六亚甲基二乙酰胺对粘液表皮样癌细胞p21、PCNA、CyclinD_1表达的影响

目的　探讨分化诱导剂六亚甲基二乙酰胺 (HMBA)诱导人粘液表皮样癌细胞后 ,p2 1、增殖细胞核抗原 (PCNA)和CyclinD1 表达的变化。方法　用 2mmol/LHMBA对培养的粘液表皮样癌细胞进行体外诱导 72h后 ,分别采用免疫组织化学、图像分析等方法对处理与未处理细胞的p2 1、PCNA和CyclinD1 表达变化进行定量分析。结果　HMBA处理的粘液表皮样癌细胞p2 1表达明显高于对照组 (P <0 .0 1 ) ;PCNA和CyclinD1 表达明显低于对照组(P <0 .0 1 )。结论　HMBA通过影响p2 1、PCNA和CyclinD1 的表达而发挥对粘液表皮样癌细胞的抑制增殖作用     

APCMin/+结直肠癌癌前病变小鼠模型的生物学特性

目的 研究C57BL/6J-APCMin/+小鼠肠道腺瘤的生物学特性.方法 记录APCMin/+小鼠的繁育情况,通过统计不同周龄小鼠小肠及大肠腺瘤的数目和总体积,观察其肠道腺瘤的发生、发展规律;通过病理组织学切片,观察腺瘤的病理学变化;通过免疫组织化学染色,观察WNT信号通路相关基因的表达情况.结果 APCMin/+小鼠9周龄时肠道开始有腺瘤发生,24周龄时多数小鼠出现死亡.从9～24周龄,腺瘤体积持续增大,但小肠腺瘤数目不再增加.免疫组化染色显示腺瘤中β-catenin入核,启动WNT信号通路下游原癌基因cyclinD1活化.结论 APCMin/+小鼠是良好的结直肠癌前病变动物模型.     

命运分子cNumb在原肠期胚胎的表达及其生物信息学分析

目的 探讨命运分子cNumb在原肠期胚胎中的表达情况及其基因和编码蛋白的基本生物学特征.方法 利用原位杂交技术检测cNumb基因在原肠期鸡胚中的表达情况,同时应用生物学软件和在线平台对cNumb基因及其编码蛋白进行生物信息学分析.结果 cNumb mRNA在鸡胚4期开始表达于原条顶端,随发育过程逐渐扩展至亨氏节、头突和神经管,但表达区域仍相对集中.Numb基因在不同物种中具有较高保守性,cNumb编码的蛋白属于胞内蛋白,包含磷酸酪氨酸相互作用结构域和多个潜在磷酸化位点,可参与调节多种细胞生物学过程.结论 通过生物信息学分析获得了cNumb基因及其蛋白的生物学特征,为进一步研究Numb在胚胎神经发育中的调控机制奠定了基础.     

涎腺恶性肌上皮瘤的免疫组织化学研究

目的　探讨涎腺恶性肌上皮瘤的临床病理特征及生物学行为。方法　采用组织病理学和免疫组化方法对 2 2例恶性肌上皮瘤进行分析。结果　好发于腮腺和腭腺 ;男性多见 (男女之比 2 3∶1) ;中位年龄4 9岁。病理特征为透明细胞型和上皮样细胞型多见 ,呈巢索状分布 ;细胞异型性明显 ,有病理性核分裂像 ;广泛浸润周围组织。免疫组化染色Actin、Ck 18、EGFR、TGFβ均呈明显的强阳性表达 ;PCNA阳性表达的平均增殖指数是 2 2 8%± 6 93,以透明细胞型的PI值为最高 ;癌基因C erbB 2、抑癌基因P53分别呈 63 6%和31 8%的阳性表达 ,各型的表达也以透明细胞型为最高。结论　恶性肌上皮瘤是一种上皮性肿瘤 ,其亚型透明细胞型恶性程度较高。C erbB 2、P53和PCNA的异常表达及协同作用在恶性肌上皮瘤的发生发展中起重要作用。     

鼻咽癌放射敏感性异质性的形态学差异观察

目的探讨鼻咽癌放射敏感性异质性与形态学变化的相关性。方法应用电镜观察并用体视学技术测算,比较鼻咽癌细胞系CNE-2Z亚克隆株H5和S1,于体内体外照射后形态学改变的差异;用流式细胞仪、荧光显微镜检测H5和S1放射后凋亡率的不同,用Western-blot检测H5和S1放射后凋亡蛋白Bcl-2表达的差异,以期探讨其形态学异质性机制。结果H5和S1照射后形态学改变差异有显著性;照射后的H5比S1凋亡率高,对射线敏感;S1细胞的各个照射剂量组Bcl-2蛋白表达无明显差异;而H5细胞的各个照射剂量组Bcl-2蛋白表达随照射剂量的增加而递减。结论H5、S1照射后形态学的差异变化可用于预测其放射敏感性的异质性。     

冰冻切片制作方法的改良

目的探讨使用7.5%明胶-15%蔗糖(w/v)代替OCT包埋剂对冰冻切片技术的改良。方法4.0%的多聚甲醛固定组织后,7.5%明胶-15%蔗糖代替OCT包埋剂包埋,经-80℃冰箱冷冻后,冰冻切片机进行切片。结果使用7.5%明胶-15%蔗糖代替OCT包埋组织后可以顺利的进行冰冻连续切片。结论实验结果证实,7.5%明胶-15%蔗糖替代OCT包埋剂后切片可以打破冰冻切片不能连续切片的常规,大大缩短了制片时间及节省了实验材料,并且切片效果良好、组织切片完整、厚薄均匀、不易形成皱折。     

