AcSDKP对硅肺纤维化大鼠胶原含量及NF-κBp65表达的影响

目的研究N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸(AcSDKP)对硅肺纤维化大鼠肺内胶原合成及核转录因子κB(NF-κB)p65的影响。方法将大鼠分为3组:对照组(每只大鼠支气管内灌注生理盐水1mL,8周后处死)、硅肺模型组(每只大鼠支气管内灌注SiO2混悬液1mL,8周后处死)、AcSDKP治疗组(每只大鼠支气管内灌注SiO2混悬液1mL,并持续给予AcSDKP 800μg·kg-1·d-1,8周后处死)。从HE染色、VG染色和羟脯氨酸胶原测定法检测各组大鼠肺纤维化程度及胶原含量,用免疫组化法和免疫印迹法检测NF-κB p65蛋白的表达。结果与对照组比较,硅肺模型组硅结节的数量、胶原含量和NF-κB p65的表达增高。与硅肺模型组相比,AcSDKP治疗组矽结节的数量、胶原含量和NF-κB p65的表达降低。结论 AcSDKP可能会通过增加B抑制蛋白(I-κB)的稳定性来抑制NF-κB p65的活性及表达,进而影响着肺泡炎与硅肺纤维化的进展。     

亚硒酸钠对实验性硅肺大鼠作用的研究

目的 :研究亚硒酸钠对α 石英毒性的拮抗作用 ,探寻硅肺的发病机理及其防治。方法 :观察亚硒酸钠对α 石英诱发细胞毒性的作用及对实验性硅肺大鼠的作用。结果 :亚硒酸钠可明显抑制由α 石英引起的细胞存活率下降、脂质过氧化水平 (LPO)升高、胞浆游离Ca2 浓度 ([Ca2 ]i)增大 ,并可减缓实验性硅肺大鼠肺组织硅结节的形成和纤维化的趋势。结论 :提示亚硒酸钠对α 石英毒性具有明显的拮抗作用 ,有可能成为硅肺防治药物之一。     

香烟减毒添加剂对吸烟小鼠免疫功能及气管和肺结构的影响

目的 :探讨香烟减毒添加剂对吸烟小鼠免疫功能及气管和肺结构的影响。 方法:昆明种小白鼠 15 0只 ,随机分为正常对照组、低剂量普通烟组、低剂量实验烟组、高剂量普通烟组、高剂量实验烟组 ,采用巨噬细胞吞噬试验检测巨噬细胞吞噬活性 ;通过淋巴细胞转化试验检测细胞免疫功能 ;通过测定白细胞数及胸腺、脾指数来检测小鼠非特异性免疫功能 ;常规方法制作组织切片 ,光镜观察小鼠气管和肺结构。 结果 :(1)普通烟组与正常对照组相比 ,小鼠的巨噬细胞吞噬率、白细胞总数明显下降 (P均 <0 .0 1) ;(2 )含减毒添加剂的实验烟组的小鼠巨噬细胞吞噬率、吞噬指数及白细胞总数均明显高于不含添加剂的普通烟组 (P <0 .0 1) ;(3)实验烟组的胸腺指数及脾指数略高于普通烟组 ,但差异无统计学意义。实验烟组的淋巴细胞转化率与普通烟组相比差异也无统计学意义 ;(4 )实验烟组及普通烟组小鼠的气管和肺内支气管均有炎症改变 ,实验烟组小鼠肺组织瘀血程度稍轻。 结论 :香烟减毒添加剂可以增强吸烟小鼠的免疫功能 ,但对气管、肺内支气管的损害无明显减轻作用。     

