自体肝内移植类β细胞对糖尿病Beagle犬的长期疗效及安全性研究

目的探讨类β细胞自体肝内移植对糖尿病Beagle犬的长期疗效及安全性。方法通过逆转录病毒载体pMSCV将外源性胰岛素基因和EGFP基因转导入Beagle犬骨髓间充质干细胞（BMSCs）,制备类β细胞。然后运用肝动脉介入技术,将类β细胞自体移植入糖尿病Beagle犬肝内,通过监测比较糖尿病Beagle犬移植前后各项生理指标,评价其是否具有长期稳定的治疗效果,同时进行肝脏生理功能及病理组织形态学检测,并对其生物安全性进行验证。结果自体移植类β细胞对糖尿病Beagle犬血糖、体质量、胰岛素水平均有明显改善（均P〈0.01）,且疗效持续80周以上;Beagle的肝功能正常（P〉0.05）,移植部位的肝脏未发现肿瘤形成,具有可靠的生物安全性。结论自体肝内移植类β细胞对Beagle犬糖尿病有长期疗效且具有相对可靠的生物安全性。     

组织工程重建胰腺脱细胞支架血管系统的研究*

目的：使用内皮祖细胞再内皮化胰腺脱细胞支架,并初步评价其在宿主体内生成血管的能力。方法：采用灌注法制备结构完整的全胰腺脱细胞支架;并提取大鼠骨髓单个核细胞,诱导分化为内皮祖细胞,进行原代培养;将培养完成的内皮种植于支架内,并行体内移植。结果：在移植后第10天,实验组中包含红细胞的血管管腔数为（43±6）cm2,而对照组为（8±3）cm2;在移植后第20天,实验组中包含红细胞的血管管腔数为（62±9）cm2,而对照组为（16±5）cm2,此结果具有统计学意义（P<0.05,n=6）。种植内皮祖细胞后,支架在体内能更快更多的生成新生血管,与对照组比较差异有统计学意义（P<0.05）。结论：再血管化的支架在体内移植后,与对照组相比,可以更快的与宿主循环系统形成吻合。     

小鼠骨髓间充质干细胞、骨髓单核细胞和胚胎成纤维细胞重编程为诱导性多能干细胞的效率比较

目的比较小鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)、小鼠骨髓单核细胞(BM-MNCs)和小鼠胚胎成纤维细胞(MEFs)重编程为诱导性多能干细胞(iPS细胞)的效率。方法用慢病毒LV-ef1a-mOct4-IRES-EGFP、LV-ef1a-mSox2-IRES-EGFP、LV-ef1a-mKlf4-IRES-EGFP和LV-ef1a-mc-Myc-IRES-EGFP感染BMSCs、BM-MNCs和MEFs,通过计算碱性磷酸酶染色阳性克隆数比较这3种细胞重编程为iPS细胞的效率。用胚胎干细胞表面标记检测、胚胎干细胞内源基因检测、拟胚体形成实验和畸胎瘤形成实验验证重编程获得的iPS细胞的多能性。结果起源于小鼠BMSCs、BM-MNCs及MEFs的3种iPS细胞均能形成边缘光整的致密克隆,可表达干性基因Nanog、Rex-1、SSEA-1,并能在体内外分化为三胚层组织。但是BMSCs来源的碱性磷酸酶阳性克隆数低于BM-MNCs和MEFs来源的克隆数。结论小鼠BMSCs、BM-MNCs及MEFs均可重编程为iPS细胞,但BMSCs重编程为iPS细胞的效率低于BM-MNCs和MEFs。     

胰腺移植中血管吻合重建的实验研究

目的:研究猪胰腺移植术中不同的血管吻合重建对术后移植胰功能恢复的影响。方法:采用健康小型猪18头体重30~50Kg,雌雄各半,随机分成A、B两组,均作带十二指肠袢的同种异体节段性胰腺移植。A组采用传统血管重建术;B组采用边灌注边吻合、先静脉后动脉的血管重建术。测定各组术后不同天数的胰液淀粉酶小时分泌量平均值、血清C-肽水平,了解移植胰的功能状况。结果:A组术后第5天始血清C-肽、AM分泌量低于B组,两组差异有统计学意义(P<0.05)。结论:胰腺移植术中采用改进后的血管吻合重建术可明显改善术后移植胰的功能。     

胰岛素基因逆转录病毒载体在人骨髓间充质干细胞表达的实验研究

目的构建携带胰岛素基因逆转录病毒载体,使其在人骨髓间充质干细胞(hMSCs)内稳定表达。方法通过RT-PCR法从人胰腺组织中提取胰岛素基因片段,并将其连接入逆转录病载体pLNCX,经包装细胞PT67的包装后,获得含外源性胰岛素基因的病毒颗粒(病毒滴度达4.2×106cfu/ml)并感染hMSCs,经过G418筛选后,用RT-PCR法、免疫荧光法、放射免疫法、葡萄糖刺激试验分析胰岛基因的表达情况。结果携带胰岛素基因的逆转录病毒载体构建成功,转导入hMSCs后能够稳定表达胰岛素基因,并分泌至细胞外持续3周以上,但对葡萄糖刺激无明显反应。结论重组人胰岛素基因逆转病毒载体能够将胰岛素基因导入hMSCs并稳定表达。     

