比那地尔与肺动脉平滑肌细胞的增殖和凋亡

目的:研究钾通道开放剂比那地尔(Pin)对大鼠肺动脉平滑肌细胞(PASMC)增殖和凋亡的作用.方法:通过非核素标记细胞增殖检测、3H-TdR掺入、形态学、流式细胞术等方法研究Pin对大鼠PASMC增殖和凋亡的作用.结果:25～500 μmol/L的Pin呈剂量依赖性地减少大鼠PASMC的细胞数和DNA合成,500 μmol/L的Pin显著减少S期和G2/M期的细胞比例,增加G0/G1期细胞的比例.50～500 μmol/L的Pin呈剂量依赖性地增加大鼠PASMC的凋亡率.结论:钾通道开放剂抑制大鼠PASMC增殖并促进其凋亡.钾通道开放剂可能成为今后预防和控制低氧性肺动脉高压血管重建的有效药物.     

钩藤碱抑制麻醉大鼠颈动脉窦压力感受性反射的研究

目的 研究钩藤碱(Rhy)对颈动脉窦压力感受性反射(CSB)的作用并探讨其作用机制.方法 利用隔离灌流大鼠颈动脉窦技术,确定各项功能参数,如阈压(TP)、饱和压(SP)、平衡压(EP)、工作范围(OR)、最大斜率(PS)和平均动脉压反射性下降幅度(RD)等.Rhy(10、50、100 μmol/L)溶于K-H液后灌流窦区,以斜坡方式升降窦内压来观察Rhy对CSB的影响.分别预先灌流一氧化氮合酶抑制剂L-NAME,钾通道阻断剂四乙铵(TEA)和L-型钙通道开放剂Bay K8644后再给予Rhy,观察它们对Rhy作用的影响.结果 Rhy浓度依赖性地抑制了CSB, 使其各功能参数改变, TP和SP增大,PS和RD均减小.Rhy的抑制作用不能被L-NAME(300 μmol/L)和 TEA(1 mmol/L)预处理所取消,而可被Bay K8644 (500 nmol/L)明显减弱.结论 Rhy抑制了CSB,此作用可能是通过减弱压力感受器的牵张敏感性离子通道的钙内流来实现,而与NO和钾通道无关.     

钾通道阻滞剂对人肺腺癌细胞增殖和凋亡的影响

目的研究电压依赖性延迟整流钾通道阻断剂4-氨基吡啶(4-aminopyridine,4-AP)、钙离子激活钾通道阻断剂四乙铵(tetraethylammonia,TEA)对人肺腺癌细胞(AGZY-83-a)的影响,并探讨人肺腺癌细胞株凋亡的机制.方法体外细胞培养法培养人肺腺癌细胞株,采用MTT法检测不同浓度4-AP、TEA对细胞增殖的影响.透射电镜、流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡情况.比色法检测细胞内Caspase-3活性改变.结果不同浓度的4-AP、TEA作用于细胞48h后,与对照组相比各组吸光度值(A490)均明显降低(n=10,P＜0.001),并且呈浓度依赖关系.4-AP、TEA组的IC50为3.59mmol/L和3.97mmol/L.4-AP及高浓度的TEA使人肺腺癌细胞株细胞凋亡率增加.经4-AP、TEA处理48h的AGZY-83-a细胞内Caspase-3的A405较正常对照组有显著增加(n=6,P＜0.001).结论钾通道阻滞剂4-AP、TEA对AGZY-83-a细胞增殖有明显的抑制作用,抑制率与药物浓度正相关.诱导人AGZY-83-a细胞凋亡,4-AP和TEA诱导AGZY-83-a细胞凋亡的过程中细胞内Caspase-3活性增加.     

钾通道阻断剂和一氧化氮对肺动脉平滑肌细胞钾电流的作用

目的：研究钾通道阻断剂、一氧化氮（NO）对继代培养大鼠肺动脉平滑肌细胞（PASMC）钾电流（IK）的作用。方法：使用全细胞膜片钳技术观察继代培养大鼠PASMC IK及钾通道阻断剂格列本脲（Gli），四乙胺（TEA），4－氨基吡啶（4－AP）和NO供体S－亚硝基乙酰青霉素胺（SNAP）对其的作用。结果：继代培养大鼠PASMC较急性分离者之IK明显降低。4－AP和高浓度TEA显著降低继代培养大鼠PASMC之IK，SNAP显著增加继代培养大鼠PASMC之IK。结论：继代培养大鼠PASMC钾通道特性发生改变，但通道阻断剂和NO仍能显著改变其活性。     