Y-27632对慢性阻塞性肺疾病气道重塑的作用机制

目的 建立慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠模型,探讨Rho激酶抑制剂Y-27632对COPD大鼠模型气道重塑的作用机制.方法 将30只雄性Wistar大鼠随机分为COPD模型组和Y-27632干预组和正常对照组.采用烟熏及气管滴入脂多糖(LPS)法建立COPD大鼠模型,三组大鼠饲养至第91天;用小动物肺功能分析系统测定各组大鼠的肺功能,取支气管肺泡灌洗液(BALF)进行细胞分类计数,观察肺组织病理改变,测定小支气管和肺小动脉管径及平滑肌厚度.结果 ①肺功能改变与对照组比较,模型组吸气阻力(Ri)和呼气阻力(Re)升高,0.3s用力呼气容积占用力肺活量百分比(FEV0.3/FVC)降低(P＜0.01);干预组Ri、Re及FEV0.3/FVC均有改善,与模型组比较差异有统计学意义(P＜0.01).②BALF细胞总数及分类计数:模型组的BALF细胞总数和肺泡巨噬细胞(AM)比例均高于对照组(P＜0.05);干预组细胞总数、AM比例较模型组下降(P＜0.05).③病理形态学观察:镜下观察对照组大鼠支气管肺组织上皮结构和肺泡结构完整;模型组肺组织支气管杯状细胞增生,黏膜下层及肌层大量炎性细胞浸润,管腔内大量炎症细胞浸润,肺泡过度扩大融合.干预组肺组织气道壁虽有炎症细胞浸润,但总体情况较模型组减轻.与对照组相比,模型组小支气管明显增厚,细支气管伴行肺小动脉平滑肌亦增厚(P＜0.01);干预组与对照组比较肺小动脉平滑肌厚度有所增加(P＜0.05),小支气管平滑肌增厚情况与模型组比较有改善(P＜0.05).结论 Rho/Rock信号通路激活可能是引起AM在肺组织聚集增加的原因之一.Rho激酶抑制剂Y-27632抑制Rho/Rock信号通路,可能通过减少COPD大鼠的AM在气道的聚集,减轻肺组织的慢性炎症,从而改善气道重塑.     

心房钠尿肽信号通路在小鼠支气管哮喘发病中的作用及其机制

目的探讨心房钠尿肽(ANP)信号通路在小鼠支气管哮喘(BA)发病中的作用及其机制。方法 40只雌性BALB/C小鼠随机分为正常对照组、BA组、ANP组和ANP+A71915组,每组10只;建立BA小鼠模型和ANP在体干预模型,观察各组小鼠支气管炎症改变情况和支气管黏液分泌情况,采用免疫组织化学技术检测肺组织T-bet和GATA-3蛋白的表达。结果 BA组小鼠支气管黏膜充血水肿及支气管周围炎性细胞浸润较正常对照组显著(P<0.01),ANP组小鼠支气管黏膜充血水肿及支气管周围炎性细胞浸润较BA组更严重(P<0.01),ANP+A71915组小鼠支气管黏膜充血水肿及支气管周围炎性细胞浸润较ANP组明显减轻(P<0.01)。BA组小鼠肺组织中GATA-3蛋白阳性表达显著高于正常对照组(P<0.01),ANP组小鼠肺组织中GATA-3蛋白阳性表达显著高于BA组(P<0.01),ANP+A71915组小鼠肺组织中GATA-3蛋白阳性表达显著低于ANP组(P<0.01)。BA组小鼠肺组织中T-bet蛋白表达显著低于正常对照组(P<0.01),ANP组小鼠肺组织中T-bet蛋白表达明显低于BA组(P<0.01),ANP+A71915组小鼠肺组织中T-bet蛋白表达明显高于ANP组(P<0.01)。结论 ANP信号可能通过调控T-bet和GATA-3蛋白的表达参与BA小鼠免疫功能失衡的发病过程。     

