重编程人皮肤成纤维细胞为iPS细胞的研究

目的探讨高效建立人多能性细胞的方法。方法利用经典的Yamanaka方法及Oct4病毒的重复感染,诱导人皮肤成纤维细胞为诱导的多能性干(iPS)细胞。通过AKP染色及分化能力,验证其多潜能特性。结果通过Oct4病毒的重复感染,将人皮肤成纤维细胞重编程为iPS细胞;所建立的iPS细胞AKP染色阳性,免疫缺陷裸鼠的皮下获得了含三胚层结构的畸胎瘤。结论通过Oct4病毒的重复感染,成功的将人皮肤成纤维细胞重编程为iPS细胞。     

iPS细胞：人造肿瘤细胞？

各国争相发展的重点项目 iPS技术,即诱导性多能干细胞技术,是一种将成体成熟、分化的体细胞重编程获得类似胚胎干细胞的新兴技术。2007年11月美国和日本科学家分别独立宣布可将人类皮肤细胞转化为iPS细胞。这一发现被《自然》和《科学》杂志分别评为2007年第一和第二大科学进展。之后,iPS细胞研究迅猛发展,不同的国家和实验室纷纷报道了多种方法建立的iPS细胞系。     

鼠星形胶质细胞重编程为诱导多潜能干细胞的研究

目的研究星形胶质细胞重编程为诱导多潜能(iPS)干细胞的可行性,为进一步研究iPS细胞诱导技术奠定基础。方法用分别含Oct4,Sox2,Klf4和c-myc因子的4种逆转录病毒载体病毒颗粒感染星形胶质细胞,获得iPS细胞并进行鉴定。结果感染后第28天具有胚胎干细胞形态的克隆出现,诱导效率为(0.015±0.005)%,且碱性磷酸酶(AP)染色及SSEA-1和Oct4免疫荧光染色均显阳性。结论星形胶质细胞可以重编程为iPS细胞,进一步证明了iPS细胞诱导技术的普遍适用性。     

诱导性多能干细胞的来源 优化及应用

<正>诱导性多能干细胞(induced pluripotent stem cells,iPS cells)可来源于人和动物细胞,可通过导入特定的几个转录因子转染直接诱导胎儿、新生儿和成年动物体细胞,使其重编程为iPS细胞。这相对于胚胎干细胞(embryonic stem cells,ES cells)的来源更方便、更丰富[1]。iPS细胞的产生克服了使用传统方法的伦理问题,iPS细胞具有和胚胎干细胞类似的功     

诱导性多能干细胞技术的研究进展

诱导鼠成纤维细胞转变为多能干细胞的成功掀起了世界范围内诱导性多能干细胞(iPS)研究的热潮。iPS来源广泛,具有干细胞的分化全能性,避开了取材和应用的伦理问题,在医学领域具有广阔的应用前景,如构建人类疾病模型,用于特定细胞治疗,培育转基因动物用于器官移植以及生物制药等领域。目前iPS结合基因治疗和细胞移植疗法的成果已经应用到了动物疾病模型上。此外,该技术也为研究细胞重编程机制和人类疾病的病理过程提供了新平台。     

小鼠骨髓间充质干细胞、骨髓单核细胞和胚胎成纤维细胞重编程为诱导性多能干细胞的效率比较

目的比较小鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)、小鼠骨髓单核细胞(BM-MNCs)和小鼠胚胎成纤维细胞(MEFs)重编程为诱导性多能干细胞(iPS细胞)的效率。方法用慢病毒LV-ef1a-mOct4-IRES-EGFP、LV-ef1a-mSox2-IRES-EGFP、LV-ef1a-mKlf4-IRES-EGFP和LV-ef1a-mc-Myc-IRES-EGFP感染BMSCs、BM-MNCs和MEFs,通过计算碱性磷酸酶染色阳性克隆数比较这3种细胞重编程为iPS细胞的效率。用胚胎干细胞表面标记检测、胚胎干细胞内源基因检测、拟胚体形成实验和畸胎瘤形成实验验证重编程获得的iPS细胞的多能性。结果起源于小鼠BMSCs、BM-MNCs及MEFs的3种iPS细胞均能形成边缘光整的致密克隆,可表达干性基因Nanog、Rex-1、SSEA-1,并能在体内外分化为三胚层组织。但是BMSCs来源的碱性磷酸酶阳性克隆数低于BM-MNCs和MEFs来源的克隆数。结论小鼠BMSCs、BM-MNCs及MEFs均可重编程为iPS细胞,但BMSCs重编程为iPS细胞的效率低于BM-MNCs和MEFs。     

诱导多能干细胞中几种关键基因的研究及iPS潜在医学价值

体细胞重编程为诱导多能干细胞中涉及到几种基因,这几种基因在维持细胞全能性及自我更新中的具有重要作用.本文论述这几种基因的功能.论述iPS在医学领域中潜在价值.     

