同时应用PDTC和SB203580预孵育肺泡巨噬细胞，与LPS刺激组相比，p38蛋白激酶和NF—κB胞核染色阳性细胞百分比均显著降低（P〈0．05），I-κB的表达显著增强（P〈0．05），但分别与SB203580＋LPS和PDTC＋LPS组相比，差异均无显著性意义（均P〉0．05）。结论LPS刺激肺泡巨噬细胞p38蛋白激酶和NF—κB活化；p38蛋白激酶可能通过调节I-κB降解而调控NF—κB的活化，NF—κB可能是p38信号途径下游的最重要位点。     

桦木酸通过抑制P38 MAPK 磷酸化减轻横纹肌溶解致急性肾损伤

目的：探讨P38 丝裂酶原活化蛋白激酶（mitogenactivated protein kinases,MAPK）在横纹肌溶解致急性肾损伤中的变化和作用,以及桦木酸的干预效应。方法：将40 只Wistar大鼠随机分为五组：正常对照组（C,n=8）,AKI 组（A,n=8）,AKI+ 桦木酸组（AB,n=8）,AKI+SB203580 组（AS,n=8）,AKI+ 桦木酸+SB203580 组（ABS,n=8）。通过后肢甘油肌注法建立横纹肌溶解致急性肾损伤模型。AB、AS 组分别给予腹腔注射桦木酸和 SB203580,ABS 组两药合用。24 小时后,生化分析仪检测血肌酐、尿素、肌酸激酶水平;HE 染色观察肾脏病理变化;Western blot 法检测肾组织pP38 MAPK、P38 MAPK 和cleaved Caspase-3 表达;ELISA 法检测肾组织TNFα和IL6水平。结果：甘油肌注后,肾脏出现急性损伤,pP38/P38 比值升高。BA和SB203580 干预后pP38/P38 比值降低。在本实验剂量下,BA 干预组的肾功能指标、病理损伤评分、细胞凋亡、IL6水平和pP38/P38 比值均低于SB203580 干预组,而TNFα水平基本一致。BA+ SB203580 干预组的总体治疗效果与BA 组相比无明显差异。结论：在横纹肌溶解致 急性肾损伤中,P38 MAPK 被激活,使用SB203580 抑制P38 MAPK 的磷酸化可降低肌酐尿素水平,抑制肾脏炎症反应,减轻肾病理损伤和细胞凋亡。桦木酸至少部分通过抑制P38 MAPK磷酸化发挥肾脏保护作用。     

榄香烯和PD98059诱导人胃癌SCG-7901细胞株凋亡及其机制的探讨

目的：探讨榄香烯及PD98059对人胃癌SCG-7901细胞株凋亡的影响,及其与ERK1／2、P38MAPK信号通路的关系。方法：用不同浓度的榄香烯和PD98059处理人胃癌SCG-7901细胞,体外细胞增殖抑制实验（MTT）法检测细胞增殖情况;Western—blot法检测ERKl／2、磷酸化ERKl／2（p-ERK1／2）和磷酸化P38（p-P38）的表达;RT-PCR检测bcl-2mRNA及baxmRNA的表达;TUNEL法检测胃癌细胞凋亡并计算凋亡指数。结果：榄香烯和PD98059单独作用都有抑制胃癌细胞增殖的作用,前者呈浓度和时间依赖性,后者则呈时间依赖性但无浓度依赖性,两药联合作用时对胃癌细胞增殖的抑制作用显著大于单一用药时（P〈0．05）;随榄香烯的浓度增加p-ERK1／2蛋白的表达量增加（P〈0．05）,总FRK1／2无明显变化;榄香烯（0．08mg／mL）、PD98059（50μmol／L）及榄香烯＋PD98059组作用胃癌细胞24h,p-P38的表达均高于对照组（P〈0．05）,且榄香烯＋PD98059组较榄香烯组或PD98059组更高（P〈0．05）;随榄香烯浓度的增加,baxmRNA的表达增加,bcl-2mRNA的表达降低,且榄香烯＋PD98059组表现最显著;实验组细胞凋亡率均高于对照组（P〈0．05）,具有浓度依赖性（P〈0．05）,且榄香烯＋PD98059组的凋亡率明显高于单一作用组（P〈0．05）。结论：榄香烯及PD98059可以抑制胃癌细胞增殖,前者具有时间和浓度依赖性;榄香烯及PD98059还可以促进胃癌细胞凋亡。榄香烯抑制细胞增殖、促进细胞凋亡的机制包括促进ERKl／2磷酸化和上调P-P38MAPK信号通路的表达;PD98059抑制ERKl／2的磷酸化,但通过上调p-P38MAPK信号通路的表达而发挥其细胞调节作用。     

