铜绿假单胞菌及其生物被膜影响A549细胞分泌细胞生长因子的实验研究

目的：通过观察经铜绿假单胞茵及其生物被膜作用后,肺泡上皮细胞A549分泌细胞生长因子水平的变化,探讨其在成纤维细胞活化和增殖及分化中的作用。方法：采用体外诱导铜绿假单胞茵形成生物被膜,应用乙醇沉淀法提取细菌被膜并纯化;选用人肺泡II型上皮细胞株A549为靶细胞,采用ELISA法分别定量检测经铜绿假单胞浮游菌及其生物被膜藻酸盐作用后上皮细胞分泌生长因子TGF—β1、FGF-2、CTGF、IGF-1表达量。结果：受铜绿假单胞生物被膜藻酸盐作用后,A549细胞表达TGF—β1、FGF-2、CTGF和IGF-1能力明显增强,CTGF在藻酸盐作用后24h达到高峰后缓慢下降,其余3种生长因子均在在藻酸盐作用后48h内持续升高,与对照相比较,差异有统计学意义（P〈0．05）;浮游菌作用后4种生长因子表达量无明显增加。结论：铜绿假单胞菌生物被膜藻酸盐可增强A549细胞对TGF—β1、FGF-2、CTGF和IGF-1分泌能力。     

IL-4对TNF-α和IL-1β诱导的肺癌细胞分泌C3及B因子的研究

目的：探讨IL-4对TNF-α和IL-1β诱导的肺癌细胞分泌C3及B因子的影响。方法：分别用ELISA及RT-PCR法检测C3、B因子蛋白及mRNA表达。结果：TNF-α和IL-1β增强A549细胞分泌C3及B因子分别是对照组的6．4．7．5倍和6．0、8．9倍；IL-4增强A549细胞分泌C3是对照组的4．8倍，对B因子的分泌没有影响，但剂量依赖性上调TNF-α和IL-1β诱导的A549细胞分泌C3及下调TNF-α和IL-1β诱导的A549细胞分泌B因子。C3及B因子的mRNA表达与蛋白水平的结果相一致。结论：IL-4、TNF-α和IL-1β相互作用调节A549细胞分泌C3及B因子。     

抗藻酸盐血清与加替沙星联合对铜绿假单胞菌生物被膜形态的影响

目的　探讨抗藻酸盐血清对黏液型铜绿假单胞菌生物被膜中细菌形态上的影响。方法采用改良的组织培养平板法建立黏液型铜绿假单胞菌生物被膜模型 ,经不同稀释度的抗藻酸盐血清与不同浓度的加替沙星联合应用处理后 ,以银染法快速鉴定 ,扫描电镜 (SEM)确认细菌生物被膜形态 ,并采用计算机图像处理系统进行图像分析。结果　计算机图像分析系统显示 ,空白组生物被膜的平均光密度为 0 82± 0 0 6 ;加入抗藻酸盐血清后 ,抗藻酸盐血清组、抗藻酸盐血清与加替沙星联合用药组生物被膜的平均光密度值分别为 0 79± 0 0 6和 0 70± 0 0 4 ,加替沙星单独用药组生物被膜平均光密度值为 0 76± 0 0 7的 ;光镜和电镜图像可见黏液样物变稀疏 ,细菌数减少 ,形态不甚规则。结论抗藻酸盐血清能够影响黏液型铜绿假单胞菌生物被膜构建和形态 ,与加替沙星联用后可以使黏液型铜绿假单胞菌生物被膜结构发生不同程度破坏。     

重组HBHA蛋白对肺泡Ⅱ型上皮细胞细胞因子分泌的影响

目的 研究重组HBHA蛋白对肺泡Ⅱ型上皮细胞分泌细胞因子的影响.方法 原核表达并纯化重组HBHA,N端缺失HBHA(HBHA-ΔN)、C端缺失HBHA(HBHA-ΔC)三种蛋白,用以刺激A549细胞,并设置阴性对照,观察A549细胞分泌细胞因子的情况.结果 rHBHA蛋白可以显著提高A549细胞分泌IL-1β,IL-6,TNF-α,INF-γ的水平,而HBHA-△N和HBHA-△C蛋白对A549细胞分泌IL-1β,IL-6,TNF-α,INF-γ和IL-10的作用无显著影响.结论 rHBHA能够促进IL-1β,IL-6,TNF-α,INF-γ分泌,N端和C端缺失后促进作用减弱.提示HBHA在诱导自然免疫以及抵抗结核菌感染中具有重要作用.     

