应用微卫星多态位点对X连锁型视网膜色素变性疾病进行遗传连锁分析的研究

目的应用遗传连锁分析方法对X连锁型视网膜色素变性家系进行分析，确定其致病基因的所在位点。方法在2个目前常见的X-连锁遗传位点——RP2和RP3处分别选取具有高信息量的微卫星位标，对2例疑似X连锁型视网膜色素变性家系进行遗传连锁分析。通过对家系成员的单倍型分析，并使用两点法计算其最大优势时数（LOD Score）值，确定致病基因所在的染色体位置。结果微卫星标记DXS993与2例遗传家系表型间最大LOD值分别为：〈-2和0．8；DXS 1068在2例遗传家系LOD值分别为0．4和0．8。结论RP2基因可能不是XY家系的致病性基因；在ZLK家系，怀疑疾病位点与RP2或RP3基因连锁。用遗传连锁分析方法确定致病基因所在染色体的范围起到重要的作用。     

一个疑似X连锁型视网膜色素变性家系的遗传连锁分析的研究

目的对一个疑似X连锁型视网膜色素变性(X-linked retinitis pigmentosa,XLRP)家系进行分析,确定其致病基因的所在位点。方法选取已知XLRP候选基因附近的微卫星位标,用多点参数分析方法计算其最大优势对数值(LOD score),并通过对家系成员单倍型分析,确定该家系致病基因所在的染色体位置。结果位于X染色体长臂的微卫星标记DXS8043与该例遗传家系间最大LOD值小于-2,其他位于X染色体短臂的11个微卫星标记与该例遗传家系LOD值保持在0.5上下,无明显的高值。单倍型结果表明该家系中2例患者兄弟(Ⅲ1、Ⅲ6)和他们的携带者母亲(Ⅱ2)在DXS8051与DXS1214之间拥有在正常成员中不存在的基因型,表明该基因型与疾病共分离,进一步确定了他们X性连锁遗传模式,并且可将致病基因初步定位于DXS8051与DXS1214之间的RP23和RP6基因。结论可以排除该例家系的致病位点与X染色体长臂上的RP24基因的连锁,高度怀疑连锁位点存在于X染色体的短臂的RP23和RP6基因,需另增加位标的信息量,以进一步缩小致病基因所在的具体范围。     

两例疑为X连锁型视网膜色素变性家系的单倍型分析研究

目的应用遗传连锁分析方法对X连锁型视网膜色素变性家系进行分析,定位其致病基因的所在位点.方法选取已知X连锁视网膜色素变性候选基因附近的短串联重复序列多态性标记(short tandem repeat polymorphism, STRP),即在RP2、RP3、RP6、RP23和RP24处分别选取具有高信息量的微卫星位标,对2例疑似为X连锁型视网膜色素变性家系进行遗传连锁分析;通过对家系成员的单倍型分析,并进行两点法连锁分析,确定其致病基因所在染色体的大致位置.结果 2例家系在DXS 993处得到的最大LOD值分别为:1.18和1.03;在DXS 1068处得到的最大 LOD值分别为:0.58和-2.69;在DXS 1214处得到的最大LOD值分别为:-2.33和-2.45;在DXS 8051处得到的最大LOD值分别为:-2.34和-2.51;在DXS 8043处得到的最大LOD值分别为:-2.23和-2.62.结论 ZCF家系的致病基因,可能不在RP3、RP6、RP23或RP24位点;而对于FYJ家系,我们则怀疑致病基因位于RP2位点,但也不排除与RP3连锁;用遗传连锁分析方法对确定致病基因所在染色体的范围起到重要的作用.     