低氧培养的PC12细胞凋亡的研究

目的研究PCI2细胞在低氧状态下,内源性一氧化碳（CO）的生成及其导致细胞凋亡的作用。方法将PCI2细胞分为常氧对照组（C组）、低氧组（H组）和低氧加血红素氧合酶（HO）抑制剂卟啉锌-9组（H＋ZnPP组）。检测2h时间点PCI2细胞血红素氧合酶的表达及内源性CO水平和细胞凋亡率。结果氧应激状态下,HO-1明显表达,HO-2无表达;H组HO水平与C组、H＋ZnPP组比较明显升高（P〈0．01）,H＋ZnPP组的HO水平高于C组（P〈0．01）;内源性CO水平以及细胞凋亡率与C组、H＋ZnPP组比较均明显升高（P〈0．01）。结论低氧状态下,PCI2细胞表面HO-1高表达,HO-2无明显表达,PC12细胞的凋亡率与内源性CO的水平密切相关,提示HO／内源性CO可能导致细胞凋亡的发生。     

雷公藤诱导皮肤T细胞淋巴瘤Hut102的凋亡及机制

目的探讨雷公藤内酯醇（TP）诱导皮肤T细胞淋巴瘤Hut102细胞株的凋亡及机制。方法采用MTT法检测Hut102细胞的增殖抑制率,Annexin v-FITC/PI双染流式细胞术检测Hut102细胞的凋亡率,Western印迹法检测Hut102细胞中磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶（p38MAPK）、caspase-3、热休克蛋白27（Hsp27）的表达。结果雷公藤内酯醇可诱导Hut102细胞凋亡（P〈0.01）,磷酸化p38MAPK、caspase-3被激活,同时抑制Hsp27的表达。用p38MAPK特异性抑制剂SB203580干预后,雷公藤内酯醇诱导Hut102细胞凋亡率下降,磷酸化p38的表达降低,caspase-3激活被抑制,Hsp27的表达增加。结论雷公藤内酯醇可诱导Hut102细胞凋亡,该作用可被p38MAPK特异性抑制剂SB203580显著抑制,提示雷公藤内酯醇可能通过激活p38MAPK信号通路使部分Hut102细胞产生凋亡。     

吡格列酮对炎性因子所致胰岛细胞凋亡的保护作用

目的：探讨Ppar-γ激动剂吡格列酮（PGZ）对炎性因子所诱导的胰岛细胞凋亡的保护作用，初步研究其作用机制。方法：Western—blotting检测NIT-1细胞的Ppar-γ受体蛋白表达；联合IL-1β及IFN-γ作用于体外培养的胰岛细胞株NIT-1，建立胰岛细胞炎症模型，观察（IL-1β＋IFN-γ）与PGZ预孵育NIT-1细胞的凋亡；MTT法、流式细胞术检测细胞生长抑制率及凋亡率，比色法检测凋亡细胞caspase-3比活性。结果：NIT-1细胞表达Ppat-γ蛋白；（IL—1β＋IFN-γ）组作用24h对NIT-1细胞生长抑制率、凋亡率、caspase-3比活性分别为49．8％、28．0％、3．5，对照组3项指标分别为0％、4．3％、1，两组比较均有十分显著差异（P〈0．01）；PGZ组3项指标分别为2．7％、7．1％、1.3，与对照组比较，均无明显差异（P〉0．05）；（PGZ＋IL-1β＋IFN-γ）组的3项指标分别为18．6％、14．8％、1．5，与（IL-1β＋IFN-γ）组比较均有差异（P〈0．05），与对照组比较分别为P〉0．05，P〈0．05，P〈0．05。结论：NIT-1细胞表达Ppar-γ受体蛋白；联合IL—1β及IFN-γ明显诱导NIT-1细胞凋亡，PGZ显著抑制IL-1β及IFN-γ诱导的NIT-1细胞凋亡，其机制与降低caspase-3活性有关。     

TNF-α 通过 p38 丝裂原活化蛋白激酶信号通路对小胶质细胞HMGB1 表达的调控作用

目的：观察P38丝裂原活化蛋白激酶(p38 mitogen-activated protein kinase,p38 MAPK)抑制剂SB203580对 TNF-α诱导的原代培养大鼠小胶质细胞高迁移率族蛋白B1(high mobility group protein B1,HMGB1)表达的影响。方法： 采用原代培养大鼠小胶质细胞,设立对照组、TNF-α组(25 ng/mL)、TNF-α(25 ng/mL)+SB 203580组(10 μmol/L)、SB 203580组(10 μmol/L),各组细胞经药物处理16 h后分别用ELISA法检测细胞培养上清中HMGB1的表达情况,Western 印迹检测细胞HMGB1和磷酸化p38MAPK表达情况,用反转录PCR检测HMGB1 mRNA表达。结果：经TNF-α刺激 后,大鼠小胶质细胞及其培养上清液中HMGB1蛋白表达增高;SB 203580可抑制TNF-α诱导的磷酸化p38 MAPK表达 (P<0.01),同时下调HMGB1mRNA和HMGB1蛋白的表达。结论：TNF-α可诱导小胶质细胞晚期炎症因子HMGB1的表 达,并且其诱导机制与p38 MAPK被快速激活相关。     