双黄连对呼吸道合胞病毒感染的气道上皮细胞炎症因子释放的影响

目的：探讨双黄连及其含药血清对呼吸道合胞病毒(RSV)感染的气道上皮细胞(A549)的炎症因子释放的影响及其药物作用机理。方法：以ELISA法测定炎症介质的含量，观察复方双黄连及其含药血清以不同的给药方式(Ⅰ组：感染前给药、Ⅱ组：感染时给药、Ⅲ组：感染后给药)对RSV刺激A549细胞引发的炎症介质IL-8、IL-6、TNF-α释放的作用。结果：RSV刺激气道上皮细胞A549后IL-8的分泌水平增加，而对IL-6、TNF-α影响不大；双黄连复方及其含药血清均能显降低RSV诱导A549释放的IL-8水平，并以感染前给药的途径下调IL-8的作用最为明显。结论：RSV能诱导气道上皮细胞释放炎症因子IL-8，双黄连可通过抑制RSV引起的IL-8释放，并在病毒感染的气道炎症控制中起着一定的作用。     

甲泼尼龙对肺炎支原体诱导A549细胞分泌IL-8和TNF-α的影响

目的 观察甲泼尼龙(MPL)对肺炎支原体(MP)诱导A549细胞产生细胞因子白细胞介素-8(IL-8)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的影响,为临床在MP肺炎中合理应用糖皮质激素(GCs)提供理论依据.方法 体外培养A549细胞和MP,用不同感染复数的MP诱导A549细胞,将0.015%的MPL加入到MP诱导的A549细胞中共同孵育,采用双抗体夹心ELISA法检测MPL作用于A549细胞后细胞分泌的IL-8 和TNF-α的含量.结果 MP能显著诱导A549细胞分泌IL-8和TNF-α,0.015%MPL能明显抑制A549细胞分泌IL-8和TNF-α(P<0.01),随着MP感染复数的增加,MPL的抑制作用降低.结论 GCs可抑制MP诱导的A549细胞IL-8和TNF-α的分泌,提示在重症MP肺炎早期,适当应用合理剂量的GCs可减轻炎症反应的强度.     

和厚朴酚抑制CFP-10、ESAT-6诱导的人肺泡Ⅱ型上皮细胞炎症因子表达

目的 研究和厚朴酚(HNK)对早期分泌抗原靶蛋白6(ESAT-6)和培养滤液蛋白10(CFP-10)作为特异性抗原刺激人肺泡Ⅱ型上皮细胞(A549)炎症因子表达的抑制作用,探讨抗炎在结核病治疗中的潜在价值.方法 用MTS法检测HNK(0～80μmol/L)对A549细胞的毒性反应,确定合适的药物实验浓度.用ELISA法检测以CFP-10、ESAT-6(0～40μg/ml)为抗原刺激的A549表达IL-8水平,选择最适刺激浓度.将A549细胞与CFP-10,ESAT-6及不同浓度的HNK(0～20μmol/L)共同培养24h后收集培养上清液和细胞,用ELISA法检测各组培养上清液中IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α及Rantes的表达水平,分析HNK对细胞因子的剂量依赖抑制.结果 20μmol/L及以下的HNK浓度对A549细胞无明显毒性反应.抗原最适刺激浓度为5μmol/L.CFP-10,ESAT-6刺激可显著诱导A549细胞炎症因子IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α及Rantes的产生.HNK(0～20μmol/L)剂量依赖性地抑制CFP-10,ESAT-6诱导的炎症因子的表达.结论 HNK能有效抑制CFP-10,ESAT-6诱导的人肺泡Ⅱ型上皮细胞炎性细胞因子的表达.     