诱导性建立多能干细胞系

目的建立多能干细胞系,并鉴定其是否具有正常于细胞的特性。方法将原代皮肤标本用胶原酶消化处理,利用成纤维细胞培养基进行培养,然后感染病毒。对挑选的人成体细胞来源的iPS克隆进行扩大培养,并对克隆进行免疫荧光检测和lit-PCR检测,确定表达的分子标志,采用体外三胚层分化来鉴定其生物学特性。结果所获得的iPS细胞经鉴定具有碱性磷酸酶活性。并表达Nanog、SSEA-4、Sox2、TRA-1-60等干细胞特异标记物,可形成拟胚体并在体内外可以分化为三胚层的细胞类型。结论成功建立了iPS细胞系,为今后的研究提供了良好的细胞模型。     

Krüppel样因子4在肺纤维化中的作用研究现状

Krüppel样因子4(Krüppel-like factor 4,KLF4)是体细胞重编程为诱导多能干细胞(iPS细胞)的重要诱导因子之一,它参与调节细胞的增殖、分化和凋亡,对于疾病发生发展的作用具有一定的环境依赖性,但其在肺纤维化发生发展过程中的作用尚未完全清楚。巨噬细胞在肺纤维化早期炎性阶段起重要作用,而成纤维细胞在纤维生成期及纤维化期起重要的作用,KLF4对于巨噬细胞和成纤维细胞的调节,可能对肺纤维化的发生发展起重要作用。     

决定细胞命运的分子机制研究获得重大突破

<正>由于能使成体细胞"返老还童"为干细胞,诱导多功能干细胞(iPS细胞)是近年来干细胞领域的研究热点。中国科学院广州生物医药与健康研究院裴端卿研究员、陈捷凯副研究员等人经过多年努力,近日破解了iPS细胞诱导过程中一个极为重要的障碍,论文2日在线发表在《自然.遗传学》杂志上。     

诱导性多能干细胞形成过程中转录因子的研究进展

诱导性多能干细胞(iPS)是以反转录病毒为载体将胚胎特异性转录因子导入体细胞,使其诱导分化为具有胚胎干细胞(ESCs)特性的细胞。这种多能干细胞在细胞形态、增殖速率、致瘤性、基因表达以及形成嵌合小鼠的能力上与ESCs有许多相似之处,将来可能成为ESCs在临床应用中的替代。现对iPS细胞相关的几种转录因子及其在重编程过程中的作用,以及转导基因的选择予以综述。     

Sox2、Klf4、Oct4、c-Myc基因编程脐带基质间充质细胞

目的 探讨利用Sox2、Klf4、Oct4、c-Myc基因将脐带基质间充质细胞（UMC）编程为多潜能干细胞（iPS）.方法 原代分离培养UMC细胞,包装生产逆转录病毒感染细胞,将感染后细胞接种到饲养层细胞培养,镜下观察细胞形态学变化.对编程后细胞进行碱性磷酸酶（AP）染色、检测细胞内源多能基因表达量和体内分化畸胎瘤实验.结果 原代获得UMC细胞,被编程细胞形态类似于胚胎干细胞,AP染色阳性,内源多能基因Oct4、Sox2、Nanog、Rex1表达量增高,体内分化为畸胎瘤.结论 利用Sox2、Klf4、Oct4、c-Myc基因可将UMC细胞编程为iPS细胞.     

诱导多功能干细胞分化为脊髓神经元的代表性标志物的鉴定

近期引起广泛关注的诱导多功能干细胞(induced pluripotent stem cells,iPS)的成功开发为神经再生提供了一条新的思路.由病毒或非病毒的方法传输重要的转录因子对体细胞进行重编程而产生的iPS细胞,除了拥有胚胎干细胞所具有的各种分化潜能外,它还绕开了人类胚胎干细胞研究所带来的伦理问题,为再生医学和组织移植提供充足的细胞来源.然而多能性的干细胞注射至体内并不能自动分化为各种成体细胞,因此移植多能性干细胞的关键一步就是需要在体外优化分化条件使之达到最恰当、最适宜移植的程度,这样才能够在移植后迁移至神经受损部位,达到在结构和功能上的修复或替代.本篇综述以细胞治疗神经损伤中的脊髓损伤(spinal cord injury,SCI)疾病模型为出发点,以iPS细胞向脊髓神经元分化为方向,综述探讨鉴定与区别脊髓中的神经元的各类特定标志物.该篇文章的重要研究意义在于一方面利用这些特定的标志物可以区分从多能干细胞分化为各类神经细胞的混合细胞鉴定筛选出分化为神经元细胞的比例,从而找出最优分化条件;而在另一方面利用这些标志蛋白在体内鉴定已经移植的神经细胞前体如何可以进一步分化为神经元细胞,从而可以进一步探讨移植的不同神经细胞在再生修复中的作用与机制.     

microRNA对体细胞重编程为神经细胞的研究进展

在神经系统科学中,体细胞重编程形成神经细胞是一项新的技术,体细胞重编程在医学上具有重大应用前景,它能产生患者专一化的干细胞或功能细胞,为细胞治疗带来新的曙光。很多实验表明,表达特异的神经转录因子可以直接把体细胞转变为神经细胞。microRNA(miRNA)广泛存在于多细胞生物中并在神经发育过程中的神经元、神经祖细胞及神经胶质细胞中有特定表达,并且具有重编程作用。就miRNA对体细胞重编程为神经细胞的研究做一简要综述,探究miRNA对体细胞重编程的作用和机制。     