钾通道阻断剂四乙铵对氧葡萄糖剥夺诱导大鼠海马神经元死亡的保护作用

目的研究钾通道阻断剂四乙铵(TEA)对氧葡萄糖剥夺(OGD)诱导的培养海马神经元死亡的保护作用。方法培养12 d的海马神经元培养基更换为Earle′s平衡盐溶液(EBSS)后置于37℃三气缺氧(N2:CO2:O2=94%:5%:1%)培养箱内培养,4 h后恢复正常条件培养,同时在培养液内加入不同浓度钾通道阻断剂TEA,继续培养24 h后噻唑蓝(MTT)比色法检测神经元死亡情况。结果OGD组、OGD+不同浓度TEA组与对照组比较,海马神经元细胞存活率明显降低(P<0.05);OGD+10μmol.L-1TEA组和OGD+500μmol.L-1TEA组与OGD组比较,海马神经元细胞存活率明显升高(P<0.05);而OGD+1μmol.L-1TEA组和OGD+5 mmol.L-1TEA组与OGD组比较,海马神经元细胞存活率差异无统计学意义(P>0.05)。结论钾通道阻断剂TEA能保护OGD诱导的培养海马神经元免于死亡,提示某些类型的钾通道活动增强可能参与了OGD诱导的培养海马神经元死亡。     

C型利钠肽舒张兔主动脉作用机制的探讨

目的 探讨C型利钠肽(CNP)舒张血管的受体和通道机制.方法 采用兔胸主动脉环张力测定法,观察CNP和C型利钠肽受体(NPR-C)激动剂cANF4-23对肾上腺素(NE)10 μmol/L或氯化钾(KCI)60 mmol/L预收缩血管的舒张作用,及多种钾通道阻断剂对两者舒血管效应的影响.结果 1 μmol/L CNP和cANF4-23对血管的最大舒张率分别为(33.5±5.9)%、(38.4±10.6)%,两组舒血管作用比较差异无统计学意义(P>0.05);NPR-C受体阻断剂能减弱CNP的舒血管作用[(19.8±8.3)%];高钾预收缩后CNP、cANF4-23对血管舒张作用明显降低(P<0.01);优降糖或氯化钡能明显抑制CNP的血管舒张作用(P<0.05);氯化钡使cANF4-23的血管舒张作用明显降低(P<0.05).结论 NPR-C/内向整流钾通道(KIR)、NPR-C/钙通道和B型利钠肽受体(NPR-B)/ATP敏感钾通道(KATP)参与了CNP对兔主动脉的舒张作用.     

吡那地尔对大鼠局灶性脑缺血再灌注后caspase-3及Bcl-2蛋白表达的影响

目的探讨吡那地尔对大鼠局灶性脑缺血再灌注后Caspase-3及Bcl-2蛋白表达的影响。方法40只Wistar雄性大鼠随机分为假手术组、对照组、KATP开放剂治疗组(开放剂组)及KATP开放剂 阻断剂治疗组(阻断剂组)。应用线栓法制备大鼠大脑中动脉缺血模型(MCAO),应用TTC染色检测脑梗死体积,应用TUNEL法检测神经元凋亡,应用免疫组化方法检测caspase-3及Bcl-2蛋白表达。结果开放剂组脑梗死体积显著小于对照组和阻断剂组(P<0.01),对照组与阻断剂组之间差异无显著性(P>0.05);开放剂组神经元凋亡数较对照组和阻断剂组显著减少(P<0.01)。对照组与阻断剂组之间差异无显著性(P>0.05);开放剂组caspase-3蛋白表达显著少于对照组和阻断剂组(P<0.01),对照组与阻断剂组之间差异无显著性(P>0.05);开放剂组Bcl-2蛋白表达显著多于对照组和阻断剂组(P<0.01),对照组与阻断剂组之间差异无显著性(P>0.05)。结论KATP通道开放剂能显著减轻脑缺血再灌注后脑梗死体积、减少Caspase-3蛋白表达、增加Bcl-2蛋白表达、抑制神经元凋亡,对脑缺血再灌注损伤发挥保护作用。     