p38 MAPK在大鼠急性肺损伤模型中的表达及抗氧化剂NAC的影响

目的:观察磷酸化的分裂原激活的蛋白激酶(p38 MAPK)在脂多糖(LPS)引起的大鼠急性肺损伤中在体原位的表达. 方法:采用免疫组织化学ABC法和Western-blot技术,检测磷酸化的p38 MAPK在大鼠急性肺损伤模型气道和肺组织的表达,并同时观察N-乙酰半胱氨酸(NAC)对其表达的影响. 结果:对照组气道和肺组织无或偶见反应极弱的p38 MAPK阳性细胞,散在分布于气道上皮细胞和肺泡上皮细胞. LPS致伤组p38 MAPK阳性细胞较对照组明显增多(P<0.01),主要分布于浸润的炎症细胞、气道上皮细胞、肺泡上皮细胞、胸膜间皮细胞和血管内皮细胞. NAC治疗组气道和肺组织中阳性细胞数较LPS致伤组明显减少(P<0.01),Western-blot结果验证了上述结果. 结论:LPS诱发的大鼠急性肺损伤模型中,磷酸化p38 MAPK在气道和肺组织内表达增加,p38 MAPK的激活见于肺组织内多数细胞,提示肺内炎性和非炎性细胞均有p38 MAPK信号分子的激活. NAC是有效的抗氧化剂,其对急性肺损伤的炎症抑制可能是通过抑制p38 MAPK的激活起作用.     

核因子κB反义寡核苷酸对博莱霉素致小鼠肺间质纤维化形成及白细胞介素4表达的影响

目的探讨核因子-κB（NF-κB）在博莱霉素（BLM）致肺间质纤维化小鼠支气管肺泡灌洗细胞中的表达和对白细胞介素4（IL-4）的影响,及其反义寡核苷酸（ASON）对肺间质纤维化的干预作用。方法将C5781／6小鼠随机均分为4组,对照组和BLM组经尾静脉注射生理盐水,ASON组注射p65ASON,SON组注射p65顺义寡核苷酸（SON）,6h后,BLM组、ASON组、SON组气管内注射博莱霉素-A5（BLM-A5）,对照组注射生理盐水。对照组在气管注射后0．5、1、14d,其余各组在0．5、1、3、7、14、28d处死小鼠,行支气管肺泡灌洗,灌洗液测IL4,灌洗细胞行P65和IL-4免疫组织化学染色。每组另取5只小鼠,在气管注射后28d处死,左肺行HE及Masson三色病理染色,右肺测羟脯氨酸。结果（1）BLM组和SON组肺病理可见大片实变及胶原沉积。而ASON组无实变,肺间质可见少量胶原纤维。（2）BLM组和SON组肺组织羟脯氨酸含量较对照组明显增高,ASON组明显低于BLM组和SON组。（3）BLM组和SON组支气管肺泡灌洗细胞的胞核p65表达明显高于对照组,亦明显高于ASON组。（4）BLM组和SON组支气管肺泡灌洗细胞IL-4的表达明显高于对照组,亦明显高于ASON组。（5）BLM组和SON组支气管肺泡灌洗液IL-4含量明显高于对照组,亦明显高于ASON组。（6）BLM组和ASON组小鼠支气管肺泡灌洗细胞表达的p65与IL-4均呈正相关（r=0．890,P〈0．05;r=0．909,P〈0．05）。结论BLM致肺间质纤维化的病理过程中,支气管肺泡灌洗细胞NF-κB的表达明显增强,并可能通过IL-4途径形成肺间质纤维化。NF-κBASON可明显抑制NF-κB的活化和IL-4的表达,并进而抑制BLM所致的肺间质纤维化。     

大鼠肺移植受体OB与细胞凋亡关系的初步研究

目的探讨大鼠肺移植受体闭塞性细支气管炎(OB)与细胞凋亡的关系。方法采用大鼠气管异位移植模型模拟肺移植术后OB。随机分为对照组、移植组和免疫抑制剂治疗组,分别于术后7、14和28?d取出移植物。原位末端标记法（TUNEL）检测移植气管细胞凋亡情况;免疫组织化学EnVison法检测移植气管Caspase 3和Bax基因蛋白的表达。结果① 动物模型气管HE染色检测到术后排斥反应,与OB组织学改变符合;② TUNEL检测到大鼠OB模型存在细胞凋亡,免疫抑制剂治疗组较移植组细胞凋亡数少,移植中后期两组差异有统计学意义（P＜0.05）;③ 免疫组织化学检测到大鼠OB模型Caspase 3、Bax基因蛋白表达在移植组和免疫抑制剂治疗组增高,移植中后期两组差异有统计学意义（P＜0.05）。结论① 大鼠肺移植受体OB与细胞凋亡相关;② 抑制细胞凋亡可治疗肺移植受体OB。     