两种重编程系统诱导人牙源性多潜能干细胞的对比研究

目的：对比研究两种人牙源性多潜能干细胞重编程体系的特点。方法分别利用 STEMCCA 慢病毒／饲养层和仙台病毒／基质胶两种重编程系统,将人根尖乳头干细胞重编程为 iPS 细胞,比较两种方法的诱导效率、诱导工作量、iPS 细胞非整倍体核型比例、外源性基因消除难易程度等情况。结果 STEMCCA 重编程体系需要制备饲养层细胞 MEF,重编程效率约为0．1％,后期经 Cre-Loxp 酶切技术可得到无外源性转录基因的 iPS 细胞。仙台病毒重编程体系为无饲养层培养,基质胶制备方便、标准统一,重编程效率约为0．7％,明显高于 STEMCCA 系统（P ＜0．05）,外源性病毒和转录基因经自然传代后逐渐消除。结论与 STEMCCA 系统相比,仙台病毒／基质胶体系更适于人牙源性 iPS 细胞的诱导。     

诱导性多能干细胞(iPS细胞)研究现状

iPS细胞全称为诱导性多能干细胞,是由体细胞诱导而成的干细胞,具有和胚胎干细胞类似的发育多潜能性。2006年7月,日本科学家首次宣布发现了将小鼠皮肤细胞转化为多能干     

诱导性多能干细胞研究进展

2006年日本京都大学Yamanaka从与小鼠胚胎干细胞(embryonic stem cells,ES)增生分化的24个候选因子中筛选出Oct4、 Sox2、 c-Myc、 Klf4等4个转录因子将成纤维细胞诱导为ES类似的细胞,将其命名为iPS细胞(inducedpluripotent stem cell)[1].从此,人们对iPS细胞的研究便迅速开展起来.     

使用诱导性多能干细胞（iPS cells）修复心脏

梅约临床和医疗中心（Mayo Clinic）研究人员进行的一项概念验证研究显示,诱导性多能干细胞（iPS cells）可用于心脏病治疗。诱导性多能干细胞是被重新编程从而进入一个类似胚胎干细胞状态的成年细胞。在该项研究中,研究人员对普通的成纤维细胞进行重新编程,有助于结痂的细胞（譬如那些因心脏病发作产生的细胞）转化为干细胞,修复因心肌梗死造成的心脏损伤。     

多基因修饰小鼠诱导多潜能干细胞分化为胰岛素分泌细胞

目的观测胰岛素转录关键调控因子胰腺十二指肠同源框蛋白1(PDX-1)、神经分化因子1(NeuroD1)及肌腱膜纤维肉瘤癌基因同系物A(MafA)对小鼠诱导多潜能干细胞(iPS细胞)分化为胰岛素分泌细胞的作用。方法筛选鉴定小鼠胚胎成纤维细胞(MEFs)重编程的iPS细胞。以重组腺病毒Ad-mPDX-1-IRES-GFP、Ad-mNeuroD1-IRES-GFP、Ad-mMafA-IRES-GFP联合感染小鼠iPS细胞,体外培养后以RT-PCR检测胰岛B细胞功能基因表达;免疫荧光检测胰岛素蛋白表达及定位;ELISA检测不同糖浓度(0、5、10、20、30、40mmol/L)下胰岛素的分泌量。结果起源于MEFs的iPS细胞能形成边缘光整的致密克隆,表达干性基因Nanog、Rex-1、SSEA-1,并能在体内外分化为三胚层组织,显示MEFs被成功地重编程为iPS细胞。Ad-PDX-1-IRES-GFP、Ad-mNeuroD-IRES-GFP、Ad-mMafA-IRES-GFP感染的小鼠iPS细胞能分化为胰岛类B细胞,RT-PCR结果显示其胰岛B细胞功能基因的表达与小鼠胰岛B细胞株MIN6相似。免疫荧光检测可见胰岛类B细胞内有胰岛素表达。ELISA检测结果显示胰岛类B细胞对不同浓度葡萄糖有较好的反应性。结论胰岛素转录关键调控因子PDX-1、NeuroD1和MafA三者能协同作用,使小鼠iPS细胞分化为具有显著胰岛素合成和分泌能力的胰岛素分泌细胞。     

日本完成首例再编程干细胞异体移植术

正不久前,一位60岁的日本男性成为全球第一个接受由他人诱导多能干(iPS)细胞生成的细胞的人。日本一个研究小组为眼疾患者成功移植了由他人的iPS细胞培养而成的视网膜细胞。研究小组称,这是世界首例iPS细胞"异体移植"手术,与利用患者本人的iPS细胞相比,费用和时间都大幅减少。日本理化学研究所宣布,他们与神户市立医疗中心中央市民医院等机构合作,将异体iPS细胞培养成的视