铜绿假单胞菌肺炎鼠动物模型中炎性介质浓度分析

目的 观测炎症指标白细胞介素白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素8(IL-8)及核基质蛋白-2(MMP-2)浓度在铜绿假单胞菌小鼠肺炎模型肺部炎症及肺纤维化进程中的变化.方法 建立铜绿假单胞菌慢性感染的动物模型,用ELISA方法 检测其肺泡灌注液中IL-1β、IL-8及血清MMP-2浓度,对其引起的相关炎性反应进...     

鱼腥草素钠增强妥布霉素抗铜绿假单胞菌生物被膜作用及抗菌协同作用

目的：研究鱼腥草素钠增强妥布霉素抗铜绿假单胞菌生物被膜的作用。方法：微量倍比稀释法测定鱼腥草素钠、妥布霉素对铜绿假单胞菌的最小抑菌浓度（MIC）,棋盘稀释法测定两者联合抗菌作用,结晶紫染色法测定单药及联合用药对铜绿假单胞菌生物被膜的最小抑膜浓度（SMIC）,扫描电镜下观察药物对铜绿假单胞菌生物被膜形态的影响,采用倾注平板法进行菌落数计数。结果：鱼腥草素钠对铜绿假单胞菌的MIC为512μg/mL,妥布霉素对铜绿假单胞菌的MIC为4μg/mL,两药联合后MIC分别为64μg/mL和1μg/mL,分级抑菌浓度指数（FIC）为0.375,提示两药协同作用明显。妥布霉素对铜绿假单胞菌生物被膜SMIC50黏附期为8μg/mL,早期生物被膜阶段为16μg/mL,成熟期生物被膜阶段为32μg/mL,两药联合后铜绿假单胞菌生物被膜SMIC50黏附期为8μg/mL,早期为0.5μg/mL,成熟期为8μg/mL,鱼腥草素钠对妥布霉素抗铜绿假单胞菌生物被膜有增强作用。结论：鱼腥草素钠与妥布霉素抗菌协同作用明显,鱼腥草素钠对妥布霉素抗铜绿假单胞菌生物被膜有增强作用。     

氧浓度变化对铜绿假单胞菌生物被膜生成的影响

目的 研究氧浓度变化对铜绿假单胞菌生物被膜产生量的影响,探讨密度感应系统在生物被膜调控中的作用以及Ⅲ型分泌系统表达和生物被膜形成的关系.方法 将23株铜绿假单胞菌临床菌株在不同氧浓度环境下连续培养3 d,检测生物被膜和藻酸盐产生量,银染色法观察ATCC27853产生胞外多糖的时间窗,实时定量多聚酶链反应(PCR)测定密度感应系统中调控基因LasI和RhlI的表达,Western blot方法观察Ⅲ型分泌系统的代表毒素胞外酶S分泌情况.结果 铜绿假单胞菌的生物被膜产生量(R=0.455,P=0.000)及藻酸盐产生量(R=0.367,P=0.000)均与氧浓度变化呈显著正相关.银染色法结果显示,高氧条件下胞外多糖合成时间缩短.实时定量PCR结果显示,LasI、RhlI的相对表达量与氧浓度(R=0.025,P=0.794;R=-0.044,P=0.653)、生物被膜产生量(R=0.001,P=0.990;R=0.011,P=0.909)和藻酸盐产生量(R=0.029,P=0.770;R=0.193,P=0.064)间无明显相关性.Westem blot结果表明,铜绿假单胞菌在氧浓度为10%～30%条件下可分泌胞外酶S,在高氧条件下不分泌胞外酶S.结论 高氧可促进铜绿假单胞菌生物被膜的产生.Las系统和Rhl系统可能因为菌群数量处于低水平而未在生物被膜形成早期阶段参与生物被膜的调控过程.生物被膜的产生增多可能抑制Ⅲ型分泌系统的表达,使该菌毒力发挥受到限制.     

