HIF-1参与KATP通道对神经元缺氧损伤保护作用

目的 探讨三磷酸腺苷(ATP)敏感性钾通道(KATP通道)在缺氧中对海马神经元的保护作用机制.方法 比较对照组、单纯缺氧组、KATP通道激动剂+缺氧组、KATP通道阻断剂+缺氧组中神经元缺氧诱导因子1α亚基(HIF-1α)的蛋白表达、DNA断裂、以及神经元存活情况.结果 试验持续8,12,24 h后,正常氧分压组细胞存活率为(100±0.98)%,缺氧8,12,24 h后,细胞的存活率分别降至(85.76±3.31)%,(80.13±1.76)%,(72.24±3.87)%,差异均有统计学意义(P＜0.05);缺氧12,24 h后,缺氧+二氮嗪组细胞凋亡率分别为(8.1±3.1)%,(18.4±2.3)%,缺氧+甲糖宁组分别为(32.5±1.6)%,(45.7±3.4)%,与单纯缺氧组的(20.3±2.2)%,(31.6±1.7)%比较,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 KATP通道可以通过上调HIF-1α的蛋白表达水平,对缺氧中的海马神经元起到保护作用.     

重度缺氧中海马神经元KATP通道的表达改变

目的 探讨重度缺氧状态中ATP敏感性钾通道(KATP)通道在海马神经元上的表达变化. 方法 取培养1周的新生大鼠海马神经元分为4组:第1组为正常对照组,在正常氧状态中(5%CO_2、95%空气)孵育8 h;第2组为处理组,在模拟的缺氧状态(5% CO_2、95%N_2)孵育8h(单纯缺氧组);第3组为二氮嗪+缺氧组,在缺氧处理的同时添加KATP通道激动剂二氮嗪(100μmo1/L1,处理时间为8 h;第4组为甲糖宁+缺氧组,在缺氧处理的同时添加KATP通道阻断剂甲糖宁(100 μmol/L),处理时间为8h.利用MTT、免疫印迹及RT-PCR技术,比较4组细胞存活情况以及缺氧状态中神经元上KATP通道的表达改变. 结果 缺氧8h后,二氮嗪能明显降低细胞的凋亡数量,甲糖宁使细胞的凋亡数量增加,与正常对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.05).缺氧状态中KATP通道的SUR1亚基的表达明显增加,而Kir6.2亚基表达量则无明显改变,与正常对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.05). 结论 KATP通道的活性及表达改变,对缺氧中的海马神经元的保护起到重要作用.     

BKCa通道的表达降低细胞蛋白酪氨酸磷酸化水平

目的探讨BKCa通道对细胞蛋白酪氨酸磷酸化水平的调节作用。方法观察转染 BKCa通道及共转染BKCa通道与v-Src对HEK293细胞蛋白酪氨酸磷酸化水平的影响。比较BKCa通道激动剂NS1619和阻断剂paxilline对培养海马神经元蛋白酪氨酸磷酸化水平的影响。结果 HEK293细胞表达BKCa通道后细胞蛋白酪氨酸磷酸化水平降低,同时BKCa通道能够降低转染v-Src 后的细胞蛋白酪氨酸磷酸化水平。BKCa通道激动剂NS1619能够降低海马神经元蛋白酪氨酸磷酸化水平,阻断剂paxilline能增加细胞蛋白酪氨酸磷酸化水平。结论 BKCa通道的表达可以降低细胞蛋白酪氨酸磷酸化水平。     

新形势下高校兼职辅导员工作的思考

有效的学生辅导员工作，在高校人才培养中的作用是举足轻重的。高校辅导员队伍素质的提高既是一个目标，也是一个过程，就如何建设一支高素质的兼职辅导员队伍进行深入的探讨。     

钾通道阻断剂四乙铵对氧葡萄糖剥夺诱导大鼠海马神经元死亡的保护作用

目的研究钾通道阻断剂四乙铵(TEA)对氧葡萄糖剥夺(OGD)诱导的培养海马神经元死亡的保护作用。方法培养12 d的海马神经元培养基更换为Earle′s平衡盐溶液(EBSS)后置于37℃三气缺氧(N2:CO2:O2=94%:5%:1%)培养箱内培养,4 h后恢复正常条件培养,同时在培养液内加入不同浓度钾通道阻断剂TEA,继续培养24 h后噻唑蓝(MTT)比色法检测神经元死亡情况。结果OGD组、OGD+不同浓度TEA组与对照组比较,海马神经元细胞存活率明显降低(P<0.05);OGD+10μmol.L-1TEA组和OGD+500μmol.L-1TEA组与OGD组比较,海马神经元细胞存活率明显升高(P<0.05);而OGD+1μmol.L-1TEA组和OGD+5 mmol.L-1TEA组与OGD组比较,海马神经元细胞存活率差异无统计学意义(P>0.05)。结论钾通道阻断剂TEA能保护OGD诱导的培养海马神经元免于死亡,提示某些类型的钾通道活动增强可能参与了OGD诱导的培养海马神经元死亡。     