用RFLP连锁分析法对一个Becker型肌营养不良症家系突变基因的研究

作者用DMD/BMD基因位点内部DNA探针PERT87系列及XJ2.3和侧翼连锁探针754对一个Becker型肌营养不良症家系进行了RFLP单体型连锁分析,结果发现该家系三个同胞患儿携带致病基因的那条X染色体来自他们表型正常的外祖父。椐此推论,患儿外祖父在其精子发生中产生了一次EMD位点的基因突变,通过患儿母亲将BMD致病基因传递到患儿这一代,因此,患儿姨母携带致病基因的风险仅相当于该位点的自然突变率。研究结果表明,RFLP单体型连锁分析有助于追溯到BMD家系中突变基因的起源,从而对这些家系的遗传分析起重要的指导作用。     

应用Rb基因内多态位点作家系连锁分析预测视网膜母细胞瘤

应用Ｒｂ基因内探针ｐ６８ＲＳ２．０，ｐ１２３Ｍ１．８及ＰＣＲ扩增Ｒｂ基因内多态位点Ｒｂｌ．２０及ＸｂａＩ，对６个遗传性Ｒｂ家系进行连锁分析，结果６个家系均可获得信息。证实以上方法可用于遗传性视网膜母细胞瘤突变基因携带者的检测，为产前诊断提供了有效途径。     

中国人非胰岛素依赖型糖尿病侯选基因的连锁分析

在１２个中国人非胰岛素依赖型糖尿病（ＮＩＤＤＭ）家系中对胰岛素受体,葡萄糖运蛋白２,葡萄糖激酶３个基因的遗传标志进行连锁分析,结果表明：胰岛素受体基因的变异在所涉及的家系中不是中国人常见型ＮＩＤＤＭ的主要原因。葡萄糖运转蛋白２基因或其附近的变异在部分中国人ＮＩＤＤＭ家系中有一定致病倾向,而葡萄糖激酶遗传标志与ＮＩＤＤＭ的连锁分析在６个家系中总ＬＯＤ（ｌｏｇａｒｉｔｈｍ ｏｆ ｏｄｄｓ）值达３．１５     

X连锁遗传的薄基底膜肾病与COL4A5基因连锁

目的 运用Ｘ染色体上与ＣＯＬ４Ａ５基因紧密连锁的微卫星标志２Ｂ６及ＤＸＳ１０１对９个薄基底膜肾病家系进行基因连锁分析。方法 用ＰＣＲ扩增９例薄基底膜肾病患者及其家系成员Ｘ染色体上的微卫星标志２Ｂ６及ＤＸＳ１０１,１０％聚丙烯酰胺凝胶电泳后银染分析结果,运用ＰＰＡＰ软件计算Ｌｏｄ ｓｃｏｒｅ值。结果 ３个家系的薄基底膜肾病与Ｘ染色体上的ＣＯＬ４Ａ５基因连锁,座位间的Ｌｏｄ ｓｃｏｒｅ值为２．７,θ＝     

一个先天性甲状腺功能亢进症家系的排除性定位分析

目的 对一个常染色体显性遗传的先天性甲状腺功能亢进症家系,进行与已知致病基因TSHR和THRB的连锁分析以确定此家系致病基因是否为这2个已知基因.方法 选择3个与TSHR和THRB紧密连锁的微卫星标记物D14S74、D3S2338和D3S1266,进行微卫星标记的基因连锁分析,采用Genemapper 3.5软件分析数据. 结果 3个微卫星标记物的LOD值均小于1,显示该家系致病基因与这3个位点均不连锁,提示该家系可能存在新致病基因. 结论 常染色体显性遗传类型的先天性甲状腺功能亢进症可能有新致病基因.     

X—连锁肌营养不良症的RFLP连锁分析

本文报告了三个家族性DMD和(或)BMD家系,并用该基因位点内部DNA探针PERT87系列及XJ2.3和两翼连锁探针754和C7对它们进行了Southern分子杂交。根据上述DNA探针所检测到的多种DNA多态性标记,建立了三个家系中所有成员每条X染色体Xp21的RFLP单倍型,通过三个家系的单倍型连锁分析,在每个家系中找到了和致病基因紧密连锁的特异性DNA标记,结果将家系中大部分女性个体的携带者风险估计到临床可实践的范围。同时,这种DNA分析也为将来这些家系的产前基因诊断奠定基础。     