儿童肺炎支原体肺炎血清TNF-α、IL-6、IL-8和IL-10水平测定及临床意义

目的：探讨肺炎支原体肺炎（MPP）患儿血清肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-6（IL-6）、白细胞介素-8（IL-8）和白细胞介素-10（IL-10）的浓度变化情况及其临床意义。方法：选择525例MPP患儿（研究组）和100例健康体检儿童（对照组）作为研究对象,研究组中69例存在胸腔积液,其中21例出现肺部纤维化改变,设为肺部有纤维化组,其余48例未出现肺部纤维化改变患者设为肺部无纤维化组。采用双抗体夹心酶联免疫吸附法（ELISA）检测并比较研究组治疗前后、对照组血清TNF-α、IL-6、IL-8和IL-10水平。结果：研究组治疗前血清TNF-α、IL-6、IL-8和IL-10水平均明显高于对照组,差异具有统计学意义（P〈0.05）;而研究组治疗后TNF-α、IL-6、IL-8和IL-10水平均较治疗前明显降低（P〈0.05）;肺部无纤维化组胸水TNF-α和IL-8水平高于其血清浓度,但差异无统计学意义（P〉0.05）;肺部有纤维化组胸水TNF-α和IL-8水平明显高于其血清浓度（P〈0.05）;而肺部有纤维化组胸水TNF-α和IL-8水平较无纤维化组明显增加（P〈0.05）。结论：TNF-α、IL-6、IL-8和IL-10与肺炎支原体感染具有一定相关性,且在肺部纤维化的形成过程中发挥重要的作用,可作为临床诊断、病情及预后判断依据,值得进行广泛的推广和应用。     

布洛芬对小鼠肺纤维化的保护作用

  目的 研究布洛芬对博莱霉素诱导的肺纤维化的治疗保护作用。方法 通过气管内滴注博莱霉素复制小鼠肺纤维化模型,实验分为正常对照组、模型组、布洛芬5 mg/kg治疗组、布洛芬10 mg/kg治疗组和布洛芬20 mg/kg治疗组。采集血清行一氧化氮（NO）化学法检测小鼠血清中NO含量;收集肺泡灌洗液行ELISA方法测定肿瘤坏死因子（TNF-α）和白细胞介素6（IL-6）含量;留取肺组织行HE染色观察各组小鼠肺组织形态变化,制备肺组织匀浆测定匀浆中丙二醛（MDA）含量;采用RT-PCR和Western blot方法检测肺组织中转化生长因子β1（TGF-β1）、Smad2和p-Smad2的表达水平。结果 与正常对照组比较,肺纤维化模型组肺组织中发生炎性细胞浸润、肺泡间隔增厚情况,同时血清中NO含量和肺泡灌洗液中炎性因子TNF-α和IL-6含量显著增加,小鼠肺组织中MDA含量也有所增加,TGF-β1和p-Smad2的表达显著升高。经布洛芬给药治疗后,各项生化指标有所下降,同时肺纤维化损伤得以缓解。结论 布洛芬可缓解由博莱霉素诱导的肺纤维化,其作用机制可能与下调NO含量、TNF-α和IL-6等炎性因子含量及调控TGF-β信号通路有关。     

急性结膜炎血浆炎性细胞因子水平变化的研究

目的：观察急性结膜炎炎症急性期和炎症缓解后的血浆炎性细胞因子水平变化。方法：应用放射免疫分析法和超敏免疫分析测定了127例急性结膜炎患者治疗前后血浆白介素（IL）-1β、IL-6、IL-8、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）和超敏-C反应蛋白（hs-CRP）水平,并与正常对照组进行比较,行相关性分析。结果：127例急性结膜炎患者治疗前后血浆IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α和hs-CRP水平与54例正常对照组相比明显增高,两组间差异有统计学意义（P均〈0.01）。治疗后半个月,在急性炎症缓解后血浆炎性因子基本恢复至正常水平。血浆hs-CRP与IL-1β、IL-6、IL-8和TNF-α水平相关系数分别为0.613 8、0.604 4、0.615 6和0.627 8。结论：急性结膜炎血浆炎性细胞因子在炎症急性期有明显增高。血浆hs-CRP与IL-1β、IL-6、IL-8和TNF-α水平呈正相关。     