The Relationship between p38MAPK and Apoptosis during Paclitaxei Resistance of Ovarian Cancer Cells

To investigate the relationship between p38 mitogen-activated protein kinase (p38MAPK) and cell apoptosis during the paclitaxel resistance of ovarian carcinoma cell lines, flow cytometry (FCM) and PI staining were employed to determine the effect of p38MAPK inhibitor SB203580 on the apoptosis of A2780/Taxol cells, a drug-resistant human ovarian carcinoma cell line. p38MAPK protein expression in SB203580-treated cells was immunochemically measured. The 50% inhibition concentration (IC(50)) of paclitaxel on A2780/Taxol cells was determined by MTT assay. MDR-1 mRNA, and expression of p38MAPK and phospho-p53 protein were detected by RT-PCR and Western blotting, respectively. The apoptosis rate of A2780/Taxol cells was (19.7+/-1.04)% 24 h after SB203580 treatment. A significant difference in apoptosis rate was found among experiment group, control group and untreated group (P<0.05). The relative reversal rate of A2780/Taxol cells to paclitaxel was (57.18+/-2.01)%. As compared with the control group and the untreated group, p38MAPK protein and MDR-1 mRNA in SB203580-treated cells was substantially decreased. The expression of p53 protein was significantly increased. It is concluded that p38MAPK pathway is related to paclitaxel resistance of ovarian carcinoma, and blockade of this pathway can promote the apoptosis of the drug-resistant cells and reverse the drug-resistance. Moreover, p38MAPK-mediated apoptosis in paclitaxel-resistant ovarian carcinoma cells depends on the activation of p53.     

高糖刺激人视网膜色素上皮细胞诱导型一氧化氮合酶表达及与p38 MAPK信号通路关系

目的:观察高糖刺激体外培养的人视网膜色素上皮(human retinal pigment epithelium,RPE)细胞表达诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)的作用及其与p38信号通路(p38 mitogen activated protein kinase,p38 MAPK)的关系,从而进一步探讨糖尿病视网膜病变的发病机制.方法:培养人RPE细胞,分为对照组、高糖组、高糖 SB203580组和甘露醇组,采用四甲基氮唑蓝(MTT)比色法检测细胞活力,免疫荧光染色法观察RPE细胞中磷酸化p38 MAPK和iNOS的蛋白表达.结果:①MTT检测结果:高糖可以抑制RPE细胞增殖,加入特异性p38 MAPK抑制剂SB203580预处理后,抑制作用减弱;②免疫荧光法检测结果:与对照组相比,高糖组磷酸化p38 MAPK,iNOS蛋白表达明显增高;加入SB203580预处理后,iNOS表达被显著抑制.结论:高糖能够抑制RPE细胞增殖,通过活化p38 MAPK信号通路刺激RPE细胞iNOS的表达,在糖尿病视网膜病变的发生发展中起重要作用.     

p38MAPK抑制剂SB203580减轻罗哌卡因对PC12细胞的毒性

目的：探讨p38MAPK抑制剂SB203580对罗哌卡因诱发大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞(PC12)的毒性的影响及 其机制。方法：将PC12细胞分为对照组(N组)、罗哌卡因组(R组,15 mmol/L盐酸罗哌卡因)、罗哌卡因+SB203580组 (R+S组,15 mmol/L盐酸罗哌卡因+10 μmol/L SB203580)。培养48 h后行3组细胞计数并采用MTT法检测细胞存活率; 采用蛋白质印迹法检测各组磷酸化p38(p-p38)、活化的caspase-3的表达以及细胞质中细胞色素C(cytochrome C,Cyt C) 的含量。结果：与N组比较,R组和R+S组的PC12细胞数目及细胞存活率均显著减少(均P<0.05);且R+S组的PC12细胞 数目和存活率较R组显著上升(均P<0.05)。与N组比较,R组和R+S组p-p38,活化的caspase-3的表达以及细胞质中Cyt C 的含量显著增加(均P<0.05);与R组比较,R+S组p-p38,活化的caspase-3的表达以及细胞质中Cyt C的含量明显减少(均 P<0.05)。结论：抑制p38磷酸化可减轻罗哌卡因对PC12细胞的毒性作用,其机制可能与减少释放入细胞质的Cyt C和 caspase-3的活化有关。     

The relationship between p38MAPK and apoptosis during paclitaxel resistance of ovarian cancer cells