PBL教学法在应急型公共卫生人才培养中的应用

在教学中引入PBL教学法，实现由静态的知识传授式教学向动态的以问题为基础的启发式教学的转变。突出对学生综合能力的培养，探索并实践我国高素质应急型公共卫生人才培养模式。     

L-型钙通道α1C基因片断在大肠杆菌中的谷胱甘肽巯基转移酶融合表达

目的构建小鼠L-型钙通道CaV1-2α1，亚基（α1C）末端的原核重组载体并进行表达和鉴定。方法根据小鼠α1C基因序列设计合成特异性引物，PCR扩增出其C末端（1808-2139）基因，插入谷胱甘肽巯基转移酶（GST）融合表达载体pGEX—KG中，在大肠杆菌BL21中诱导GST融合蛋白的表达。结果构建的重组质粒经酶切后可见约1000bp、5000bp大小的片段，与预期结果一致，测序结果表明序列正确。在异丙基-β-硫代半乳糖苷（IPTG）的诱导下，重组菌表达出一个分子量约为70ku的表达产物，Westemblot结果证实重组GST融合蛋白可与针对α1C亚基C末端的抗体发生特异性的反应。结论小鼠α1C亚基的C末端编码序列已被克隆至GST融合表达载体pGEX-KG中，并在大肠杆菌BL21中获得表达．为进一步纯化和研究相互作用蛋白奠定了基础。     

BNIP3干扰质粒的构建及鉴定

目的 构建大鼠Bcl-2/E1B-19K-interacting protein 3(BNIP3)干扰质粒,研究其对BNIP3蛋白表达水平的影响.方法 利用Invitrogen公司在线软件设计大鼠BNIP3(NM053420)干扰片段,合成互补的单链寡核苷酸,蒋退火后形成的双链克隆人pcDNATM6.2-GW/EmGFP-miR表达载体,连接产物转化感受态细胞,增菌,质粒小量提取并测序.将构建的干扰质粒与大鼠BNIP3表达质粒共转染到HEK293细胞中,采用实时荧光定量PCR和Westem blotting检测对目的 基因的干扰情况.结果 构建的2个干扰质粒经测序证实序列正确,与BNIP3表达质粒共转染后显著抑制外源性BNIP3的mRNA和蛋白表达.结论 成功构建了大鼠BNIP3干扰质粒,为进一步研究BNIP3的功能打下了基础.     

过敏性哮喘豚鼠气道平滑肌三磷酸腺苷敏感钾通道动力学特性

目的探讨过敏性哮喘豚鼠气道平滑肌三磷酸腺苷敏感钾通道(KATP通道)的单通道动力学特性变化。方法将12只4月龄豚鼠随机分为对照组和过敏性哮喘组,每组6只。急性分离出豚鼠3～4级支气管的平滑肌细胞,应用膜片钳内面向外式记录气道平滑肌KATP通道单通道电流,并分析其动力学特性。结果当钳制电压在-60 mV时,过敏性哮喘组通道平均开放时间明显短于对照组(P<0.05);当钳制电压在-40 mV和-60 mV时,过敏性哮喘组通道平均关闭时间明显长于对照组(P<0.05)。当钳制电压在-40 mV和-60 mV时,过敏性哮喘组通道开放概率明显低于对照组(P<0.01)。结论过敏性哮喘时KATP通道单通道动力学特性发生改变,使气道平滑肌对抗去极化能力减弱,可能是气道高反应性中平滑肌收缩反应增强的重要原因之一。     

ATP敏感性钾通道的活性改变对胶质瘤细胞增殖的影响

目的:探讨KATP通道的功能改变与胶质瘤细胞增殖的关系.方法:鉴定KATP通道在胶质瘤细胞上的表达,并比较对照组、KATP通道激动剂、KATP通道阻断剂影响胶质瘤细胞的增殖情况.结果:证实KATP通道在胶质瘤细胞中呈高丰度表达,KATP通道的激动剂二氮嗪(100 μmol/L)显著促进细胞增殖.KATP通道的阻断剂甲糖宁(100 μmol/L)显著性抑制细胞增殖.两者对细胞增殖的影响均呈浓度依赖方式.结论:KATP通道的确参与胶质瘤细胞增殖过程的调节,为胶质瘤的治疗提供新的靶标.