八聚体结合转录因子4和胚胎干细胞转录因子对胰腺癌干细胞体内干性特征的影响

目的 观察八聚体结合转录因子4(Oct4)和胚胎干细胞转录因子(Nanog)对胰腺癌干细胞(PCSCs)在体内干性特征的影响.方法 利用流式细胞分选技术分选人胰腺癌细胞-1(PANC-1)中CD44+ CD24+上皮特异性抗原(ESA)+胰腺癌干细胞,通过慢病毒载体介导特异性短发卡RNA (shRNA)沉默胰腺癌干细胞中的Oct4、Nanog基因,并通过Western blot检测干扰效率;将Oct4、Nanog沉默的胰腺癌干细胞、未沉默的胰腺癌干细胞及胰腺癌PANC-1细胞株分别接种于BALB/c裸鼠皮下及腹腔,建立裸鼠异位移植瘤模型,观察沉默Oct4、Nanog对胰腺癌干细胞体内致瘤性、侵袭性及耐药性的影响.结果 PANC-1细胞株中CD44+ CD24+ ESA+胰腺癌干细胞占细胞总数的0.1％ ～0.8％;shRNA沉默Oct4和Nanog的效率分别是(46.00 ±0.08)％和(78.00±0.12)％;体内实验结果显示,沉默Oct4、Nanog基因后,裸鼠的致瘤性和肿瘤转移性显著下降,对吉西他滨耐药性减弱.结论 沉默Oct4、Nanog表达可抑制裸鼠体内胰腺癌干细胞的干性特征.     

自体肝内移植类β细胞对糖尿病Beagle犬的长期疗效及安全性研究

目的探讨类β细胞自体肝内移植对糖尿病Beagle犬的长期疗效及安全性。方法通过逆转录病毒载体pMSCV将外源性胰岛素基因和EGFP基因转导入Beagle犬骨髓间充质干细胞（BMSCs）,制备类β细胞。然后运用肝动脉介入技术,将类β细胞自体移植入糖尿病Beagle犬肝内,通过监测比较糖尿病Beagle犬移植前后各项生理指标,评价其是否具有长期稳定的治疗效果,同时进行肝脏生理功能及病理组织形态学检测,并对其生物安全性进行验证。结果自体移植类β细胞对糖尿病Beagle犬血糖、体质量、胰岛素水平均有明显改善（均P〈0.01）,且疗效持续80周以上;Beagle的肝功能正常（P〉0.05）,移植部位的肝脏未发现肿瘤形成,具有可靠的生物安全性。结论自体肝内移植类β细胞对Beagle犬糖尿病有长期疗效且具有相对可靠的生物安全性。     

自拟中药方加减治疗妊娠咳嗽68例

2006年1月-2009年6月,笔者采用中药辨证治疗妊娠期咳嗽68例,疗效满意.现介绍如下. 临床资料     

组织工程重建胰腺脱细胞支架血管系统的研究*

目的：使用内皮祖细胞再内皮化胰腺脱细胞支架,并初步评价其在宿主体内生成血管的能力。方法：采用灌注法制备结构完整的全胰腺脱细胞支架;并提取大鼠骨髓单个核细胞,诱导分化为内皮祖细胞,进行原代培养;将培养完成的内皮种植于支架内,并行体内移植。结果：在移植后第10天,实验组中包含红细胞的血管管腔数为（43±6）cm2,而对照组为（8±3）cm2;在移植后第20天,实验组中包含红细胞的血管管腔数为（62±9）cm2,而对照组为（16±5）cm2,此结果具有统计学意义（P<0.05,n=6）。种植内皮祖细胞后,支架在体内能更快更多的生成新生血管,与对照组比较差异有统计学意义（P<0.05）。结论：再血管化的支架在体内移植后,与对照组相比,可以更快的与宿主循环系统形成吻合。     

自拟中药方加减治疗妊娠咳嗽68例

2006年1月-2009年6月，笔者采用中药辨证治疗妊娠期咳嗽68例，疗效满意。现介绍如下。     

小鼠骨髓间充质干细胞、骨髓单核细胞和胚胎成纤维细胞重编程为诱导性多能干细胞的效率比较

目的比较小鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)、小鼠骨髓单核细胞(BM-MNCs)和小鼠胚胎成纤维细胞(MEFs)重编程为诱导性多能干细胞(iPS细胞)的效率。方法用慢病毒LV-ef1a-mOct4-IRES-EGFP、LV-ef1a-mSox2-IRES-EGFP、LV-ef1a-mKlf4-IRES-EGFP和LV-ef1a-mc-Myc-IRES-EGFP感染BMSCs、BM-MNCs和MEFs,通过计算碱性磷酸酶染色阳性克隆数比较这3种细胞重编程为iPS细胞的效率。用胚胎干细胞表面标记检测、胚胎干细胞内源基因检测、拟胚体形成实验和畸胎瘤形成实验验证重编程获得的iPS细胞的多能性。结果起源于小鼠BMSCs、BM-MNCs及MEFs的3种iPS细胞均能形成边缘光整的致密克隆,可表达干性基因Nanog、Rex-1、SSEA-1,并能在体内外分化为三胚层组织。但是BMSCs来源的碱性磷酸酶阳性克隆数低于BM-MNCs和MEFs来源的克隆数。结论小鼠BMSCs、BM-MNCs及MEFs均可重编程为iPS细胞,但BMSCs重编程为iPS细胞的效率低于BM-MNCs和MEFs。     

胰岛素基因逆转录病毒载体在人骨髓间充质干细胞表达的实验研究

目的构建携带胰岛素基因逆转录病毒载体,使其在人骨髓间充质干细胞(hMSCs)内稳定表达。方法通过RT-PCR法从人胰腺组织中提取胰岛素基因片段,并将其连接入逆转录病载体pLNCX,经包装细胞PT67的包装后,获得含外源性胰岛素基因的病毒颗粒(病毒滴度达4.2×106cfu/ml)并感染hMSCs,经过G418筛选后,用RT-PCR法、免疫荧光法、放射免疫法、葡萄糖刺激试验分析胰岛基因的表达情况。结果携带胰岛素基因的逆转录病毒载体构建成功,转导入hMSCs后能够稳定表达胰岛素基因,并分泌至细胞外持续3周以上,但对葡萄糖刺激无明显反应。结论重组人胰岛素基因逆转病毒载体能够将胰岛素基因导入hMSCs并稳定表达。     

Madden胰管空肠吻合改良术36例

目的:探讨改良后Madden胰管空肠吻合术在胰十二指肠切除术后预防胰瘘的临床价值。方法:回顾性分析2000年7月～2007年4月施行改良后Madden胰管空肠吻合术36例。Madden吻合法基础上进行改良,游离胰远断端3 cm,胰管内置入硅胶管。电刀灼破空肠全层形成直径2～5 mm小孔,胰管支架硅胶管经此孔插入空肠,胰管-空肠黏膜对合后以4-0的可吸收线间断吻合4针,将胰断面与空肠壁浆肌层连续缝合1周,收紧打结,使胰管周围的胰腺断面和空肠浆肌层贴合紧密。结果:采用此法治疗36例患者均顺利出院,未发生胰瘘。结论:改良后Madden胰管空肠吻合术设计合理,操作简便,疗效确切,值得临床推广应用。