Summary To investigate the relationship between p38 mitogen-activated protein kinase (p38MAPK) and cell apoptosis during the paclitaxel resistance of ovarian carcinoma cell lines, flow cytometry (FCM) and PI staining were employed to determine the effect of p38MAPK inhibitor SB203580 on the apoptosis of A2780/Taxol cells, a drug-resistant human ovarian carcinoma cell line. p38MAPK protein expression in SB203580-treated cells was immunochemically measured. The 50% inhibition concentration (IC₅₀) of paclitaxel on A2780/Taxol cells was determined by MTT assay. MDR-1 mRNA, and expression of p38MAPK and phospho-p53 protein were detected by RT-PCR and Western blotting, respectively. The apoptosis rate of A2780/Taxol cells was (19.7±1.04)% 24 h after SB203580 treatment. A significant difference in apoptosis rate was found among experiment group, control group and untreated group (P<0.05). The relative reversal rate of A2780/Taxol cells to paclitaxel was (57.18±2.01)%. As compared with the control group and the untreated group, p38MAPK protein and MDR-1 mRNA in SB203580-treated cells was substantially decreased. The expression of p53 protein was significantly increased. It is concluded that p38MAPK pathway is related to paclitaxel resistance of ovarian carcinoma, and blockade of this pathway can promote the apoptosis of the drug-resistant cells and reverse the drug-resistance. Moreover, p38MAPK-mediated apoptosis in paclitaxel-resistant ovarian carcinoma cells depends on the activation of p53. This project was supported by a grant from R&D program of Heilongjiang Province (No. GB05C402-11).     

丝裂原活化蛋白激酶在力达霉素抑制鼠骨髓瘤细胞增殖和诱导凋亡中的作用

目的: 研究力达霉素(LDM)对鼠骨髓瘤细胞丝裂原活化蛋白激酶(MAPKs) 信号传导通路的影响及MAPKs在LDM抑制鼠骨髓瘤细胞增殖和诱导凋亡中的作用,为LDM治疗人多发性骨髓瘤的研究提供依据。方法: 选取处于对数生长期鼠骨髓瘤细胞株SP2/0,随机分为空白对照组、4种不同浓度LDM组,采用Western blotting 方法检测各组细胞48 h后MAPK家族的三个主要成员c-Jun氨基末端激酶(JNK)、细胞外信号调节激酶(ERK)和p38 MAPK的表达水平。选取处于对数生长期SP2/0,随机分为对照组、LDM组、SP600125组(JNK抑制剂)、SB203580组(p38抑制剂)、U0126组(ERK抑制剂)、LDM+SP600125组、LDM+SB203580组和LDM+U0126组,采用MTS法和流式细胞术分别检测各组细胞增殖和凋亡情况。结果: 细胞培养48 h后,不同浓度LDM组JNK、ERK和p38 MAPK的表达水平高于空白对照组（P<0.05）;各抑制剂组细胞增殖率和细胞凋亡率与空白对照组比较差异无统计学意义(P>0.05),即对细胞的增殖抑制和凋亡诱导作用均不明显;但LDM+SP600125组、LDM +SB203580组LDM对细胞的增殖抑制和凋亡诱导作用均降低（P<0.05）,而LDM+U0126组LDM对细胞的增殖抑制和凋亡诱导作用则增强（P<0.05）。结论: LDM能够通过激活JNK、p38 MAPK抑制鼠骨髓瘤细胞SP2/0细胞增殖,诱导其凋亡。     

褪黑素联合顺铂对人食管癌Eca109细胞株的增殖抑制作用研究

目的：观察褪黑素（Mel）联合顺铂（DDP）对人食管癌Eca109细胞增殖和凋亡的影响.方法：以DDP 2.5 mg/L、不同浓度Mel及两药联合作用于食管癌Eca109细胞.通过MTT实验检测用药后对食管癌Eca109细胞增殖的影响,并计算抑制率;通过集落克隆形成实验观察用药后对细胞集落克隆形成的影响;通过流式细胞仪检测用药后细胞凋亡率的变化.结果：DDP 2.5 mg/L与不同浓度Mel联合用药组对食管癌Eca109细胞生长抑制率均明显高于单独使用DDP或Mel组（P＜0.01）;10-5 mol/L Mel诱导人食管癌Eca109细胞的24 h凋亡率为7.8%,10-5 mol/L Mel与2.5 mg/L DDP联合刺激人食管癌Eca109细胞的24 h凋亡率为32.0%,高于DDP本身诱导的24 h凋亡率9.7%（P＜0.01）.结论：Mel可增强DDP对人食管癌Eca109细胞增殖的抑制作用,并增强其诱导凋亡作用,为临床食管癌的治疗提供了一定的实验研究基础.