一氧化氮对肺动脉平滑肌细胞增殖和凋亡作用的研究

目的：研究一氧化氮（NO）对肺动脉平滑肌细胞（PASMC）增殖和凋亡的作用。方法：通过非核素标记细胞增殖检测试剂盒、^H-TdR掺入、形态学、流式细胞术等方法研究NO与PASMC增殖和凋亡的关系。结果：25－500μmol/L的NO供体S－亚硝基乙酰青霉胺（SNAP）呈剂量依赖性地减少PASMC的细胞和DNA合成，500μmol/L的SNAP显著减少S期和G2／M期的细胞比例，增加G0／G1期的细胞比例。100－500μmol/L的SNAP呈剂量依赖性地增加PASMC的凋亡率。结论：NO可抑制PASMC增殖并促进其凋亡。早期给予NO对肺动脉高压血管重建可能有一定的预防作用。     

紫杉醇对卵巢癌细胞作用的浓度依赖性及其机制探讨

目的 探讨不同浓度紫杉醇对卵巢癌细胞发挥抗癌效应的内在机制.方法 以0.01、0.1、1、10、50 μmol/L紫杉醇作用于人卵巢癌细胞系A2780,采用碘化丙啶(PI)单染法流式细胞术检测不同浓度紫杉醇作用下细胞周期的变化情况.进而对细胞进行同步化处理,采用PI单染法流式细胞术分析低浓度(0.01 μmol/L)紫杉醇对细胞周期的影响;Annexin Ⅴ/PI双染法流式细胞术分析高浓度(50 μmol/L)紫杉醇对A2780细胞坏死的影响.结果 ①紫杉醇浓度为0.1、1、10 μmol/L时,G2/M期细胞比例明显高于0.01 μmol/L组(P<0.01)和50 μmol/L组(P<0.01).②A2780细胞经同步化处理后给予0.01 μmol/L紫杉醇,经过一个细胞倍增时间未观察到G0/G1期阻滞.③0.01 μmol/L组,1 μmol/L组坏死细胞比例明显低于50 μmol/L组(P<0.01).结论 在0.1～10 μmol/L 的浓度范围内,紫杉醇可能通过诱导G2/M期阻滞使卵巢癌细胞发生凋亡,浓度为0.01 μmol/L时紫杉醇诱导凋亡与G0/G1期或G2/M期阻滞均无关,浓度为50 μmol/L时紫杉醇可能主要通过诱导细胞坏死发挥抗癌效应.     

四乙胺对肝星状细胞钾通道及细胞增殖的影响

目的 探讨肝星状细胞钾通道对肝星状细胞增殖的影响,观察钾通道阻滞剂四乙胺(tetraethylammonium,TEA)对肝星状细胞增殖和钾离子电流的作用.方法 以TEA作用于传代培养的肝星状细胞,通过MTT法、流式细胞术及单通道细胞膜片钳技术,分别检测TEA对肝星状细胞的增殖、细胞周期及细胞膜钾通道的影响.结果 TEA对肝星状细胞的增殖抑制效应具有时间依赖与剂量依赖的特点,使细胞周期阻滞于G0/G1期.单通道细胞膜片钳发现肝星状细胞上有大电导离子通道存在,其电导值为(210.86±5.49)ps(n=7).TEA可明显减少外向该离子通道开放概率,TEA 0.0、2.5、5.0、10.0、20.0和40.0mmol/L组的开放概率为(0.327±4.80)、(0.316±4.38)、(0.279±1.72)、(0.245±1.21)、(0.194±1.13)和(0.118±1.62)(F=22.561,其中10.0、20.0和40.0mmol/L组分别与0.0mmol/L组比较,差异有统计学意义(P＜0.01).结论 肝星状细胞上有大电导钾通道存在,阻断钾通道可抑制肝星状细胞增殖,钾通道对细胞增殖可能具有调控作用.     

ATP敏感性钾通道及其心血管保护作用

Noma[1]首先利用膜片钳技术在豚鼠心室肌细胞发现一种弱的内向整流钾通道,其特征是通道活性随胞内ATP浓度升高而被显著抑制,因此将其命名为ATP敏感性钾通道(ATP-sensitive potassium channel,KATP).     

