携带小鼠 KLF4 基因重组慢病毒的构建及对 RAW264.7 细胞增殖的影响

目的 构建小鼠 Krüppel 样因子 4（KLF4）慢病毒表达载体,并建立 KLF4 过表达小鼠腹腔巨噬细胞 RAW264.7 细胞株。方法 采用聚合酶链式反应（PCR）技术扩增目的基因 KLF4 后,构建重组质粒 pLVX-KLF4,并 通过 PCR、双酶切和测序方法对其进行鉴定。重组质粒与 pSPAX2、pMD2.G 辅助质粒通过 Lipofectamine® 3000 共转 染 293T 细胞,包装病毒并测定病毒滴度。将获得的慢病毒感染 RAW264.7 细胞,实时定量 PCR 法检测 KLF4 mRNA 的表达。分选流式细胞仪分选 GFP 阳性 RAW264.7 细胞。流式细胞术检测 KLF4 对 RAW264.7 细胞周期的影响。 EdU 法检测 KLF4 对 RAW264.7 细胞增殖的影响。结果 经 PCR、双酶切鉴定和测序证实,成功构建了包含小鼠 KLF4 基因的慢病毒穿梭质粒,RT-PCR 证实 Lenti-KLF4 感染的 RAW264.7 细胞中 KLF4 mRNA 表达高于未感染的 对照组 RAW264.7 细胞（P＜0.05）。初次浓缩后测定小鼠 KLF4 基因重组慢病毒的滴度为 2.05×108 TU/mL。分选出 KLF4 过表达的 RAW264.7 细胞。KLF4 过表达的 RAW264.7 细胞周期变化显示为 S 期延长,G0/G1 期缩短。EdU 检 测显示 KLF4 过表达的 RAW264.7 细胞增殖活性增高。结论 成功构建了 KLF4 的慢病毒表达载体,并建立 KLF4 过表达的 RAW264.7 细胞株,KLF4 过表达促进了 RAW264.7 细胞的增殖。     

土槿乙酸对LPS诱导的RAW 264.7源性巨噬细胞表型偏移的影响

【目的】观察中药有效成分土槿乙酸(pseudolaric acid B,PB)对脂多糖(lipopolysaccharudes,LPS)诱导的RAW264.7源性巨噬细胞表型偏移的影响,初步探讨其可能的作用机制。【方法】LPS诱导小鼠RAW264.7源性巨噬细胞建立体外细胞模型,实时定量PCR法检测PB处理前后RAW264.7源性巨噬细胞表型偏移的变化,划痕实验和流式细胞术分别检测细胞迁移能力及细胞周期。【结果】PB能够降低LPS诱导的RAW264.7源性巨噬细胞M1表型标志物IL-1β、i NOS、TNF-α的m RNA表达水平,提高M2表型标志物Arg1、Mrc1的m RNA表达水平,使其细胞迁移能力降低、细胞阻滞在G0和G2期。【结论】PB可抑制LPS诱导的RAW264.7源性巨噬细胞向M1型偏移,对巨噬细胞中介的相关疾病可能具有潜在的免疫调节作用。     

干扰NaV1.9对RAW264.7细胞增殖、吞噬和迁移的影响

目的 应用RNA干扰技术沉默RAW264.7小鼠巨噬细胞中电压门控性钠通道(VGSCs/NaVs)α亚单位NaV1.9基因,建立稳定干扰细胞株,并观察其对细胞增殖活性、吞噬能力和迁移功能的影响.方法 通过LipofectamineTM2000将短发夹RNA(shRNA)干扰质粒转染至RAW264.7细胞,经G418筛选获得稳定细胞株.用实时定量聚合酶链反应(RT-PCR)鉴定干扰效率,CCK-8法测定稳定细胞株的增殖活性,流式细胞术检测细胞的细胞周期及吞噬能力,Transwell小室法检测细胞的迁移功能.结果 成功建立稳定干扰NaV1.9的细胞株,RT-PCR法鉴定干扰效率达80％.CCK-8法及流式细胞术结果显示,降低NaV1.9的表达使细胞增殖活性下降(P＜0.05);流式细胞术结果显示,抑制NaV1.9的表达使细胞吞噬能力降低(P＜0.05);Transwell小室法结果显示,干扰NaV1.9的表达使细胞迁移能力减弱(P＜0.05).结论 建立了稳定干扰NaV1.9的RAW264.7细胞株,下调NaV1.9的表达使巨噬细胞增殖活性、吞噬能力和迁移功能显著降低.     

盐皮质激素受体在博来霉素诱导的实验性肺纤维化中的作用*

 目的：研究盐皮质激素受体（MR）在博来霉素诱导的实验性肺纤维化进展过程中的作用及机制。方法：将126只6～8周龄雄性C57BL/6小鼠随机分为对照组、博来霉素组和MR阻断剂螺内酯干预组,气管内一次性滴注博来霉素(2.5 mg/kg)溶液建立实验性小鼠肺纤维化模型,螺内酯干预组每天按螺内酯20 mg/kg经灌胃给药。于术后12 h、1 d、2 d、3 d、7 d、14 d和28 d处死小鼠,采用HE染色和Masson染色观察肺组织病理学变化及纤维化程度,采用real-time PCR检测各组肺组织中胶原1(Col1)、Col3、转化生长因子β(TGF-β)、单核细胞趋化蛋白1（MCP-1）及MR mRNA的表达水平。结果：（1）与对照组小鼠相比,博来霉素组及螺内酯干预组小鼠在滴注博来霉素后经历了典型的急性炎症期（12 h～3 d）、纤维化进展期（14 d）和纤维化晚期（28 d）。阻断MR下调早期炎症反应并减轻了纤维化程度。（2）螺内酯干预可以有效降低MR mRNA表达水平;阻断MR在急性炎症期显著下调MCP-1 mRNA的表达,在14 d显著下调TGF-β、Col1和Col3 mRNA表达水平。结论：(1）阻断MR可以明显减轻博来霉素诱导的肺纤维化程度;(2）阻断MR可能通过在急性炎症期调节MCP-1和TGF-β的表达,减轻炎症反应,并在纤维化进展期,下调TGF-β的表达,从而抑制肺纤维化的进展。     

