转化生长因子对成骨细胞增殖及其受体信号表达的影响

目的:研究转化生长因子βⅠ对小鼠成骨细胞增殖的调节作用,及其受体表达的变化,初步了解TGFβⅠ促成骨细胞增殖的分子机制.方法:以小鼠成骨细胞株MC3T3-E1为TGFβⅠ检测的细胞模型.10ng/ml TGFβⅠ作用MC3T3-E1细胞后,采用3H-TdR细胞增殖试验,检测成骨样细胞增殖改变,采用半定量反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测TGFβⅠ,TGFβⅡ受体mRNA的表达.结果:(1)在10ng/mL浓度时,TGFβⅠ对MC3T3-E1细胞有明显的增殖促进作用,使MC3T3-E1成骨样细胞在24小时内成倍增殖.含转化生长因子组TGFβⅠ受体,TGFβⅡ受体的mRNA表达的水平高于空白对照组.(3)10ng/mLTGFβⅠ具有维持MC3T3-E1细胞活力的作用.(4)TGFβⅠ可能,通过MC3T3-E1细胞表面TGFβⅠ受体,TGFβⅡ受体途径表达,传递信号.     

类风湿关节炎患者血清滑液和滑膜组织白细胞介素-18的水平及意义

目的 研究类风湿关节炎（RA）患者血清、滑液中白细胞介素－18（IL－18）蛋白及滑膜组织IL－18mRNA表达水平，探讨其在RA致病中的作用。方法 应用双抗夹心酶免疫吸附（ELISA）法和细胞生物法分别测定RA患者血清、滑液中IL－28蛋白水平和生物活性，同时还检测NO、前列腺素E2的含量；有用半定量RT－PCR法检测膜组织IL－18m RNAG表达水平。以骨关节炎（OA）病人及因外伤截肢的正常人作对照。结果 RA患者血清、滑液中IL－18蛋白水平和生物活性均显著高于对照组，滑液中量及活化性比血清高；RA滑膜组织IL－18mRNA表达水平也明显高于对照组。结论 过度表达的IL－18参与了RA的致病过程,；选择性地抑制IL－18生物活性，将是RA治疗的新途径。     

血管紧张素II和缬沙坦对人脐静脉内皮细胞血凝素样氧化低密度脂蛋白受体表达的影响

目的　研究血管紧张素II(AngII)和AngIII型受体 (AT1)拮抗剂缬沙坦对人脐静脉内皮细胞 (HUVECs)血凝素样氧化低密度脂蛋白受体 (LOX 1)基因转录和蛋白表达的影响 ,以进一步探讨AngII和LOX 1在动脉粥样硬化 (AS)中的地位和相互关系 ,以及缬沙坦可能的抗AS作用。方法　将不同浓度AngII(1× 10 -5～ 1× 10 -10 mol/L)与HUVECs共孵育 2 4h ,以及将 1× 10 -6mol/L浓度的AngII与HUVECs作用不同时间 (0、3、6、12、2 4、36、4 8h)后 ,用细胞酶联免疫法和半定量RT PCR分别检测LOX 1蛋白和mRNA表达的情况 ,并观察缬沙坦对此的影响。结果　AngII呈浓度依赖方式诱导HUVECsLOX 1蛋白和mRNA表达增加 ;10 -6mol/L的AngII作用 3h ,内皮细胞LOX 1蛋白和mRNA表达即有显著增高 (P <0 0 0 1) ;随着时间延长 ,LOX 1蛋白和mRNA表达量逐渐增加 ,至 2 4～ 36h达最高峰。缬沙坦可显著抑制AngII诱导的HUVECsLOX 1表达 ,使LOX 1表达接近于正常水平。结论AngII能明显增强HUVECs表达LOX 1,并呈浓度和时间依赖性 ,这可能是AngII促进动脉粥样硬化发生、发展的机制之一 ;此作用可被AT1拮抗剂缬沙坦阻断 ,从而产生可能的抗AS作用。     