亚硒酸钠对实验性硅肺大鼠作用的研究

目的：研究亚硒酸钠对α－石英毒性的拮抗作用，探寻硅肺的发病机理及其防治。方法：观察亚硒酸钠对α－石英诱发细胞毒性的作用及对实验性硅肺大鼠的作用。结果：亚硒酸钠可明显抑制由石英引起的细胞存活率下降，脂质过氧化水平（ＬＰＯ）升高、胞浆游离Ｃａ＾２＋浓度（「Ｃａ＾２＋」ｉ增大，并可减缓实验性硅肺大鼠肺组织硅结节的形成和纤维化的趋势。结论：提示亚硒酸钠对α－石英毒性具有明显的拮抗作用，有可能成为硅肺防治     

大鼠硅肺纤维化中凋亡及信号通路caspase-3的作用

目的：观察大鼠二氧化硅灌注后肺组织细胞凋亡变化规律,并探讨它们在硅肺发生发展中的意义及其活化的caspase-3在细胞凋亡过程中的作用。方法：48只SD大鼠随机分为二氧化硅灌注组和生理盐水对照组,制作大鼠硅肺纤维化模型。应用流式细胞仪观察灌注后各时相点肺组织细胞的凋亡率。应用免疫组织化学技术检测caspase-3蛋白的表达。结果：成功复制大鼠硅肺纤维化模型;实验组肺组织中细胞凋亡率明显高于对照组,并呈时间依赖性增加。Caspase-3主要在肺泡上皮细胞、肺巨噬细胞及浸润的炎症细胞中表达增强,其表达强度与细胞凋亡无明显相关性(r=0.215, P＞0.05)。结论：在大鼠硅肺发生的早期阶段,肺组织细胞凋亡起重要作用;而caspase-3又在调控细胞凋亡中起重要作用。     

矽肺患者外周血调节性T细胞水平与肺功能的相关性研究

目的探讨矽肺患者外周血调节性T细胞水平与肺功能的相关性。方法选取2012年7月-2012年12月间于我院住院治疗的矽肺患者45例及同期相同接尘条件的正常者30例为对照组,分别检测两组的外周血调节性T细胞水平及肺功能指标,对比分析两者间的相关性。结果与对照组相比,矽肺患者的调节性T细胞、CD4^＋T细胞水平及调节性T细胞在CD4^＋T细胞中所占比例均显著上升（P〈0.01）;各项肺功能指标均较对照组显著降低（P〈0.05）;此外,其外周血调节性T细胞水平与CD4^＋T细胞存在正相关性,CD4^＋CD25^＋/CD4^＋与FVC（%）及MMEF75/25间也存在正相关性（P〈0.05）。结论矽肺患者普遍存在肺功能低下,调节性T细胞水平的检测,能够有效反应矽肺患者肺功能状况。     

山苦茶对小鼠非特异性免疫功能的影响

目的:探讨山苦茶对小鼠非特异性免疫功能的影响。方法:80只昆明种健康小鼠随机分为4组:空白对照组(给予无菌蒸馏水0.1mL/10g)及山苦茶低、中、高剂量组(分别给予山苦茶0.5、1.0、2.0g/kg),每组20只,分别作小鼠碳粒廓清试验和腹腔巨噬细胞吞噬试验,计算并比较各组小鼠胸腺指数、脾脏指数、校正吞噬指数a及腹腔巨噬细胞吞噬率、吞噬指数。结果:灌胃不同剂量山苦茶水提物7d后,与空白对照组相比,山苦茶各剂量组小鼠的胸腺指数、脾脏指数以及单核巨噬细胞碳粒廓清能力、吞噬率、吞噬指数均明显增加,差异均有统计学意义(P均<0.05)。结论:山苦茶可通过影响小鼠免疫器官来增强机体的免疫能力;可加快小鼠体内碳颗粒的清除速度,增强小鼠的非特异性免疫能力;能提高小鼠巨噬细胞的吞噬率和吞噬指数,对正常机体的非特异性免疫功能具有增强作用。     