医学研究生《生物医学软件应用》课程设置的探讨

正确运用生物医学软件可以培养医学研究生科学缜密的思维方式,提高其科研和创新能力。按需定位课程目标和内容,结合现代化的教学手段和实用性的考核形式,对《生物医学软件应用》课程设置进行探索。使研究生更全面掌握生物医学软件的相关知识与技能,为其顺利开展科研工作奠定良好基础。     

建立HPLC法测定螺内酯脂质体包封率

【目的】建立测定螺内酯脂质体含量及包封率的高效液相色谱方法。【方法】分别采用透析法和超速离心法分离螺内酯脂质体和游离药物,以HPLC法测定药物含量,计算包封率。【结果】在选定色谱条件下,辅料不干扰测定,螺内酯在0.5～8.0μg/ml范围内线性关系良好（r=0.9999,n=6）,日内日间精密度（RSD）均〈2%,平均加样回收率为99.85%。透析法可使螺内酯脂质体和游离药物得到良好的分离。【结论】透析法测定螺内酯脂质体的含量及包封率准确可靠、操作简便。 更多还原     

拔牙创不同处理方法对牙槽窝炎性因子 IL-1、IL-6、TNF-α浓度影响的研究

目的：比较三种不同拔牙窝处理方法对牙槽窝炎性因子白介素-1（IL-1）、白介素-6（IL-6）、肿瘤坏死因子-α（ TNF-α）的影响。方法选取150例需拔除慢性炎症牙齿的患者,随机分为3组,其中B组仅搔刮拔牙窝,C组为搔刮拔牙窝＋0 D．9％氧化钠溶液冲洗,D组为搔刮拔牙窝＋1％过氧化氢溶液＋0．9％氧化钠溶液冲洗。并选取同期50例无炎症拔牙患者为健康对照组（ A组）,抽取牙槽窝内血液,采用酶联免疫吸附法（ enzyme-linked immnosorbent assay,ELISA）检测炎性因子IL-1、IL-6、TNF-α的浓度。结果 C、D组IL-1、IL-6、TNF-α分别与B组IL-1、IL-6、TNF-α浓度比较,差异有统计学意义（ P ＜0．05）,与A组比较差异无统计学意义（ P ＞0．05）;C组IL-1、IL-6、TNF-α浓度与D组比较,差异无统计学意义（ P ＞0．05）。结论拔牙窝冲洗后牙槽窝血液炎性因子IL-I、IL-6、TNF-α的浓度与未冲洗比较明显降低,接近无炎症组,0．9％氧化钠溶液冲洗与1％过氧化氢溶液冲洗的牙槽窝炎性因子浓度无明显差异。     

生产场所矽尘环境瞬时浓度与时间加权平均浓度关系的研究

[目的 ]探讨生产场所矽尘环境瞬时浓度 (EIC)与其时间加权平均浓度 (TWA)间的关系。 [方法 ]在铸造厂、耐火材料厂和锡矿同时测定矽尘EIC和TWA。提出理想瞬时浓度的概念 ,基于理想瞬时浓度及其取值集合S的共同框架来分析EIC与TWA两者的关系 ,推导出TWA理论 =μeσ2 / 2 。以该公式将上述 3家厂矿EIC换算为理论TWA ,并与相应TWA实测值比较。 [结果 ]理论与实测TWA间的差别在耐火材料厂和锡矿均无显著性 (t =1.961和t =1.746,均P >0 0 5 ) ,该公式成立 ,而在铸造厂则否 (t=7.772 ,P <0 .0 5 )。 [结论 ]生产性矽尘EIC与TWA之间在多数情况下存在一定的函数关系 ,经TWA理论 =μeσ2 / 2可将EIC转换为TWA ,这对于我国制订粉尘职业接触限值时确定其TWA限值 ,以及对于TWA的上限值容许上移多少这一国际上有争论的问题均有指导作用     

矽肺及矽尘作业工人生物监测指标的探讨

目的探讨与纤维化有关的血清检测指标作为矽尘作业生物监测标志物的意义。方法取被测者空腹静脉血分离血清,酶联免疫吸附法(ELISA)测定血清中转化生长因子β1(TGFβ1)、肿瘤坏死因子α(TNFα)、层黏连蛋白(LN)的水平,黄嘌呤氧化酶法测定超氧化物歧化酶(SOD)活力,氯胺T法测定羟脯氨酸(Hyp)含量。结果接尘组LN[(121.6±20.5)μgL]比对照组[(99.4±12.1)μgL]明显升高,差异有统计学意义(P<0.05),而TGFβ1、Hyp、TNFα、SOD水平两组间的差异无统计学意义(P>0.05)。矽肺组TGFβ1、LN水平高于接尘组和对照组,SOD水平低于接尘组和对照组,差异均有统计学意义(P<0.05);TNFα有下降的趋势,但差异无统计学意义(P>0.05)。血清TGFβ1水平与血清LN、Hyp水平呈正相关(r值分别为0.68、0.52,P<0.05)。经过逐步判别分析,从指标中筛选出3个有统计学意义的变量(TGFβ1、SOD、LN),用它们建立判别方程,对照组的错判率是3.23%,矽肺组的错判率是12.12%。结论血清TGFβ1、SOD和LN水平作为矽肺生物监测标志物有一定意义,其实用价值仍有待研究。