P-选择素在基因敲除小鼠肺转移中的作用研究

目的探讨P-选择素对小鼠黑色素瘤肺转移的影响。方法将体外培养的B16黑色素细胞株通过小鼠的尾静脉注射到小鼠背景为C57／BL（C57）的P-选择素敲除的小鼠和C57小鼠的体内。建立转移瘤瘤模型,第21天断颈处死小鼠,计数转移到肺表面的结节的数目,HE染色进一步确定转移结节。结果P-选择素敲除小鼠肺表面转移的肿瘤结节的数目明显比C57小鼠少,两者比较差异有统计学意义（P〈0．01）。HE染色证实小鼠肺组织中有B16细胞的肺转移灶。结论P-选择素缺失可能参与抑制了黑色素瘤的肺转移。     

小分子RNA干扰靶向巨噬细胞移动抑制因子对大肠癌影响的实验研究

目的 分析靶向巨噬细胞移动抑制因子的小分子干扰RNA(MIFsiRNA)对大肠癌生长与荷瘤小鼠生存质量的影响,并探讨其作用机制.方法 利用盲肠造疝原位接种瘤块法建立大肠癌动物模型.将成功建模后的BALB/C小鼠随机分为3组,每组10只,每周2次分别给予DEPC水、MIFsiRNA(0.15 nmol/g)和非特异性siRNA(0.15 nmol/g)瘤内注射,每天称量各组小鼠的饮水、饮食量和体重,每周测量1次肿瘤体积.4周后处死小鼠,称取肿瘤重量,用ELISA法和免疫组织化学法检测小鼠血清和组织中的MIF水平,分光光度法检测肿瘤组织中Caspase-3蛋白的表达,TUNEL法检测肿瘤组织中凋亡细胞数.结果 MIFsiRNA干预组小鼠血清中MIF表达比其他两组低[(22±6) ng/ml)比(32±8)ng/ml、(33±8) ng/ml,P＜0.01],组织中MIF阳性细胞数比其他两组少[(85±20)/500个比(423±23)/500个、(442±31)/500个,P＜0.01];干预后第3周与第4周MIFsiRNA干预组小鼠肿瘤体积均明显小于其他两组(P＜0.01).处死小鼠后肿瘤重量也明显轻于其他两组[(1.93±0.21)g比(4.40±0.30)g、(5.25±0.44)g,P＜0.01];建模后15～31 d饮水量较其他两组多(P＜0.01),建模后8～31 d饮食量也较其他两组多(P＜0.01),3组小鼠体重变化之间相比差异无统计学意义(P＞0.05);MIFsiRNA干预组小鼠肿瘤组织中Caspase-3蛋白表达比其他两组高[(0.74±0.06) μg比(0.57±0.08)μg、(0.56±0.02)μg,P＜0.01],凋亡细胞数较其他两组多[(12±2)/100个比0、0,P＜0.01].结论 敲低MIF基因表达可以抑制大肠癌的生长,提高荷瘤小鼠的生存质量,其可能的作用机制是激活Caspase-3促进细胞凋亡.

Abstract：

Objective To analyze the effect of siRNA targeting MIF( MIFsiRNA) on the growth of colorectal cancer xenografts and the life quality of tumor-bearing mice.Methods BALB/C mouse model carring colorectal cancer was established.Thirty mice were divided into three groups randomly and managed respectively with intratumor injection of DEPC water, MIFsiRNA(0.15 nmol/g) and non-specific siRNA (0.15 nmol/g), respectively twice a week for consecutively 4 weeks.Drinking water, fodder consumed and body weight was recorded daily, and tumor volume was measured once a week.Mice were sacrificed after four weeks.ELISA and immunohistochemistry were used to detect the expression of MIF in serum and in tumor tissues.Spectrophotometric detection was used to detect caspase-3 protein.TUNEL was used to detect apoptotic cells.Results MIF expression in serum in MIFsiRNA group was lower than the other two groups [(22 ± 6) ng/ml vs (32 ± 8) ng/ml and (33 ± 8) ng/ml, P ＜ 0.01]; MIF expression in tissues was less than the other two groups [(85 ± 20) /500 vs.(423 ± 23) /500 and (442 ± 31) /500, P ＜ 0.01]; Tumor was smaller than the other two groups at third and fourth week (P ＜ 0.01) ; Tumor weight was significantly less than the other two groups [(1.93 ±0.21) g vs (4.40 ±0.30) g and (5.25 ±0.44) g, P＜0.01]; Mice in MIFsiRNA group were healthier than the other two groups as judged by water and fodder consumption (P ＜ 0.01 ) , while weight change was not significantly different among the three groups ( P ＞ 0.05 ).Caspase-3 protein in tissues was higher than the other two groups [(0.74 ±0.06) μg vs (0.57 ±0.08) μg and (0.56 ±0.02) μg, P ＜0.01]; Apoptosis cells in tissues were higher than the other two groups [(12 ± 2)/ 100 个vs 0 and 0, P ＜ 0.01].Conclusions Knockdowning MIF gene expression inhibits the growth of colorectal cancer xenografts and improves life quality of tumor-bearing mice, possibly by a mechanism in which MIFsiRNA activates caspase-3 promoting cell apoptosis.