早期矽肺损伤的蛋白质组学研究及 α 晶状体球蛋白 B 的表达与验证

目的：建立二氧化硅诱导早期肺损伤大鼠肺组织的二维凝胶电泳图谱,筛选在此过程中起关键作用的靶 蛋白分子并进行验证。方法：制作二氧化硅诱导大鼠早期肺损伤模型(实验组),通过HE染色观察肺部形态变化,用 双向凝胶电泳法建立二维凝胶图谱,用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)分析鉴定差异表达蛋白 分子,用Western印迹验证差异表达蛋白分子在肺组织中的表达。结果：成功制作二氧化硅早期肺损伤模型,建立实 验组及对照组肺组织二维凝胶电泳图谱,二者蛋白表达及分布存在差异,发现差异点40个,选取重复性好,在凝胶 上位置和表达适中的共20个进行MALDI-TOF-MS鉴定及数据库搜索并筛选,鉴定出差异蛋白13种,包括α晶状体球蛋 白B、间隙蛋白I、肥大细胞蛋白酶等,进一步用Western印迹证实实验组α晶状体球蛋白B表达明显增加,与蛋白质组 学结果一致。结论：α晶状体球蛋白B在早期矽肺组织中表达明显升高,提示其可能在矽肺的发生发展中起关键作用。     

肺腺癌脑转移动物模型的生物发光成像和SPECT/CT的比较

目的 探究环磷酰胺(CY)剂量和检测终点对BALB/c小鼠免疫抑制模型效果的影响.方法 将BALB/c小鼠按照体质量随机分为对照组、CY 40 mg/kg组、CY 60 mg/kg组,此三组均设末次给药后第5日为检测终点,并设CY 60 mg/kg-2组,末次给药后第3日为检测终点,检测终点时进行血液学检查,测定脾脏、胸腺的脏器重量,检测T、B淋巴细胞介导的免疫功能改变.结果 与对照组相比,各模型组上述检测指标均有不同程度的改变;比较各模型组结果,当检测终点相同时,60 mg/kg剂量造模效果更好;固定CY剂量,选择末次给药第3日为检测终点效果更优.结论 CY剂量和检测终点的不同会影响BALB/c小鼠免疫抑制模型效果,选择60 mg/kgCY剂量的造模效果优于40 mg/kg;末次给药后第3日更适合作为免疫评价模型的检测终点.     

大鼠肺成纤维细胞的体外培养及急性炎症模型的建立

目的:探讨大鼠肺成纤维细胞体外培养及急性炎症模型建立的方法.方法:采用胰酶消化法、差速贴壁法,分离、纯化肺成纤维细胞,然后采用H-DMEM培养液进行细胞培养.采用免疫荧光法对所分离的细胞进行鉴定.采用脂多糖(LPS)干预建立成纤维细胞体外急性炎症模型,实验分组:空白组、0.1 μg/mL LPS组、1μg/mL LPS组、10 μg/mL LPS组,并利用细胞增殖/毒性检测试剂(MTT)在干预后3、6、9 h分别测定吸光度(OD)值.结果:成纤维细胞体外培养24 h后,镜下可见组织块周边有长梭型细胞爬出,72 h后生长迅速,4d接近融合.经免疫荧光测定,肺成纤维细胞波形蛋白(vimentin)阳性,CD31阴性.在干预后各时间段中,1 μg/mL LPS组测得的OD值高于其他各组,在1μg/mL LPS组中,干预后6h测得的OD值高于其他各时间段,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论:该法可以体外培养出大鼠肺成纤维细胞,用浓度为1 μg/mL的LPS干预体外培养的成纤维细胞6h能建立较为合理的急性炎症模型.     