氯离子通道蛋白1的细胞转染定位

目的 利用重组的胞内氯离子通道蛋白CLIC1蛋白的过表达来了解该蛋白质在细胞中的定位。方法 用免疫荧光的方法观察CLIC1蛋白在细胞中的定位。结果 荧光显微镜观察表明CLIC1蛋白虽然在细胞核中分布较为集中，在细胞质中也有相当的分布。结论 实验结果为进一步的了解CLIC1蛋白的功能提供了细胞学基础。     

钾离子通道和Andersen''s综合征

K^ 通道在所有可兴奋性和非兴奋性细胞的重要信号传导过程中扮演着重要角色，其家族成员在调节神经递质释放，心率，胰岛素分泌，神经细胞分泌，上皮细胞电传导，骨骼肌收缩以及细胞容积的过程中发挥了重要作用，在编码K^ 通道的基因发生突变的情况下，可引起K^ 通道病，Andersen's(AS)综合征由于在表达Kir2.1的KCNJ2基因上发生了突变，而Kir2.1是K^ 通道的1个α亚基，它在很多类型细胞中可以决定并稳定静息膜电位，这种罕见的家族性疾病以3个主要的临床症状为特征；骨结构发育不良，周期性麻痹和心率不齐，我们将从3个方面阐述上述内容；K^ 通道的结构，特别是Kir家族；K^ 通道病，Kir2.1与AS综合征。     

阴维脉之维络观

阴维脉是奇经八脉之一。古今以来文献对阴维脉的研究较少,对于其交会穴的研究不丰富。本文通过对阴维脉古今文献的分析总结,阴维脉交会穴的功效分析,结合《难经》＂阴维维于阴＂之条文,探讨阴维脉及其交会穴维护、联络的特点,以充实阴维脉经络理论,对临床起指导意义。     

Inhibitive effect of loureirin B plus capsaicin on tetrodotoxin-resistant sodium channel

OBJECTIVE

To investigate whether the effect of loureirin B plus capsaicin on tetrodotoxin-resistant (TTX-R) sodium channel.

瞬时受体电位M8型离子通道选择性滤器的三维结构计算建模

构建瞬时受体电位M8型（TRPM8）离子通道选择性滤器结构域的三维结构模型。 在Rosetta计算结构生物学工具包中,使用基于运动回路闭合算法的从头计算,对TRPM8离子通道选择性滤器结构域进行多轮计算建模。 经过9轮计算得到了能量最低且结构收敛的TRPM8通道选择性滤器结构域的三维结构模型,发现D918位点的侧链并不指向离子流过的孔区中心,而Q914、D920和T923位点的侧链指向孔区中心;糖基化位点N934位于孔区外侧,其侧链指向胞外水环境。 构建了TRPM8通道选择性滤器结构域的三维结构模型,为理解该通道的离子选择性及相关机制提供了较为可靠的结构信息。      

酵母双杂交技术筛选胞内氯离子通道蛋白1结合蛋白

目的应用酵母双杂交技术研究胞内氯离子通道蛋白1（CLIC1）的结合蛋白,以进一步了解其功能。方法首先将CLIC1的全长cDNA连接到pGBKT7载体中,重组质粒pGBKT7-CLIC1转化入酵母菌株AH109,再将人Hela细胞的cDNA文库转化AH109细胞,用α-gal检测阳性克隆。所获得阳性克隆测序后进行BLAST检索。结果用酵母双杂交方法筛选到了16个阳性克隆,其中有4个是已知蛋白的基因。结论利用酵母双杂交系统筛选到了数个结合蛋白。     

《医心方》中的经脉图

《医心方》中的经脉图是现存最早的经脉图,对研究经脉循行和三阴交,大都,太白、公孙等穴的定位和排列顺序等学术问题有重要参考价值。     

黄芪总皂甙对单个钙离子通道活动的影响

采用连细胞电压钳方法，在培养的大鼠乳鼠单个心肌细胞上记录Ｌ、Ｔ、Ｂ三型钙通道的单通道活动。浸浴液中加入黄芪总皂甙２００μｇ·ｍＬ－１后，开放时间、关闭时间、开放概率、电流幅值四项钙通道指标无明显改变。说明黄芪总皂甙对钙通道无影响。     

人胃癌SGC7901细胞膜钾离子通道的特性

目的　研究人胃癌细胞系 SGC790 1细胞膜钾离子通道特性 .方法　以人胃癌细胞系 SGC790 1为研究对象 ,采用穿孔膜片钳全细胞记录法 .结果　人的胃癌 SGC790 1细胞系的静息膜电位为 (- 32 .2± 2 .2 ) m V,在钳制电压 - 40 m V,阶跃电压在 - 80～ +80 m V,记录到一种跨膜电流 ,该跨膜电流具有电压依赖、外向整流特性 ,该电流在延迟 2 5 ms后最大激活 ,80 0 m s内不失活 ,翻转电位在 - 6 0～ - 40 m V,能被已知的钾通道的阻断剂 4- AP或 TEA阻断 .结论　在人胃癌SGC790 1细胞系细胞膜上存在延迟整流钾离子通道 .