融合表达IL-18BP和IL-4的重组腺病毒治疗对胶原诱导型关节炎小鼠血清IL-18表达的作用

目的:构建小鼠IL-18BP和IL-4融合表达的重组腺病毒载体(Ad mIL-18BP/mIL-4),对胶原诱导型关节炎(collagen-induced arthritis,CIA)小鼠进行局部关节基因治疗,观察小鼠血清IL-18表达水平。方法:采用雄性DBA-1/BOM小鼠,建立胶原诱导关节炎的小鼠模型。将融合表达小鼠IL-18BP和IL-4的重组腺病毒载体进行局部关节腔内注射后1、2、4周,采用酶链免疫吸附检测方法(ELISA),检测血清IL-18水平。同时设AdLacZ病毒对照组和PBS组织对照组。结果:CIA小鼠关节腔注射AdmIL-18BP/mIL-4后第1、2、4周,AdmIL-18BP/mIL-4治疗组的血清IL-18平均浓度分别为(36.5±5.4)ng/L、(32.5±3.2)ng/L、(28.7±2.9)ng/L,明显低于相应时间点AdLacZ对照组[(66.2±5.1)ng/L、(69.2±4.2)ng/L、(77.7±3.9)ng/L]和PBS对照组的水平[(67.3±7.1)ng/L、(71.9±1.8)ng/L、(78.7±4.1)ng/L],P均<0.01。但治疗组血清IL-1...     

静脉吸毒致获得性免疫缺陷病毒-1型感染者合并丙型肝炎病毒亚型的分析

目的了解静脉吸毒致获得性免疫缺陷病毒1型(HIV1)感染者混合HIV感染丙型肝炎病毒(HCV)亚型的分布情况。方法采用abbott公司的MurexHCVSerotyping16Assay检测12例单纯HCV感染者及25例静脉吸毒导致HIV1感染者(其中重叠HCV感染的患者12例)HCV不同亚型的抗体,确定HCV的基因亚型。结果12例单纯HCV感染者中HCV1型7例(58.3%),3型2例(25%),4 6型1例(8.33%),6型(包括重叠4型)2例(16.67%)。12例静脉吸毒者中HCV1型7(58.33%),6型4例(33.3%),1 3型1例(8.33%),3型(包括重叠1型)3例(25%)。结论单纯HCV感染者和合并HIV1感染的HCV感染者体内HCV以1型为主,并且均存在2种亚型共感染的现象。     

IFNα-2a对乙型肝炎患者外周血细胞毒性T淋巴细胞CD95表达及其凋亡率影响的实验研究

探讨IFNα-2a对乙型肝炎患者外周血细胞毒性T淋巴细胞(CTL)CD95表达及其凋亡率的影响。分离 26例乙型肝炎患者(其中慢性乙型肝炎16例,慢性重型乙型肝炎10例)和20例健康献血员外周血单个核细胞 (PBMC),在IFNα-2a作用前后通过流式细胞仪分别检测PBMC中CTL CD95的表达及其凋亡率。结果表明,乙型肝炎患者外周血CTL存在活化诱导的细胞死亡(AICD)现象,而IFNα-2a对乙型肝炎患者外周血CTL CD95表达及 CTL凋亡率并无影响。     

耐氟喹诺酮类肺炎克雷伯菌GyrA和ParC的变异

目的 研究肺炎克雷伯菌DNA旋转酶A亚单位（GyrA0和拓扑异构酶ⅣC亚基（ParC)的变异与其耐氟喹诺酮类（FQNL）的关系。方法 采用琼脂平板双倍稀释法测定环丙沙星，左氧氟沙星，依诺沙星和诺氟沙星对临床分离的31株肺炎克雷伯菌及其标准菌株ATCC10031的最低抑菌浓度并对此32株菌GyrA的基因（gyrA)和ParC的基因（parC)进行PCR扩增和DNA序列的分析比较。结果 19株耐FQNL菌都存在GyrA变异同FQNL耐药性相关的变异有Ser83(TCC)→Phe(TTC0,Ile(ATC),Tyr(TAC)和Lys(TGC);Asp87(GAC)→Ala(GCC)，其中Ser83(TCC)→Phe(TTC0,Ile(ATC),Tyr(TAC)和Lys(TGC);Asp87(GAC)→Ala(GCC)。其中Ser83→Ile,Lys的变异是新发现，在9株高度耐FQNL和1株低度耐FQNL菌中同时存在ParC的变异，同FQNL耐药性相关的变异有丝氨酸Ser80(AGC)→Ile(ATC),ATCC10031的ParC同大肠埃希菌的ParC具有很好的同源性。结论 在耐FQNL肺炎克雷伯菌中普遍存在着GyrA的变异其中以Ser83的变异多见，当细菌有GyrA的变异，同时合并有ParC的变异时，其耐药性往往会增强。     