丝瓜提取物对小鼠巨噬细胞功能的影响

目的　探讨丝瓜的果、叶、藤提取物对小鼠巨噬细胞功能的影响。方法　将 50只小鼠随机等分为正常对照组、阳性对照组、实验Ⅰ组、Ⅱ组和Ⅲ组。正常对照组用生理盐水灌胃 ,实验Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组分别用丝瓜的果、叶和藤提取物灌胃 ,阳性对照组用胸腺肽灌胃 ;10d后检测小鼠腹腔巨噬细胞内酸性磷酸酶活性及巨噬细胞吞噬功能的变化。结果　实验组吞噬功能强度由高到低依次为实验Ⅲ组、实验Ⅰ组和实验Ⅱ组 ,但 3组比较无统计学差异 (P >0 .0 5)。各实验组与正常对照组相比 ,小鼠腹腔巨噬细胞内酸性磷酸酶活性和巨噬细胞吞噬功能均有不同程度增强 (P <0 .0 5) ,与阳性对照组相比无显著差异 (P >0 .0 5)。结论　丝瓜不同部位提取物对小鼠巨噬细胞功能均有增强作用     

CY211在胰腺癌早期诊断及转移分化中的应用价值

目的探索CY211在胰腺癌早期诊断及其转移分化中的应用价值。方法收集病理确诊的胰腺癌病人血清,分别按淋巴结阴性阳性和分化程度各分为两组进行血清CY211、CA199、LPS（脂肪酶）、AMY（淀粉酶）检测并与健康对照组比较。结果 CY211、CA199、LPS联合诊断胰腺癌ROC达到96.7%,灵敏度达到92%;淋巴结（＋）组CY211血清浓度高于淋巴结（-）组（P〈0.01）,低分化组高于高分化组（P〈0.01）。结论 CY211能辅助诊断胰腺癌,联合CA199、LPS可提高诊断灵敏度,对胰腺癌转移分化鉴定有一定作用。     

冬凌草甲素对LPS诱导Raw264.7巨噬细胞炎症反应的抑制作用

目的 研究冬凌草甲素对脂多糖(LPS)诱导的Raw264.7巨噬细胞炎症反应的影响.方法 选用小鼠巨噬细胞Raw264.7,CCK-8法确定冬凌草甲素作用的最适浓度;设立正常对照组、模型对照组(LPS组)、实验组(冬凌草甲素预处理+LPS组)和阳性药组(地塞米松预处理+LPS组),实时定量PCR法检测TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-10和TLR4 mRNA表达水平的改变;Western blot法检测NF-κB p65、磷酸化p65(p-p65)蛋白表达水平的改变.结果 冬凌草甲素作用于Raw264.7细胞的最佳浓度为10 μmol/L;与LPS组比较,冬凌草甲素预处理实验组Raw264.7细胞内TNF-α、IL-1β和IL-6 mRNA表达水平明显下降,IL-10 mRNA表达水平明显升高,TLR4基因表达降低,NF-κB活化入核减少.结论 冬凌草甲素能下调LPS诱导的Raw264.7细胞促炎因子表达,其抗炎免疫作用机制与抑制TLR4-NF-κB信号通路的活化有关.     

实验大鼠矽肺诊断生化指标的探讨

本文对三组实验大鼠肺组织七项生化指标、血和脉冲洗液的脂质含量进行测定,结果经方差分析,矽肺组大鼠各项生化指标数值均高于正常组(P<0.01),治疗组低于矽肺组(P<0.01);肺组织七项生化指标的逐步回归,各组肺组织磷脂对肺胶原的作用均有显著性;血脂与肺组织磷脂相关经判别分析,正常组与矽肺组、矽肺组与治疗组的判别率分别为100％,治疗组与正常组判别率为78.7％。据此结果认为,血磷脂可以作为实验矽肺诊断的辅助指标,及早预报矽肺和判别疗效。