稳定期慢性阻塞性肺疾病患者诱导痰及血清中细胞因子的表达

目的探讨不同严重程度稳定期慢性阻塞性肺疾病（COPD）患者血清及诱导痰液中细胞因子白细胞介素-1β（IL-1β）、白介素-8（IL-8）、肿瘤坏死因子（TNF-α）的表达。方法分别纳入健康吸烟成人90例、稳定期COPD患者100例为研究对象。采用放射免疫法测定诱导痰及血清细胞因子IL-8、IL-1β、TNF-α的水平。结果稳定期COPD患者诱导痰和血清中IL-8、IL-1β、TNF-α较健康吸烟组均升高,差异具有统计学意义。同时稳定期COPD患者血清和诱导痰中三种细胞因子水平与肺功能呈显著负相关。结论 IL-1β、IL-8,TNF-α均参与了COPD的发生和发展过程,其诱导痰和血清水平可能是COPD严重程度的一个炎性标志。     

脐血IL-1β、IL-6、IL-8、IL-10、TNF-α与母体、胎儿炎症反应及早产预后的相关性

目的：研究脐血白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素6(IL-6)、白细胞介素8(IL-8)、白细胞介素10(IL-10)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)与母体、胎儿炎症反应及早产预后的相关性。方法选取2015年1月至2016年1月在我院妇产科就诊的早产孕妇及早产儿各93例作为研究对象。比较母体炎症反应不同时期的脐血细胞因子水平,胎儿炎症反应不同分型的脐血细胞因子水平,不同早产预后的脐血细胞因子水平,利用Spearman相关性分析法分析脐血细胞因子与母体或胎儿炎症反应及早产预后的相关性。结果母体炎症反应≥2期者的IL-1β、IL-6、IL-8及TNF-α的水平明显高于无炎症反应与1期者,IL-10水平明显低于无炎症反应与1期者,而1期的IL-1β、IL-6、IL-8及TNF-α的水平明显高于无炎症反应者,IL-10明显低于无炎症反应者,差异均有统计学意义(P<0.05);胎儿2型炎症反应的IL-1β、IL-6、IL-8及TNF-α的水平明显高于无炎症反应与1型者,IL-10水平明显低于无炎症反应与1型者,而1型的IL-1β、IL-6、IL-8及TNF-α的水平明显高于无炎症反应者,IL-10水平明显低于无炎症反应者,差异均有统计学意义(P<0.05);预后不良的早产儿脐血IL-1β、IL-6、IL-8及TNF-α水平均明显高于预后良好者,而IL-10水平明显低于预后良好者,差异均有统计学意义(P<0.05);根据Spearman法评价相关性可知,IL-1β、IL-6、IL-8及TNF-α分别与母体或胎儿炎症反应及早产预后均呈正相关(P<0.05),而IL-10与母体或胎儿炎症反应以及早产预后呈负相关(P<0.05)。结论脐血IL-1β、IL-6、IL-8及TNF-α水平分别与母体或胎儿炎症反应及早产预后呈正相关,而IL-10与母体或胎儿炎症反应及早产预后呈负相关。     

黄芩苷对脂多糖诱导的人单核细胞THP-1的炎症反应的作用

目的 探讨黄芩苷(baicalin)对脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)诱导的人单核细胞THP-1的炎症反应的作用。 方法 利用LPS建立人单核细胞THP-1的炎症模型,实时荧光定量聚合酶链式反应(real-time quantitatFive polymerase chain reaction, RT-qPCR)方法检测白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、IL-6、IL-8、粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(granulocyte-macrophage colony-stimulating factor,GM-CSF)和肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)的相对表达,确定最优的LPS刺激浓度。乳酸脱氢酶检测试剂盒检测黄芩苷的细胞毒性,优选其最佳使用浓度范围。对LPS诱导的人单核细胞THP-1炎症模型予以不同浓度的黄芩苷预处理,利用RT-qPCR法检测黄芩苷对LPS诱导的人单核细胞THP-1的IL-1β、IL-6、IL-8、GM-CSF和TNF-α的表达升高的影响。 结果 与对照组相比,1 μg/mL的LPS处理人单核细胞THP-1 24 h后均可显著引起IL-1β、IL-6、IL-8、GM-CSF和TNF-α的表达升高(P<0.05),黄芩苷在浓度为10、30、100 μmol/L时处理人单核细胞THP-1 24 h和48 h,无明显细胞毒性。30 μmol/L和100 μmol/L的黄芩苷可降低LPS诱导的人单核细胞THP-1的IL-1β、IL-6、IL-8、GM-CSF和TNF-α的表达升高。 结论 黄芩苷可显著抑制LPS诱导的人单核细胞THP-1的炎症反应。     