HIV-1/AIDS患者外周血T细胞CD127分子的表达及其临床意义

目的观察CD127分子在未治疗和经高效抗逆转录病毒治疗(HAART)的HIV-1/AIDS患者外周血CD4+、CD8+T细胞上的表达水平,并探讨其临床意义。方法采用流式细胞术检测48例未治疗的和57例经HAART治疗的HIV-1/AIDS患者外周血CD4+和CD8+T细胞表面CD127分子的表达,以36名健康正常人作对照;同时用荧光定量PCR技术检测HIV-1/AIDS患者血浆中HIV-1病毒载量。结果未经治疗组其T细胞CD4+ CD127+和CD8+ CD127+的表达明显低于治疗组和对照组,且与外周血HIV-1病毒的载量相关,病毒载量越高其CD127分子的表达水平越低;HAART治疗后,CD127在CD4+和CD8+T细胞上的表达水平明显上升,显著高于未治疗组,但仍低于对照组的水平;HAART治疗后,CD127分子在T细胞表面的表达水平与CD4+T细胞数成正相关,外周血CD4+细胞数越多,其T细胞表面的CD127的表达率越高。结论 HIV/AIDS患者外周血CD127分子表达明显减少,HAART治疗后能有效地促进CD127分子在T细胞上的表达,一定程度上能重建T细胞亚群功能及数量。     

类风湿关节炎患者RANTES及MCP-1的测定及其意义

目的 研究类风湿关节炎（RA）患者血清、关节滑液中调节活化正常T细胞表达和分泌因子（RANTES）及单桂细胞趋化蛋白1（MCP-1）表达水平，探讨其在RA致病中的作用。方法 用酶联免疫吸附法（ELISA）测定27例类风温关节炎患者血清及病变膝关节滑液中RANTES、MCP-1水平，井与外伤截肢者对照。结果 RA患者血清及滑液中RANTES、MCP-1水平明显高于时照组，且RA滑液中RANTES水平高于血清。结论 以上研究结果提示RA病变关节组织是RANTES产生的主要部位。     

核心蛋白聚糖Ⅱ过表达对肾组织细胞基质金属蛋白酶2和9表达的影响

目的 观察高水平表达的核心蛋白聚糖Ⅱ(DCN)对高糖培养的大鼠肾组织细胞基质金属蛋白酶2(MMP-2)和基质金属蛋白酶9(MMP-9)表达的影响.方法 用大鼠DCN重组腺病毒载体(Ad/DCN)和抗转化生长因子(TGF)-β1中和抗体分别处理不同糖浓度培养条件下的大鼠肾系膜细胞(RMC)和肾小管细胞(HK-2),用Western印迹法观察转染72 h后DCN蛋白水平变化及其对TGF-β1和Ⅳ型胶原(C-Ⅳ)以及MMP-2和MMP-9表达水平的影响.结果 在RMC细胞中,TGF-β1和C-Ⅳ的蛋内表达在高糖条件下升高(分别为1.63±0.02和0.52±0.01),经抗TGF-β1中和抗体或用Ad/DCN转染处理72 h有明显下降(TGF-β1均下降至0,C-Ⅳ分别为0.29±0.01和0.21±0.01,均P＜0.05);MMP-2和MMP-9在高糖条件下表达下降(分别为0.01±0.00和0.32±0.01),经抗TGF-β1中和抗体或用Ad/DCN转染处理72h有明显上升(MMP-2分别上升至0.65±0.01和0.67±0.01,MMP-9分别上升至0.89±0.01和0.73±0.01,均P＜0.05).而在HK-2细胞中,TGF-β1和C-Ⅳ的蛋白表达在高糖条件下也升高(分别为1.45±0.0l和0.41±0.01),且MMP-2的表达升高(0.27±0.01),经抗TGF-β1中和抗体或用Ad/DCN转染处理72h则有明显下降(TGF-β1分别为0.06±0.01和0.08±0.01,C-Ⅳ分别为0.11±0.01和0.01±0.00,MMP-2分别为0.14±0.01和0.06±0.01,均P＜0.05).结论 高糖对肾小球系膜细胞和小管细胞的基质金属蛋白酶表达的影响是不同的,降低TGF-β1活性可使肾小球系膜细胞和小管细胞基质金属蛋白酶表达转变.