Amp-FLP连锁分析对DMD基因诊断的价值

①目的　探讨扩增片段长度多态性（Ａｍ ｐ－ＦＬＰ）连锁分析对杜氏进行性肌营养不良（ＤＭＤ）基因诊断中的价值。②方法　运用多重聚合酶链反应（ＰＣＲ）、聚丙烯酰胺凝胶电泳银染法,对１０ 个ＤＭＤ家系成员的抗肌营养不良蛋白基因内９个基因区进行了Ａｍ ｐ－ＦＬＰ连锁分析。③结果　１０ 个ＤＭＤ家系中的９ 个先证者,６ 例为外显子缺失,１ 例为内含子缺失,２ 例为非缺失型。④结论　Ａｍ ｐ－ＦＬＰ连锁分析是对ＤＭＤ进行基因诊断的实用方法。     

两个家系中X连锁视网膜色素变性的RP2 基因无义突变

目的 检测引起2个家系产生X连锁视网膜色素变性的RP2基因突变。方法 根据RP2基因外显子的内含子DNA序列合成8对引物，以人基因组DNA为模板，PCR扩增出包含RP2基因所有外显子的8个片段。扩增产物化后直接测序。通过比较病人和正常人相应的DNA序列，检测基因突变位点。结果 在2个家系中首次检测到RP2基因的同一个无义突变38C→T。突变位于RP2基因的第2外显子。它使该基因编码精氨酸的遗传密码CGA变为终止密码TGA，引起发病。结论 该突变的检出有助于RP2蛋白的功能分析和X连锁视网膜色素变性的基因诊断。     

香港地区汉族人视紫红质基因和视网膜色素变性1基因与视网膜色素变性的双基因关联分析

目的研究视紫红质基因(RHO)和视网膜色素变性1(RP1)基因在香港地区汉族视网膜色素变性(RP)患者中的突变频率及特征,并进一步探讨它们在RP发病机理中潜在的相互作用。方法运用高通量构象敏感凝胶电泳和直接测序方法,对151例香港地区汉族RP先证者和150名对照者进行了RHO和RP1基因全编码区和邻近剪切位点的内含子区域序列突变的检测。对携带基因突变的12例RP先证者的46名亲属进一步作分离分析。运用单因素分析、多因素分析和基因型家系不平衡分析研究RHO和RP1基因对RP的作用。结果RHO基因和RP1基因的突变检出率各为1.3%。RHO基因中-26G>A可增高RP危险性,而RP1基因中R872H则可降低RP危险性。多因素Logistic回归分析揭示了RHO基因IVS423G>A分别与RP1基因N985Y和C2033Y之间存在相互作用。结论在香港地区汉族RP患者中,RHO和RP1基因的突变率比其他人群中RP患者的突变率低。除了致病性基因突变,非编码区的序列改变也可改变RP的易感性。部分RP患者由双基因突变引起,当然多基因共同作用也完全可能存在。     

SCREENING FOR MUTATIONS IN A NOVEL RETIAL—SPECIFIC GENE AMONG CHINESE PATIENTS WITH RETINTITS PIGMENTOSA

Objective.To identify and evaluate mutations in the RP1 gene among Chinese patients with retinitis pigmentosa(RP).Methods.Leukocyte DNA of 92 RP patients were collected in Hong Kong.Sequence changes of the entire coding region of the RP1 gene were examined using PCR,conformation sensitive gel electrophoresis and DNA sequencing.Results.In total,1 nonsense mutation and 1 nonsense variant as well as 10 missense alterations were identified in the RP1 gene,among which,Arg 677 Ter was found in 1 RP patient and another nonsense variant,Arg 1933Ter ,was identified in 3 normal individuals and 1 patient with Stargardt‘s disease,suggesting its nonpatogenicity,Arg667 Ter is expected to lead to large disruptions of the encoded protein.Couclusions.The nonpathogenicity of Arg 1933 Ter indicates that the C-terminal 224 residues of RP1 protein may be not critical for RP1.The most C-terminal truncation previously reported was due to Tyr1053(1-bp del) and occurred in RP patients.Thus RP can be caused by reduction in the level of the region of RP1 protein after condon 1052 but before 1933.T o ascertain such a proposition,genotypes of more RP patients may reveal more RP cousative mutations and more sequence alterations different than those of other ethnic groups.     