三黄地榆散对多重耐药铜绿假单胞菌的抑制作用研究

目的 探讨三黄地榆散对多重耐药铜绿假单胞菌的抑制效果,为其临床应用提供依据.方法 首先制备中药含药血清用于体外最小抑菌浓度(MIC)、最小杀菌浓度(MBC)测定.然后建立烫伤大鼠感染多重耐药铜绿假单胞菌模型,分别给予西药硫酸庆大霉素和中药三黄地榆散灌胃,正常组和模型组灌胃等容量的无菌生理盐水;在给药后的第3、7、10天检测血液中炎性细胞和炎性因子的水平.结果 体外抑菌实验显示,三黄地榆散含药血清与庆大霉素对多重耐药铜绿假单胞菌的MIC、MBC均为512μg/mL.体内实验结果显示,与模型组比较均能显著下调大鼠血清WBC、IL-1β、TNF-α的水平(P<0.05).结论 三黄地榆散能抑制多重耐药铜绿假单胞菌的生长,对多重耐药铜绿假单胞菌感染烫伤大鼠治疗具有较好的疗效,机制可能与调节IL-1β、TNF-α水平有关.     

依那普利对博来霉素致大鼠肺纤维化的影响

目的探讨依那普利对博来霉素致肺纤维化大鼠肺组织中细胞因子和肺纤维化的影响。方法 60只Wistar大鼠随机分为正常对照组、模型组、低剂量依那普利组、中剂量依那普利组、高剂量依那普利组和泼尼松对照组,每组10只。博来霉素诱导大鼠肺纤维化模型。对各组大鼠进行肺泡炎、肺纤维化半定量评分,检测支气管肺泡灌洗液(BALF)中转化生长因子-β1(TGF-β1)、干扰素-γ(INF-γ)、白细胞介素(IL)-1、IL-2、IL-4和IL-6含量,肺组织匀浆中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)和羟脯氨酸(HYP)含量,BALF和血清中间质金属蛋白酶(MMP-9)、金属蛋白酶组织抑制剂-1(TIMP-1)的浓度,以及肺组织中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)m-RNA的表达。结果依那普利剂量依赖性地降低博来霉素诱导的肺纤维化大鼠的肺纤维化评分和肺泡炎评分(P<0.05);降低大鼠BALF中TGF-β1、IL-1、IL-2、IL-4、IL-6的含量(P<0.05),并升高INF-γ含量(P<0.05);升高肺组织中SOD含量(P<0.05),并降低MDA和HYP含量(P<0.05);降低血清及BLAF中MMP-9、TMP-1的含量,降低MMP-9/TMP-1值(P<0.05);降低肺组织TNF-αm-RNA的表达(P<0.05)。结论依那普利可以有效抑制博来霉素诱导的大鼠肺纤维化。     

人流感病毒H1N1与禽流感病毒H5N1感染人神经胶质细胞的实验研究

目的：研究人流感病毒（H1N1）及禽流感病毒（H5N1）感染人神经胶质细胞后,促炎症因子的分泌特点。方法：分离培养人胶质细胞,用H1N1及H5N1分别感染刺激人胶质细胞;用RT-PCR技术探求白细胞介素（IL）-1β、-6和肿瘤坏死因子（TNF）-α变化。结果：与阴性对照比,H1N1和H5N1感染人神经胶质细胞IL-1β、-6和TNF-α的表达量均增高,且H5N1的表达量多于H1N1。结论：H1N1与H5N1可体外感染人神经胶质细胞,并诱导其分泌大量促炎症因子,提示此与流感病毒感染中枢神经系统所致的功能紊乱及免疫病理损伤有关。