Madden胰管空肠吻合改良术36例

目的:探讨改良后Madden胰管空肠吻合术在胰十二指肠切除术后预防胰瘘的临床价值。方法:回顾性分析2000年7月～2007年4月施行改良后Madden胰管空肠吻合术36例。Madden吻合法基础上进行改良,游离胰远断端3 cm,胰管内置入硅胶管。电刀灼破空肠全层形成直径2～5 mm小孔,胰管支架硅胶管经此孔插入空肠,胰管-空肠黏膜对合后以4-0的可吸收线间断吻合4针,将胰断面与空肠壁浆肌层连续缝合1周,收紧打结,使胰管周围的胰腺断面和空肠浆肌层贴合紧密。结果:采用此法治疗36例患者均顺利出院,未发生胰瘘。结论:改良后Madden胰管空肠吻合术设计合理,操作简便,疗效确切,值得临床推广应用。     

肝癌发生过程中的PTEN基因表达

目的 探讨肝癌PTEN基因的表达及与肝癌发生的关系.方法 应用RT-PCR法检测37例肝癌癌灶及非癌组织中PTEN基因mRNA表达,并通过凝胶图像系统分析其相对表达量.同时采用免疫组化方法分析肝癌组织中PTEN蛋白的定位.结果 癌灶PTEN mRNA表达率为48.6%(18/37),非癌组织为100.0%(37/37),癌灶组织中TEN基因表达显著低于非癌(P<0.01).免疫组化检测肝癌癌灶组织中PTEN蛋白表达率为37.8%(14/37),显著低于非癌组织中的94.6%(35/37)(P<0.01).结论 PTEN基因下调或缺失可能与肝癌的发生发展有密切相关.     

nm23-H1 NDPK在胃癌中表达的研究

ｎｍ2 3基因被多数学者认为是肿瘤转移抑制基因 ,它对胃癌转移抑制功能尚有争论。我们对 1 998年 1月～ 1 1月期间收治的 5 8例胃癌 ,免疫组化法检测其ｎｍ2 3 Ｈ1、ＮＤＰＫ表达差异 ,现报告如下。一、材料与方法1 .一般资料 :5 8例胃癌中 ,男 38例 ,女 2 0例 ,男女之比为 1 9∶1。年龄最小者 1 8岁 ,最大者 92岁 ,平均年龄 5 6 7岁。 5 8例均施行胃切除术 ,根治性胃切除术 39例(6 7 2 % ) ,姑息性胃切除术 1 9例 (32 8% ) ,ＰＴＮＭ分期Ⅰ期4例 (6 9% ) ,Ⅱ期 1 4例 (2 4 1 % ) ,Ⅲ期 2 1例 (36 2 % ) ,Ⅳ期1 9例 (32 8% ) …     

胆囊结石患者CCK受体mRNA测定的临床意义

目的:探讨胆囊结石患者缩胆囊素(CCK)受体基因表达及其与胆囊排空功能的关系.方法:术前用B超测定100例胆囊结石患者和50例胃癌无胆囊结石患者的胆囊排空功能.胆囊壁CCK受体mRNA表达的测定用RT-PCR法.结果:胆囊结石组CCK受体mRNA表达(0.59±0.11)明显低于对照组(0.91±0.06)(P<0.01),该基因表达的降低与胆囊结石胆囊排空功能损害有关.胆囊结石患者的胆囊平滑肌细胞膜CCK受体mRNA表达与胆囊残余指数(RV/FV×100%)呈负相关(Y=0.61-0.45X,r=-0.65,P<0.01).结论:胆囊结石患者CCK受体基因表达下调与胆囊排空功能的损害有关.     

腹腔镜胆囊切除术并发症的防治体会

目的：探讨腹腔镜胆囊切除术的并发症及防治措施。方法：选择行腹腔镜胆囊切除术1060例患者,术中根据胆囊三角区解剖关系和周围炎症程度决定采用顺行、逆行或顺逆结合方法切除胆囊。结果：1060例中腹腔镜胆囊切除术成功1046例（98.68%）,中转开腹14例（1.32%）中因胆囊与周围组织粘连中转开腹11例,因术中冰冻病理提示恶性中转开腹行根治术3例。放置细乳胶引流管287例。手术时间为20～150min,平均45min,术后住院时间为2～5d,平均3.1d。并发脐部切口感染5例,胆总管残余结石3例,胆漏2例,未出现胆管损伤和术后大出血等严重的并发症。结论：腹腔镜胆囊切除术采取针对性防治对策可有效降低并发症发生。