The molecular cloning and restriction enzyme mapping of retinitis pigmentosa 3 (RP3) locus

X-linkedretinitispigmentosa(XI-RP)isagroupofseriousgeneticdiseaseswithunknownpathogenesis.AlotofllnkageanalysesforRPfamiliesshowedthattherewereatleasttwogenelociexistingintheXchromosomeshortarm.Thefirstlocus(RPZ)waslocatedinXpll,closetoDXS7;thesecondlocus(RP3)waslocatedinXp21,1cMdistaltoOTCLlj.TherecentresearchdatashowedthatRP3locuswasfinelymappedwithinabout270kbrange,betweenOTCandDXSlll0markersLZj.ThismakestheRP3thefirstchoicetargetofpositionalcloningL'].Inthiswork,wesucceededi…     

SCREENING FOR MUTATIONS IN A NOVEL RETINA-SPECIFIC GENE AMONG CHINESE PATIENTS WITH RETINITIS PIGMENTOSA

To identify and evaluate mutations in the RPl gene among Chinese patients with retinitis pigmen-tosa (RP).Methods. Leukocyte DNA of 92 RP patients were collected in Hong Kong. Sequence changes of the entire coding region of the RP1 gene were examined using PCR, conformation sensitive gel electrophoresis and DNA sequencing.Results. In total, 1 nonsense mutation and 1 nonsense variant as well as 10 missense alterations were identified in the RPl gene, among which, Arg677Ter was found in 1 RP patient and another nonsense variant, Argl933Ter, was identified in 3 normal individuals and 1 patient with Stargardt' s disease, suggesting its nonpathogenicity. Arg677Ter is expected to lead to large disruptions of the encoded protein.Conclusions. The nonpathogenicity of Argl933Ter indicates that the C - terminal 224 residues of RPl protein may be not critical for RPl. The most C - terminal truncation previously reported was due to Tyr1053 (1-bp del) and occurred in RP patients. Thus RP can be caused by reduction in     

一常染色体显性遗传寻常型鱼鳞病家系致病基因的定位

目的 研究一常染色体显性遗传寻常型鱼鳞病家系的致病基因。方法 采用基因组扫描方法,利用1号染色体上的微卫星标记对该家系进行连锁分析,然后对候选基因FLG的部分编码区及外显子与内含子交界处进行突变检测。结果 在D1S2696得到最大两点连锁LOD值3．46（0=0）,单体型分析将疾病基因定位在D1S2726-D1S305之间约15cM范围内;在FLG基因的外显子非重复序列及部分重复序列未发现与疾病相关的突变。结论 该寻常型鱼鳞病家系的致病基因位于D1S2696附近,其致病基因可能是除FLG以外的其他基因。     

人REV3基因启动子区的克隆和生物信息学分析及其对MNNG的反应

目的：了解人REV3基因对化学致癌物N-甲基-N'-硝基-N-亚硝基胍(MNNG)诱发转录上调的机制。方法：根据BLAST序列比对、启动子和转录因子结合部位预测软件，对人REV3基因促进子区进行生物信息学分析；用巢式PCR技术克隆了人REV3基因启动子区；用瞬时转染二重荧光素酶报道基因系统检测人REV3启动子对化学致癌物MNNG的反应。结果：生物信息学分析显示，人REV3基因启动子区位于6号染色体PAC克隆RP3-415N12，假设的启动子区有启动子序列、富含cpG岛和包括AP-1／c-Jun／c-Fos、AP-2、STAT、CREBP和NF-kB等的转录因子识别部位。将启动子区2582bp的片段插入荧光素酶报道基因载体pGL3-Basic中，构建了重组体质粒pGL3-2582。瞬时转染检测显示，该假设的启动子区确有启动子功能，对MNNG发生反应。结论：成功地克隆了人REV3基因启动子区，并证明其对MNNG发生反应。提示当细胞处于基因毒应激状态下可在转录水平调节REV3基因。